Бромоциан

Реакция солей карбоновых кислот с бромоцианом [c.436]

Реакция Кенига. Бумажную хроматограмму подвешивают в закрытом сосуде над кристаллами бромоциана и выдерживают в течение 30- 60 мин. Гидразид изоникотиновой кислоты, гидразид никотиновой кислоты и гидразид изопропилизоникотиновой кислоты дают специфическую синюю флуоресценцию в УФ-свете. После обработки бромоцианом хроматограмму опрыскивают одним из растворов ароматического амина [c.424]

Хлоро- ИЛИ бромоциан, будучи гетероаналогами фосгена, лри алкоголизе образуют цианаты [c.117]

Пептидная связь Asp-Pro особенно лабильна в условиях мягкого кислотного гидролиза 58, 73, 97, 108]. Избирательное расщепление может идти в кислой среде при гидролизе пепсином, при обработке белка раствором бромоциана в 70%-ной муравьиной кислоте или в процессе очистки пептидов гель-фильтрацией в водной уксусной или муравьиной кислоте. Частичный гидролиз связи Asp-Pro наблюдался, в частности, при обработке глутаматдегидрогеназы бромоцианом в 70%-ной муравьиной кислоте [140] в этой же работе обсуждается вероятный механизм кислотного гидролиза пептидной связи Asp-Pro. [c.93]

После первоначального успешного применения бромоциана при исследовании рибонуклеазы [69] эта реакция получила самое широкое применение [67, 181]. В оптимальных условиях бромоциан расщепляет пептидную связь метионина многих [c.96]

Реакцию проводят в 0,1 М соляной, водных муравьиной или трифтороуксусной кислоте. В настоящее время как растворитель наиболее часто применяют 70%-ную муравьиную кислоту. В кислой среде е-аминогрупны и другие основные группировки находятся в протоиированной форме, благодаря чему исключается их взаимодействие с бромоцианом. Кроме того, в водной муравьиной кислоте как сильном денатурирующем агенте остатки метионина становятся более экспонированными , т. е. более доступными для реагента. [c.100]

Реакция с бромоцианом находит и иное нримененне. Пептидные фрагменты, полученные при расщеплении бромоцианом и несущие С-концевой гомосеринлактон, можно вводить в реакцию конденсации (с высоким выходом) с аминогруппами полимеров (34- 36). Этот метод позволяет избирательно фиксировать фрагменты через С-концевой аминокислотный остаток на нерастворимом носителе с целью твердофазного секвенирования [86]. [c.100]

Полагают, что фрагменты 1—65 и 66—104 цитохрома с сердца лошади, полученные расщеплением бромоцианом в водной среде, способны к самосборке с реконструкцией пептидной связи [34]. Аналогичным образом самопроизвольно происходит конденсация фрагментов (1—52 и 53—58) панкреатического ингибитора трипсина [41]. Иными словами, циклическая структура С-концевого гомосеринлактона находится в достаточно активированном состоянии, чтобы в мягких условиях вступать в реакцию аминолиза с а-аминогруппой N-концевой аминокислоты. Благодаря этому удается осуществить синтез цитохрома с и трипсинового ингибитора из соответствующих фрагмен- [c.100]

A.LL Методика. Навеску белка растворяют (10—20 мг/мл) в 70%-ной муравьиной кислоте и добавляют твердый бромоциан (2 мг/мг белка или 20— 100-мольный избыток в расчете на метионин). Инкубацию ведут при комнатной температуре без доступа света в тече1Н1е 18—20 ч. По завершении реакции реакционную смесь разбавляют 5—10 объемами воды и высушивают лиофильно. Продукты реакции разделяют гель-фильтрацией. Продолжительность реакции может быть существенно мсньнге. Иапример, 0,5 мкмоль пептида/мл обрабатывали бромоциаиом (5 мг/мл) при комнатной температуре в течение 4 ч [101, 200]. [c.101]

Расщепить пептиды по остатку метионина можно с помон ью агентов, алкилирующих тиоэфирную группу по механизму реакции, аналогичному расщеплению бромоцианом. Наиболее эффективным реагентом оказался иодоацетамид [109, ПО]. При обработке апокаталазы этиленимином идет реакция присоединения по тиоэфирной группе метионина с образованием амино-этилсульфониевой соли с последующим расщеплением пептидной связи [166]. В сочетании с методом диагонального электрофореза эту реакцию применяли для идентификации и выделения пептидов, содержащих остатки метионина [187, 188]. [c.101]

Следует иметь в виду, что расщепление пептидной связи тирозина окислительным галогенированием обычно проводят в 50—80%-ной уксусной (или муравьиной) кислоте при комнатной температуре в течение нескольких часов по аналогии с расщеплением бромоцианом (разд. 2.4.1). Это довольно жесткие условия, при которых возможны побочные реакции, такие, как дезамидирование или расщепление лабильных пептидных связей (Asp-Pro). Фрагменты с С-концевым диоксоиндолилспи-ролактоном фиксируют ковалентно через 3-аминопропильную группу макропористого стекла с целью твердофазного секвенирования по Эдману [197]. [c.107]

Расщепление по остатку триптофана бромоцианом в гептафторомасляной кислоте [c.111]

Однако не исключено, что бромирование вызвано примесью брома, присутствующего в бромоциане. [c.112]

Низший аналог метионина — 5-метилцистеин (96)—не вступает в реакцию с бромоцианом с последуюш,им распхсплением [c.126]

Благодаря высокой специфичности и почти количественному выходу продуктов реакции расщепление бромоцианом по остатку метионина находит широкое применение в химии белка. Созданы и проверены на практике удовлетворительные методы расщепления пептидных связей триптофана и цистеина. [c.128]

При анализе белков со сложной четвертичной структурой целесообразно разделять их на составляющие субъединицы или полипептиды. В случае иммуноглобулинов для диссоциации полипептидных цепей проводили избирательное восстановление межцепочечных дисульфидных связей [44, 46]. Для получения крупных, хорошо идентифицируемых фрагментов, пригодных для дальнейшего расщепления до коротких цистинсодержащих пептидов, нативные белки расщепляют бромоцианом или протеолитическими ферментами [19, 28, 42, 46, 47]. [c.168]

Иногда гидролиз трипсином проводят при нейтральном или слабощелочном значении pH, однако при этом необходимо доказать, что не происходит дисульфидного обмена. Фрагменты человеческого иммуноглобулина IgG (полученные при расщеплении белка бромоцианом) инкубировали с трипсином (27о) при pH 7,2 в течение 4 ч [19]. При гидролизе в присутствии избытка [С " ] иодоацетамида показано, что белок не содержит нестабильных дисульфидных связей. В аналогичных условиях проводили триптический гидролиз фрагмента иммуноглобулина IgG (полученного при гидролизе белка пепсином), однако в отсутствие контроля за дисульфидным обменом [42]. Положение двух из четырех дисульфидных связей кардиотоксина яда кобры определено по строению цистинсодержащих пептидов, полученных при гидролизе белка трипсином при pH 7 в течение 24 ч [30]. Дополнительные сведения приводятся в разд. 3.5.1. [c.171]

При последовательном расщеплении человеческого -тромбо-глобулина бромоцианом в 707о-ной муравьиной кислоте и стафилококковой протеазой при pH 4,0 получены цистинсодержа-щие пептиды, по структуре которых определено положение двух дисульфидных связей [3]. Белок, обработанный бромоцианом (20 мг/мл), инкубировали с ферментом (при соотношении фермент субстрат= 1 40) в 0,05 М аммонийноацетатном буфере при pH 4,0 при 37 °С в течение 18 ч. См. также разд. 3.5.3. [c.171]

Анализ известной ами1юкислотной последовательности позволяет наметить оптимальный подход к определению положения дисульфидных связей. Для однозначной идентификации каждый цистинсодержащий пептид должен включать лишь одну дисульфидную связь. Следовательно, линейная последовательность интактной полипептидной цепи между ближайшими остатками полуцистина должна быть расщеплена хотя бы в одной точке. Иногда хорошие результаты дает расщепление бромоцианом. [c.174]

После расщепления бромоцианом и триптического гидролиза были выделены три коротких пептида, связанные дисульфидными мостиками (вероятное положение дисульфидных связей указано штриховыми линиями). Поскольку при анализе руководствовались известной структурой, пептиды были подвергнуты одностадийной деградации по Эдману в секвенсере, обессолены и фракционированы. При этом были получены два фрагмента [c.175]

Лиганды и пространственные группы легко присоединяются к агарозе после активации бромоцианом. В литературе приводится ряд модификаций этой методики. Активацию бромоцианом проводят в буферном растворе или в диметилформамиде. В процессе активации поддерживают pH 9—10, подтитровывая щелочью или концентрированным буферным раствором. Для лабо-ратори11, не подготовленных к работе с токсичным бромоцианом (отсутствие приточно-вытяжной вентиляции и вакуумных насосов), выпускается бромоцианактивированная агароза. Однако этот коммерческий препарат не свободен от недостатков. Отметим некоторые из них [c.183]

Неспецифическая сорбция. Этот недостаток связан со способом активации. Обработка бромоцианом приводит к активации множества гидроксильных групп, однако не все они доступны для молекул лиганда. Избыточные гидроксильные группы инактивируют избытком первичного амина, лизина, этилен-диамина. Несмотря на это, может иметь место неспецифическое связывание. Нековалентная сорбция наблюдается также при нанесении на колонку концентрированных растворов белков, например сывороток, экстрактов клеток или семян. Для уменьшения неспецифической сорбции рекомендуется промывать сорбент концентрированными солевыми растворами, однако это может привести к десорбции белков, имеющих низкое сродство к лиганду, [c.183]

Могут быть использованы также химические методы расщепления полипептидной цепи обработка бромоцианом (по остаткам метионина) [9, 43, 50], муравьиной кислотой (по связям аспарагиновая кислота — пролин) [41, 58] или N-xлopo yк-цинимидом (по остаткам триптофана) [42]. В этих случаях кусочек геля с белком обрабатывается в пробирке реагентом, а затем образовавшаяся смесь фрагментов наносится для разделения на второй гель. Преимущество химических методов очевидно, когда исследуется небольшое количество немеченного белка и необходимо для проявления применять высокочувствительное окрашивание серебром, которому не мешает присутствие протеаз. [c.230]

Руководство по неорганическому синтезу Т 1,2,3,4,5,6 (1985) -- [ c.691 ]

Справочник биохимии (1991) -- [ c.321 , c.424 , c.446 ]

Органикум Часть2 (1992) -- [ c.2 , c.117 ]

Практическая химия белка (1989) -- [ c.48 , c.93 , c.96 , c.101 , c.111 , c.112 , c.152 , c.171 , c.175 , c.175 , c.183 , c.183 , c.191 , c.191 , c.230 , c.230 , c.347 , c.347 , c.348 , c.348 , c.383 , c.383 , c.484 ]

Аффинная хроматография Методы (1988) -- [ c.48 , c.52 , c.154 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология