Элюирование липидов с адсорбентов

Элюирование липидов с адсорбентов [c.133]

Небольшие образцы липидов достаточно удобно разделять на полярные и неполярные методом ТСХ [14—17, 91]. В системах растворителей, предназначенных для ТСХ фосфолипидов, нейтральные липиды мигрируют практически с фронтом растворителя, а в элюирующих системах, используемых для ТСХ нейтральных липидов, фосфолипиды и другие полярные липиды остаются на старте. Интересующие исследователя соединения после проведения хроматографии можно элюировать с адсорбента подходящей смесью растворителей. Обычно любая элюирующая система, пригодная для ТСХ полярных липидов, пригодна также для элюирования нейтральных липидов, но не наоборот. На практике для элюирования с адсорбента выбирают такую систему растворителей, компоненты которой более летучи. Неполярные липиды чаще всего элюируют следующими системами растворителей хлороформ — метанол — вода (65 25 4) [92, 93] и хлороформ — метанол — 28%-ный раствор аммиака (13 7 1) ([34, 58], а полярные липиды — смесями легкий петро-лейный эфир — диэтиловый эфир (в соотношении от 7 3 до 9 1) [58, 94], легкий петролейный эфир — диэтиловый эфир — [c.136]

Оксид алюминия редко используется в качестве адсорбента для колоночной хроматографии сложных липидов, поскольку он обладает свойствами основания. Некислые липиды можно разделять на колонках с этим носителем, проводя элюирование смесью хлороформ — метанол при соотношении растворителей [c.148]

Пригодные для липидов растворители выбирают, проводя хроматографическое разделение этих веществ при использовании нескольких полярных растворителей. Растворитель, который перемещает данный класс липидов вблизи фронта, следует применить в качестве элюирующего вещества (см. стр. 138). Для элюирования нейтральных липидов наиболее пригоден диэтиловый эфир, иногда с добавкой 10—20% метанола. Сильно полярные липиды имеют склонность образовывать трудно растворимые соли и комплексы с ионами кальция адсорбента, к которому в качестве связующего добавлен гипс. Однако, применяя специальные растворители, можно количественно элюировать и такие классы соединений, как, например, фосфолипиды [111]. Сильно полярные липиды чксто имеет смысл подвергнуть хроматографическому разделению в форме слабо полярных производных, которые элюируются затем без затруднений [80, 84]. [c.181]

Хроматографирование. В наполненную адсорбентом колонку осторожно приливают раствор смеси веществ в подходящем растворителе. Идеально, если адсорбируемое вещество растворяется в петролейном эфире — растворителе с наименьшей вымывающей способностью. Если смесь веществ недостаточно в нем растворима, примешивают бензол, но в минимальном количестве. Когда раствор почти полностью протечет через колонку с адсорбентом, в воронку вливают чистый растворитель, приступая к элюированию. В случае необходимости применяют несколько растворителей (если один растворитель больше не элюирует, его заменяют другим, более действенным). Собирая элюат отдельными порциями, получают растворы отдельных фракций веществ. Обычно растворители, применяемые для элюирования нейтральных соединений, чередуют в следующем Порядке легкий петролейный эфир, бензол, хлороформ, эфир, ацетон, спирт, уксусная кислота. В менее полярном растворителе адсорбированное вещество удерживается на адсорбенте более прочно, и элюирование часто достигается при замене этого рас-пворителя более полярным. Большинство адсорбированных веществ удаляется метиловым или этиловым спиртом. Часто является достаточным добавление к растворителю этих спиртов в количестве 0,2—0,5%-Для элюирования жирных кислот и липидов обычно применяют смеси растворителей. [c.49]

Иногда нужно удалить органические вещества, адсорбированные на силикагеле. Как показали Кирхнер и сотр., это можно сделать после нанесения слоя адсорбента [126] путем элюирования пластинки подходящим растворителем с последующим высушиванием. Однако промыть растворителем адсорбент можно и до нанесения его на пластинку [127]. Страк [128] выдерживал силикагель в метаноле в течение ночи, отфильтровывал его, промывал еще дважды метанолом и высушивал при 100°С в течение получаса. Боур и сотр. [129] промывали кремневую кислоту смесью хлороформа с метанолом (2 1). Приветт и Бланк [130] с этой же целью обрабатывали кремневую кислоту сначала хлороформом, а затем эфиром. Миллер и Кирхнер [127] показали, что в некоторых случаях приходится соблюдать особые предосторожности, чтобы не загрязнить промытый адсорбент в процессе сушки примесями из окружающего воздуха. Эти авторы использовали для сушки адсорбента модифицированный стандартный сушильный шкаф с принудительной вентиляцией и со специальным уплотнением вокруг оси вентилятора. Воздух для осушки пропускали через фильтр с кремневой кислотой. Саммерс и Мефферд [131] для работы с липидами чистили силикагель в аппарате Сокслета, последовательно экстрагируя его гептаном, хлороформом и 95%-ным этанолом. Каждая [c.49]

Для быстрого выделения холестерина и триглицеридов из сыворотки Уитнер и др. [39] наносили 20 мкл сыворотки непосредственно на слой силикагеля и элюировали пластинки смесью гексан—эфир—уксусная кислота (80 20 1,5). Если холестерин не отделялся от других медленно перемещающихся липидов, то применяли более толстый слой адсорбента (0,25 мм) и проводили сначала тройное элюирование на расстояние 5— [c.60]

Литчфилд [43] использовал для разделения триглицеридов силанизованный силикагель, пропитанный 8 %-ным раствором гексадекана. Применявшийся как растворитель нитроэтан также насыщали гексадеканом. Перед анализом методом ГХ полученные фракции подвергали гидрогенизации. В результате были получены 30 различных групп триглицеридов. Объединив адсорбционную хроматографию и хроматографию с обращенными фазами, Кауфман и Вессельс [44] исследовали триглицериды, содержащиеся в подсолнечном масле, проводя элюирование вдоль хроматографических пластинок размером 10x40 см. Для адсорбционного разделения эти авторы использовали в качестве адсорбента силикагель, пропитанный нитратом серебра, а в качестве растворителя — смесь бензола и эфира (4 1). Предварительное разделение, необходимое для наработки достаточного количества материала, проводилось на адсорбционных слоях толщиной 0,7 мм в процессе его образцы выделялись в виде полос, а не пятен, так что таким способом можно было разделить до 80 мг липидов. Затем полосы удаляли с пластинок, с тем чтобы провести дальнейшее разделение на отдельные соединения,— на этот раз методом распределительной хроматографии. [c.61]

Хаахти и др. [249, 250] анализировали методом ТСХ воски и стериновые эфиры, содержащиеся в сале, отобранном с поверхности кожи животных. При разделении адсорбентами служили силикагель, оксид алюминия, а также силикагель, пропитанный раствором нитрата серебра. Никкари и Хаахти [251] нашли в липидах, отобранных с поверхности шкурок крыс, два типа диэфиров. Они проводили ТСХ на силикагеле со смесями бензол—гексан (1 1) и гексан—эфир (9 1) в качестве растворителей. Николаидес и др. [252] также нашли диэфирные воски в липидах с поверхности кожи животных. Они применяли многостадийное элюирование вначале элюировали до половины высоты пластинки смесью гексан—эфир—уксусная кислота (80 20 1), затем доверху смесью гексан—эфир (19 1) и еще раз доверху, но уже только гексаном. [c.97]

Разделение нейтральных липидов на соединения, принадлежащие к различным классам, достигается обычно с помощью адсорбционной колоночной хроматографии на таких адсорбентах, как кремниевая кислота или флоризил. В работе [100] подробно описаио разделение нейтральных липидов иа колонках с этими сорбентами и отмечены некоторые небольшие различия, которые можно использовать на практике, в хроматографических свойствах кремниевой кислоты и флоризила. При разделении на флоризиле и кремниевой кислоте очередность элюирования различных классов нейтральных липидов примерно одинакова, но время удерживания моноацетилглицеринов и свободных жирных кислот на колонках с флоризилом несколько больше, чем на колонках с кремниевой кислотой. Используя градиентное элюирование (линейный градиент диэтилового эфира в гексане), нейтральные липиды можно разделить на соединения типа углеводородов (100%-ный гексан), эфиры холестерина и носки (1%-ный диэтиловый эфир в гексане), триацилглицерины (5%-ный диэтиловый эфир), свободные жирные кислоты (18%-ный диэтиловый эфир), свободный холестерин (15%-ный диэтиловый эфир), диацилглицерины (15%-ный диэтиловый эфир) и моно- [c.137]

Для очистки простых и сложных липидов, жирных кислот, стеролов, фенолов и углеводородов используют кремневую кислоту. Элюирование осуществляют путем изменения состава растворителя (обычно от среднеполярного к полярному). Разделение стероидов, алкалоидов, углеводородов, сложных эфиров, органических кислот и оснований, а также других органических веществ проводят на нейтральной окиси алюминия (pH 6,9—7,1) в безводных растворителях. Основная окись алюминия (pH 10—10,5) обладает такими же свойствами в отно-щении соединений, адсорбируемых из органических растворителей. Однако в водной среде она действует как сильный катионообменник, сорбирующий основные соединения, например аминокислоты и амины. Промытая кислотой окись алюминия (pH 3,5—4,5) действует как анионообменник в водной среде. Для очистки макромолекул в водных растворах используются такие адсорбенты, как окись алюминия, Су, кальций-фосфатный гель и гидроксиапатит. Они хранятся в виде концентри- [c.202]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология