Промежуточный ацилфермент

Этот новый тетраэдрический интермедиат в конечном счете приведет к образованию цисоидного промежуточного ацилфермента, который, видимо, и будет основным продуктом. [c.250]

Возможен также поворот на 120" группы —ОСНз. В этом случае эфирная группа меняет конформацию по отношению к группе К с транс- на гош-. Этот новый тетраэдрический интермедиат, а также исходный приводят к образованию трансоидного промежуточного ацилфермента после отщепления —ОСНз-группы, которому способствует взаимодействие с орбиталями. [c.250]

В случае специфических субстратов промежуточный ацилфермент — весьма нестабильное соединение (время жизни - 0,01 с) [26, которое гидролизуется под действием воды с образованием кислоты и регенерацией свободного фермента. [c.129]

Рассмотрим экспериментальные данные по кинетике гидролиза промежуточных ацилферментов типа К—С(0)—Е, представленные на рис. 42. В случае ацилферментов, содержащих в субстратном остатке разветвленную или достаточно короткую нормальную алифатическую цепь (точки 1—12), константы скорости деацилирования укладываются в следующее корреляционное уравнение [21] [c.148]

При последующем гидролизе промежуточного ацилфермента [уравнения (4.2—4.5)] нуклеофильную атаку осуществляет молекула воды, реакционная способность которой усилена взаимодействием ее с имидазолом Н15-57 (см. рис. 32). Возможно, карбоксильная группа Азр-102 принимает участие также и на этой стадии [c.157]

Таким образом, происходящая реакция сводится к образованию промежуточного ацилфермента, а затем к переносу ациль-ного остатка к молекуле воды, если протекает гидролиз, или к иному акцептору ацетильной группы. Серии, конечно, содержится в активном центре не всех ферментов. Так, например, у рибонуклеазы его нет, и в этом ферменте, как предполагается, два остатка гистидина выполняют функцию акцептора и донора протонов. Серии и гистидин, несомненно, являются не единственными остатками, необходимыми для работы активного центра. Имеются факты, говорящие об участии триптофана в активных центрах химотрипсина, трипсина, лизоцима, однако об этом пока еще известно мало. [c.84]

Простейшая кинетическая схема, включающая образование промежуточного ацилфермента ЕА, имеет вид [c.76]

Простейшая кинетическая схе-промежуточного ацилфермента ЕА, [c.140]

Промежуточный ацилфермент. Кинетику реакции в ацил ферментном каталитическом механизме (2.61) описывает система уравнений >> Е ) [c.141]

При pH 7, 25°С константа скорости этой реакции (200 мин ) сравнима с константой для расщепления /г-нитрофенолята а-химотрипсином (180 МИН ). Стадией, определяющей скорость реакции, является ацилирование (/гг). В первом приближении это удовлетворительная модель для имитации образования промежуточного ацилфермента, хотя Н1з-57 в а-химотрипсине действует как общеосновной — общекислотный, а не нуклеофильный катализатор. [c.226]

Последующее химическое превращение сорбированной молекулы субстрата Идет через промежуточное образование ковалентного соединения, представляющего собой фермент, ацилированный по активному центру. Некоторые промежуточные ацилферменты были выделены в чистом виде [2, 7], и их образование в процессе гидролиза сложноэфирных субстратов получило подтверждение также спектрофотометриче- [c.128]

Механизм ъ инётической специфичности химотрипсина. Размер химически инертного фрагмента К в субстратной молекуле оказывает влияние не только на связывание субстрата ферментом, но, что более удивительно, иа кинетику химических стадий. Скорость как стадии ацилирования (Аг), так и гидролиза промежуточного ацилфермента [см. уравнение (4.28)] возрастает при увеличении гидрофобности фрагмента Н- Количественное описание кинетической специфичности дает уравнение [c.154]

Наиболее изученным ферментом семейства сериновых протеаз является химотрипсин. Реакции гидролиза, катализируемые этим ферментом, включают по крайней мере три кинетически различимые стадии [уравнение (6.8)]. На первой стадии, про-текаюш,ей с очень высокой (контролируемой диффузией) скоростью, образуется нековалентный фермент-субстратный комплекс. На второй стадии (стадии ацилирования) ацильная группа субстрата переносится на гидроксил серина, входящего в активный центр фермента, с одновременным выделением первого продукта (Pi) — аминной части амидного субстрата. Вслед за этим происходит гидролиз промежуточного ацилфермента с регенерацией свободного фермента и выделением карбоновой кислоты— второго продукта реакции гидролиза (Рг) [c.142]

Ограничение круга рассматриваемых реакций процессами, протекающими по типу расщепления связи ацил — X, объясняется тем, что только такой тип расщепления связей имеет биохимическое значение. Так, несмотря на то что в литературе известно много примеров реакций сольволиза эфиров, катализируемого как кислотами, так и основаниями и протекающего по типу расщепления связи алкил — кислород (т. е. Н—СОО-рНО, случаи протекания ферментативных реакций гидролиза или переноса ацильной группы по аналогичному механизму не известны. Реакции, катализируемые гидролитическими ферментами, которые наиболее изучены из ацилтрансфераз, обычно протекают по механизму двойного замещения, в результате которого образуется промежуточный ацилфермент (см. гл. 2) [c.9]

Если имеется ряд сложных эфиров с одинаковой ацильной группой, но с разными уходящими группами и эти эфиры быстро реагируют с ферментом, образуя промежуточный ацилфермент, который затем медленно гидролизуется, то максимальная скорость ферментативного гидролиза всех этих сложных эфиров должна быть одинаковой, поскольку скорость определяющей стадией будет гидролиз общего для всех случаев ацилфермента [уравнение (5), /сд]. В табл. 2 приведены в качестве примера данные по гидролизу папаином ряда сложных эфиров карбобензоксиглицина. Близкие [c.48]

Не так давно был поставлен вопрос, протекает ли катализируемый химотрипсином гидролиз амидов через промежуточный ацилфермент или же молекула амида, сорбированная на активном центре фермента, подвергается прямой атаке водой или другим акцептором. При попытке решить данный вопрос с использованием рассмотренного кинетического метода были изучены ферментативные реакции гидролиза и гидроксиламинолиза и-нитроапилида N-ацетилтирозина при различных концентрациях гидроксиламина [схема (8)] [c.51]

Если полагать, что катализируемый химотрипсином гидролиз амидов и анилидов протекает через промежуточный ацилфермент, то образование промежуточного продукта, несомненно, лимитирует скорость реакции, поскольку ферментативный гидролиз сложных эфиров с той же ацильной группой идет значительно быстрее. Тот факт, что суммарная скорость реакции, измеряемая но выделению п-нитроанилина, почти не меняется в присутствии гидроксиламина (даже в том случае, когда в присутствии 1,6 М гидроксиламина половину продукта составляет гидроксамовая кислота), действительно согласуется с представлением, что реакция протекает через общий промежуточный продукт—ацилфермент. К сожалению, в этих опытах не были порознь определены константы Михаэлиса и максимальные скорости реакции. В связи с этим очень вероятно, что высокая концентрация гидроксиламина, необходимая для образования заметных количеств гидроксамовон кислоты, неспецифически изменяет один или оба эти кинетических параметра и тем самым мешает обнаружить увеличение суммарной скорости реакции. Интерпретация результатов осложнена также тем, что фермент катализирует гидролиз образующейся гидроксамовой кислоты N-ацетил-тирозина. [c.51]

При попытке применить этот кинетический метод к исследованию гидролиза под действием химотрипсина гидроксамовой кислоты N-aцeтилтиpoзинa сравнивали степень ингибирования этой реакции, наблюдаемую в присутствии гидроксиламина, со степенью ингибирования, предсказанной на основании распределения предполагаемого промежуточного ацилфермента между реакциями гидролиза и гидроксиламинолиза [12]. Для того чтобы определить долю каждой из этих реакций, измеряли в независимом эксперименте количества гидроксамовой и свободной кислот, образующихся под действием химотрипсина из этилового эфира ацетилтирозина в присутствии различных концентраций гидроксиламина [схема (10)]. [c.52]

Результаты этих опытов не вполне согласуются с ацилферментным механизмом, однако затруднения в трактовке, возникающие вследствие зависимости отношения скоростей обеих реакций от концентрации фермента, не позволяют строго интерпретировать полученные данные. Более удивительным является тот факт, что скорость реакции синтеза гидроксамовой кислоты N-aцeтилтиpoзинa из свободной кислоты [см. нижнюю часть схемы (10)[ не обнаруживает той зависимости от концентрации гидроксиламина, которую следовало бы ожидать, если исходить из относительных скоростей гидролиза и гидроксиламинолиза предполагаемого промежуточного ацилфермента. При высоких концентрациях гидроксиламина, когда промежуточный продукт распадается главным образом с образованием гидроксамовой кислоты, эффективная константа скорости этой стадии должна быть более высокой, чем в случае реакции присоединения (или отщепления) воды. Следовательно, синтез гидроксамовой кислоты из свободной кислоты должен лимитироваться скоростью образования ацилфермента, и поэтому скорость синтеза почти не должна зависеть от концентрации гидроксиламина. Однако на опыте это не так. Для объяснения результатов следует предположить влияние некоторого неконтролируемого фактора (например, эффекта растворителя), который искажает скорость реакции так, что с увеличением концентрации гидроксиламина она перестает стремиться к пределу, или допустить, что реакция не протекает по обычному механизму с участием ацилфермента. [c.52]

Система водородных связей приводит к увеличению отрицательного заряда на головной алкоксильной грунне, что способствует, очевидно, существенному усилению ее нуклеофильности. Вклад, который вносит такое нолифункциональное взаимодействие в ускорение реакции, легко оценить, если обратиться к анализу кинетических данных для лимитирующей скорость стадии (3), представляющей собой х-идролиз промежуточного ацилфермента [c.212]

Инактивация некоторыми "синкаталитическими" ингибиторами, например, га-лоидэноллактамами [2704]- связана с образованием ковалентной связи с каким-нибудь нуклеофилом фермента, происходящим на стадии промежуточного ацилфермента. [c.253]

Иногда удается детектировать промежуточный ацилфермент с помощью спектральных методов в условиях, когда скорость его распада понижена, например в кислой среде [3200-32053 или в условиях криоэнзимологического эксперимента [2512,3206-32083 (СМ. Также разд.5.7). Однако в этом случае не всегда удается надежным образом отличить ковалентное промежуточное соединение от прочного комплекса фермент-продукт. Были предложены [3205,32093 модификации спектральных методов, существенно повышающие их точность, в том числе и методы флуоресцентного анализа, использованные для идентификации ацилфермента при катализе р-лактамазой I [3210,32113. [c.313]

Катализируемый сериновыми протеазами гидролиз субстратов, эфиров или амидов, сопровождается образованием промежуточного ацилфермента в результате ацилирования субстратом гидроксильной группы 8ег-195. В случае амидов образование ацилфермента при насыщающих концентрациях субстрата явля- [c.362]

Дело в том, что прямых данных слишком мало, чтобы можно было сделать выбор между этими двумя возможностями. Применение методов исследования быстрых реакций (включ-ая импульсное замораживание реакции), в которых использовались физиологические субстраты, никогда не позволяло обнаружить промежуточный ацилфермент. Совсем недавно были описаны два эксперимента, результаты которых противоречат друг другу. Данные опыта, в котором в качестве субстрата использовался эфирный субстрат — О- (гранс-/г-хлорцнннамоил) -Ь-р-фенил- [c.379]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология