Выделение из липидной фракции

Биохимические методы позволяют разделять, выделять и анализировать в чистом виде липидные и белковые компоненты, изучать их физико-химические свойства в свободном состоянии и в составе надмолекулярных комплексов в условиях воздействия различных внешних факторов (температуры, концентрации водородных ионов и др.), исследовать их время жизни , пути биосинтеза и распада этих компонентов. К ним относят методы выделения (недеструктивные и включаюп] ие разрушение клеток) разделения субклеточных фрагментов (хроматография, электрофорез, центрифугирование, иммуноаффинные методы) идентификации и оценки чистоты субклеточных фракций выделения органелл и мембранных систем экстракции липидов и разделения их по классам количественного определения фосфолипидов исследования трансмембранного распределения липидов солюбилизации мембранных белков, их реконструкции и определения функциональной активности реконструированных мембран, выделения и модификации мембранных белков. [c.202]

Стероидные гормоны, присутствующие в организме в ничтожном по сравнению с холестерином и желчными кислотами количестве и секретируемые в кровь, осуществляют контроль над специфическими процессами роста, нормального развития и функционирования организма. В семенниках вырабатывается андрогенный гормон тестостерон (см. том I 12.24) яичники продуцируют эстрадиол и прогестерон (см. 15.35) наряду с другими сопутствующими стероидами, которых в настоящее время известно сорок один. Неомыляемая липидная фракция мочи содержит большой набор продуктов метаболизма стероидных гормонов. Первые известные андрогенные и эстрогенные гормоны, андростерон и эстрон, были выделены именно из мочи они обладают меньшей активностью, чем истинные гормоны. Прогестерон был впервые выделен Бутенандтом (1934) из 625 кг яичников (50000 свиней) было получено 20 мг чистого гормона. Виндаус (1935) идентифицировал витамин Оз как продукт, образующийся при облучении стероидного предшественника, выделенного Брокманом (1936) из жира печени рыб. Дневная потребность в этом витамине составляет всего 5-у, но недостаток его в пище вызывает рахит — заболевание, характеризующееся размягчением костей. Исследования, проведенные Веллюзом и Хавингой 1949—1960), показали, что облучение 7-дегидрохолестерина приводиг в результате раскрытия кольца В к образованию про- [c.640]

Выделенные липидные фракции очищают далее с помощью ТСХ на силикагеле в различных системах растворителей в зависимости от состава фосфолипидной смеси [7, р. 530]. Наиболее распространены следующие системы хлороформ — метиловый спирт — уксусная кислота — вода (25 15 4 2, по объему), хлороформ — метиловый спирт — вода (65 25 4), хлороформ — метиловый спирт — 28%-ный аммиак (65 25 5) и т. д. [c.189]

Такой способ фракционирования можно сочетать с выделением пробы. Например, при исследовании липидных фракций одноклеточных организмов первой стадией является деструкция клетки, обычно выполняемая под давлением или с помощью ультразвука. В любом случае разрушаемые клетки помещают в метанольный или водный раствор. Раствор сильно подщелачивают (10%-ный раствор гидроксида натрия) и оставляют на ночь. На этой стадии большинство эфирных связей (триглицериды) гидролизуются, а свободные кислоты, конечно, полностью нейтрализуются сильным основанием. Экстракция таким неполярным растворителем, как -гептан, приводит к удалению только так называемых не омыляемых липидов (стеринов), не затрагивая заметную часть основы клеточного вещества. Большие массы остатков органического вещества клетки могут создавать затруднения при экстракции, особенно после гидролиза. Поэтому перед экстракцией удобно проводить чисто механическое разделение — удалять остатки органических веществ центрифугированием. Фракция, содержащая жирные кислоты, может быть получена подкислением водной фазы с последующей второй экстракцией гептаном. [c.516]

В липидной фракции, выделенной непосредственно из современных биологических источников, обычно находят ряд УВ, жирных кислот, спиртов, сложных эфиров и др. Смесь состоит из разнообразных веществ, но ни в коей мере не является хаотической. Структуры [c.203]

Очистка и выделение токсина из липидной фракции водорослей проводились авторами двумя способами. [c.201]

ДЛЯ изучения их химического состава. Андерсон, работавший в области химии стеринов, исследовал липидные компоненты жировых капсул (1927). Полученная им неомыляемая фракция не содержала стеринов. Как было найдено, имевшиеся там жирные кислоты были связаны не с глицерином, а с невосстанавливающимся а,а-дисахаридом — трегало-зой, выделенной ранее из спорыньи и других грибковых организмов (водородная связь, вероятно, вынуждает располагаться одно глюкопи-раноз ное кольцо этого соединения над другим) [c.619]

П. ВЫДЕЛЕНИЕ ИЗ ЛИПИДНОЙ ФРАКЦИИ [c.469]

Второй пример показывает роль тонкослойной хроматографии в выделении пробы. В гл. 15 была описана методика экстракции неомыляе-мых липидных фракций. В лаборатории авторов с помощью этой мето- [c.565]

Третью порцию экстракта исходной пробы используют для выделения общей липидной фракции (за исключением полярных липидов) с помощью этерификации и переэтерификации. На основании результатов этих трех анализов и несложных расчетов возможна точная идентификация присутствующих в пробе липидов. Третий экстракт выпаривают досуха, остаток растворяют в 10 мл метанола, добавляют 20 мл концентрированной Н2504 и кипятят смесь в течение 2 мин в стеклянном сосуде (желательно, чтобы [c.534]

НИЗКИЙ оптический дихроизм хлоропластов может объясняться именно этой недостаточно строгой ориентацией. Парк и др. [251—253] определили молекулярный состав квантосом, исследуя разрушенные хлоропласты шпината. Для зеленых ламеллярных структур диаметром от 2000 до 80 нм, полученных центрифугированием при постепенно возрастающих скоростях, отношение хлорофилла к азоту было довольно постоянным. Крупные структуры были, по-видимому, лишены гран, тогда как фракция более мелких частиц содержала граны. Эти результаты служат доказательством равномерного распределения хлорофилла по всей ламеллярной структуре хлоропласта. Было высказано предположение, что обычно наблюдаемая флуоресценция одних только гран объясняется более высоким содержанием ламеллярных структур. В квантосомах были обнаружены небольшие количества трех переходных металлов — железа, марганца и меди, причём концентрация марганца оказалась наиболее низкой. Марганец необходим для выделения кислорода при фотосинтезе. Учитывая это. Парк и Пон [253] рассчитали молекулярный вес наименьшей единицы в ламелле, которая, очевидно, еще могла бы осуществлять фотосинтез, т. е. частицы, соответствующей одному атому марганца. Он оказался равным 9,6-10 . Позже [251] расчеты были проведены с учетом данных об объеме квантосом (полученных путем измерений на электронных микрофотографиях), а также результатов определений эффективной плавучей плотности разрушенных ламеллярных структур в ультрацентрифуге. Было обнаружено, что молекулярный вес квантосом равен 2-10 , что соответствует двум атомам марганца. Данные о молекулярном составе квантосом представлены в табл. 1. Мембрана толщиной 10 нм содержит 50% липида и 50% белка. Следовательно, с учетом разницы в плотности (1,0 1,4) можно считать, что на долю липида приходится около 6,5 нм толщины мембраны, а это согласуется с представлением о существовании двойного липидного слоя. [c.35]

Детальный анализ стериновых фракций может быть проведен с помощью газожидкостной хроматографии. Для этого необходимо предварительное выделение фракции неомыляемых веществ путем щелочного гидролиза [8]. Общее содержание стеринов определяют колориметрически на основе цветных реакций. Для определения стеринов в пищевых продуктах, например, подходит цветная реакция с хлорным железом [26]. Для проведения анализа может быть использован суммарный липидный экстракт. На один анализ необходимо взять количество экстракта, содержащее не более 0,3 мг холестерина или Р-ситостерина. Другие цветные реакции (например, Либермана — Бурхарда) менее пригодны, так как мешает окрасе липидных экстрактов. [c.217]

Наиболее распространенным способом выделения п разделения Л. плазмы крови является метод ультрацентрифугирования в средах с определенной (однородной или градиентной) плотностью. При этом получаются фракции Л., характеризующиеся различной плотностью и значительно отличающиеся дру от друга как по составу своих липидных компонентов, так и по характеру белковой части. Л. с высокой пилотностью (1,149) обладают электрофоретич. подвижностью ai-глобу.линов, содержат 21% фосфолипидов, 57% белка, 5% триглицеридов, 17% холестерина. Л. с низкой плотностью (1,035) обладают электрофоретич. подвижностью р -глобулинов, содержат 22% фосфолипидов, 21% белка, 10% триглицеридов и 46% холестерина. В основном выделенная из шшзмы крови ультрацентрифугированием фракция Л. с высокой плотностью соответствует по своим свойствам а -Л., с низкой плотностью — i-Л. [c.488]

ВьГделение плазмалогенов является сложной задачей поэтому здесь мы приведем только общие соображения. Читателя, интересующегося этим вопросом более подробно, мы отсылаем к статьям Грея и Макфарлана [27], а также Грея [24]. Плазмалогены обычно находятся во фракции фосфолипидов, выделенных из неомыляемых жиров методом хроматографии на силикагеле. Однако в присутствии глицеридов они частично гидролизуются на колонке при этом свободные альдегиды оказываются во фракции жиров. Гидролиз можно ослабить или исключить, пропуская два липидных экстракта последовательно через одну и ту же колонку. Расщепление происходит только в первой пробе во второй оно отсутствует, по-видимому, вследствие дезактивации колонки. [c.478]

TOB контролируют на каждом этапе выделения и разделения мембран в исходном гомогенате и в каждой фракции с целью определения стадии осаждения и выхода исследуемых мембранных структур, а также потерь мембранных фракций. Гомогенность выделенного препарата мембран анализируют на основании увеличения активности маркерного фермента (-ов) в нем по сравнению с исходным гомогенатом клеток. Часто используют не один, а два-три мембранных маркера. Однако необходимо помнить, что и мембраны одного типа способны проявлять гетерогенность, связанную с асимметрией белкового, липидного и углеводного состава мембран, в результате чего фермент может находиться в латентной форме из-за нарушения ориентации мембраны и недоступности активного центра для субстрата, например, в обращенных мембранных везикулах. Наиболее легко из внзпрри-клеточных органелл идентифицируют митохондрии и ядра, затем — лизосомы и пероксисомы, наиболее трудно — плазматические мембраны и мембраны эндоплазматической сети. Сложность разделения последних обусловлена близостью величин диапазона плотностей этих структур, поэтому разделение по скорости седиментации осуществляется в том случае, если плазматические мембраны представлены крупными фрагментами. [c.223]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология