Липиды элюирование

Пробу масла в количестве 2—4 г растворяют в 30 мл хроматографического, обезвоженного ацетона и вносят в колонку И. Для количественного перенесения пробы колбу, в которой находился раствор липидов, ополаскивают 5—6 мл ацетона, сливая его также в колонку 11. Открывают кран 1 и дают пробе полностью распределиться по сорбенту. Затем приступают к элюированию фракций. Элюирование глицеридов производят ацетоном в количестве 200 мл, помещая его в резервуаре 7. Затем элюируют фосфатиды 600—800 мл метанола. Скорость элюирования 3 мл/мин. [c.116]

ГО — Проявляет хорошую разделительную способность в отношении липидов, которые не удается разделить на чистом силикагеле [25]. Однако смешение сорбентов с различными свойствами не всегда способствует улучшению разделения. Так, использование смеси силикагеля и оксида алюминия для разделения циклодекстринов особых преимушеств не дало [74]. Авторы работы [68] исследовали разделение соединений различной полярности на смеси силикагеля с целлюлозой (1 1) при двумерном элюировании. При элюировании водными растворами активным компонентом была целлюлоза, а при элюировании органическими растворителями целлюлоза была инертной и в разделении принимал участие только силикагель. [c.110]

Хроматография. 13г кремневой кислоты помещают в колонку диаметром 2 см, высотой 7 см и промывают тремя объемами (по 14 мл) метанола, затем тремя подобными объемами ацетона, диэтилового эфира и петролейного эфира (т. кип. 60—70°). Чистые липиды в количестве около 50 мг растворяют в петролейном эфире, добавляют в колонку и элюируют эфиро-петролейно-эфирными смесями с различными отношениями компонентов. Элюирование каждой смеси продолжают, пока выпаривание элюатов покажет, что липидов мало или они отсутствуют. [c.75]

Фракционирование липидов, полученных из тканей печени и сердца, возможно адсорбированием их на силикагеле с последующим элюированием хлороформ-метаноловыми смесями. Для облегчения анализов получаемых фракций пользуются меченными по фосфору липидами. Для этого животному внутрибрюшинно вводят за 12 часов до умерщвления и количественный учет ведут после хроматографирования на [c.79]

Араки [33] также применял двустадийное элюирование для разделения липидов сыворотки на силикагеле. Первым растворителем, которым выделяли фосфолипиды, была смесь хлороформ—метанол—уксусная кислота—вода (25 10 3 2), а вто- [c.58]

Приблизительные величины Я/ХЮО липидов нервных тканей. Многостадийное элюирование на силикагеле [173] [c.91]

Величины /ХЮО липидов головного мозга в различных растворителях Длина пути элюирования 10 см [182] [c.93]

На колонке с силикагелем [20]. 13 г силикагеля с зернами размером 100 меш помещают в стеклянную колонку диаметром 2 см высота слоя 7 см. Колонку затем промывают 40 мл абсолютного метанола, а затем 40 мл ацетона, 40 мл безводного эфира, очищенного от перекиси, и 40 мл петролейного эфира (пояснения см. ниже, в описании метода 2). Около 50 мг липидной фракции (в петролейном эфире) вводят в верхнюю часть колонки. Липиды затем Элюируют, как показано в табл. 46. Для элюирования различных [c.451]

Элюирование липидов с адсорбентов [c.133]

В работах [3, 38, 39] описано перемещающееся устройство для Иеносредственного ввода пробы в колонку, применяемое в высокотемпературной капиллярной газовой хроматографии. Узел ввода южпо перемещать вверх и вниз но стенке термостата. В верхнем [сложении начальная часть колонки расположена вне термостата, поэтому ввод пробы можно проводить при комнатной температуре. Растворитель испаряется, а высококипящие компоненты улавливаются в холодной начальной части колонки. После полного элюирования растворителя, которое можно контролировать с помощью пламенно-ионизационного детектора, устройство ввода пускают вниз. В результате этого начальная часть колонки попадает в термостат и при температуре термостата происходит анализ пробы. Основным преимуществом такого устройства является то, что холодный ввод пробы непосредственно в колонку можно проводить при высоких температурах термостата. По существу принцип действия этого устройства аналогичен используемому в твердофазном устройстве ввода пробы [42]. Перемещающееся устройство ввода пробы было также разработано Дженнингсом [41]. Недавно описано автоматическое устройство непосредственного ввода пробы в колонку, применяемое при высокой температуре термостата [42]. Получены прекрасные результаты при определении липидов. Система вторичного охлаждения [33, 34] позволяет поддерживать температуру 60°С на входе в колонку нри температуре термостата 300°С. Для обеспечения автоматической работы к аналитической колонке подсоединена короткая предколонка. [c.49]

Так как в приведенных выше системах растворителей не получают четкого отделения диглицеридов от свободных стеринов, то важное значение в ПТСХ приобретает следующая методика [43]. До 20 мг нейтральных липидов можно разделить на пластинке размером 20X20 см со слоем силикагеля О толщиной 0,5 мм, используя систему двух растворителей Скипского и сотр. [44]. В этой методике первоначально проводят восходящее проявление с использованием в качестве подвижной фазы смеси изопропиловый эфир—уксусная кислота (96 4 по объему). Затем, после высушивания пластинки, второе восходящее проявление осуществляют с помощью смеси петролейный эфир—диэтиловый эфир—уксусная кислота (90 90 1 по объему). Нейтральные эфиры визуализируют с помощью иода. Порядок элюирования (от низких к высоким 1) —диглицериды, свободные стерины и триглицериды. [c.145]

Пригодные для липидов растворители выбирают, проводя хроматографическое разделение этих веществ при использовании нескольких полярных растворителей. Растворитель, который перемещает данный класс липидов вблизи фронта, следует применить в качестве элюирующего вещества (см. стр. 138). Для элюирования нейтральных липидов наиболее пригоден диэтиловый эфир, иногда с добавкой 10—20% метанола. Сильно полярные липиды имеют склонность образовывать трудно растворимые соли и комплексы с ионами кальция адсорбента, к которому в качестве связующего добавлен гипс. Однако, применяя специальные растворители, можно количественно элюировать и такие классы соединений, как, например, фосфолипиды [111]. Сильно полярные липиды чксто имеет смысл подвергнуть хроматографическому разделению в форме слабо полярных производных, которые элюируются затем без затруднений [80, 84]. [c.181]

Для разделения жирных кислот липидов туберкулезных бацилл использовали смесь активированного угля Dar o G-60 и целита 521 (1 2) элюирование проводили 95%-ным этанолом, безводным этанолом и смесями этанол—бензол [19]. [c.192]

Метод Роузера с сотр. [74] до сих пор широко используется для разделения на фракции фосфолипидов. Незначительные изменения были позднее предложены для разделения окисленных фосфолипидов [75]. Ряд исследователей [76, 77] разделяли фосфолипиды на 13 фракций на целлюлозе, обработанной хлороформом, используя элюирование хлороформом, содержащим увеличивающиеся количества метанола [76, 77]. Ренконен [78] разделил липиды, содержащиеся в сыворотке, на нейтральные липиды, цефалины, лецитины, сфингомиелины и лизолецитин с помощью хроматографии на колонках с силикагелем. Затем эти фракции были разделены на индивидуальные компоненты методом колоночной хроматографии, например, на DEAE-целлюлозе или нейтральной окиси алюминия. Колоночная хроматография на силикагеле может сочетаться с другими методами, например с ультрацентрифугированием при исследовании липо-протеинов [79]. Подобный метод разделения на колонках, заполненных силикагелем, был применен для анализов фосфолипидов, содержащихся в молоке [80]. [c.207]

Гидроксилапатит применяют главным образом в препаративной биохимий, для фракционирования и очистки белков, ферментов, вирусов, нуклеиновых кислот, полинуклеотидов, пептидов, полярных липидов. Емкость загрузки колонок по белку составляет 1—5 мг/см и больше. Элюирование адсорбированных веществ и регенерацию колонок осуществляют фосфатными буферными растворами (градиентно, от 0,001 до 0,4 М) или 1 М Na l. [c.32]

И неполярные липиды (содержание последних довольно велико). Далее эфиром и смесями эфира с ацетоном (с возрастающей долей ацетона) вымывают гликозиды каротиноидов. В этих условиях фосфолипиды остаются адсорбированными в колонке. Гликозиды каротиноидов, выделенные из микобактерий, обычна этерифицируются различными жирными кислотами по одной из гидроксильных групп ГЛЮКОЗЫ. Поэтому эти эфиры необходимо омылить этанольным раствором гидроксида калия. Очень важной стадией является ацетилирование гликозидов уксусным ан-гидридом и пиридином. При этом сахарная, т. е. гидрофильная, часть молекулы становится липофильной и образующиеся ацетилированные гликозиды лучше поддаются дальнейшему разделению. Выделенные фракции повторно хроматографируют на силикагеле, однако полученные в результате фракции все-таки представляют собой смеси трех или более компонентов. Получить фракции индивидуальных компонентов можно, хроматографируя эти смеси на оксиде магния (колоночная или тонкослойная хроматография). В табл. 4.12 приведены все идентифицированные гликозиды каротиноидов, выделенные из микобактерий, а также их величины полученные на тонких слоях оксида магния элюированием смесью петролейный эфир (т. кип. 60—70 °С)—бензол — метанол (40 10 1). Подобную же смесь используют и в колоночной хроматографии. Колонку заполняют смесью (1 1) оксида магния и кизельгура (фирмы Мегск, Дармштадт, ФРГ). Как видно из табл. 4.12, каждая дополнительная сопряженная двойная связь в молекуле уменьшает Я), а циклизация молекулы увеличивает ее. Соединения В, Д и 3, перемещающиеся при хроматографии на силикагеле, как одна зона, легко разделяются этим методом. Различные типы ацетилированных гидроксильных групп (в соединениях А, В, Г я Ж) или карбонильная группа приводят к различному по величине замедлению движения хроматографируемого вещества. Очевидно, характер гликозидной связи также существенно влияет на величину [c.209]

Хроматографирование. В наполненную адсорбентом колонку осторожно приливают раствор смеси веществ в подходящем растворителе. Идеально, если адсорбируемое вещество растворяется в петролейном эфире — растворителе с наименьшей вымывающей способностью. Если смесь веществ недостаточно в нем растворима, примешивают бензол, но в минимальном количестве. Когда раствор почти полностью протечет через колонку с адсорбентом, в воронку вливают чистый растворитель, приступая к элюированию. В случае необходимости применяют несколько растворителей (если один растворитель больше не элюирует, его заменяют другим, более действенным). Собирая элюат отдельными порциями, получают растворы отдельных фракций веществ. Обычно растворители, применяемые для элюирования нейтральных соединений, чередуют в следующем Порядке легкий петролейный эфир, бензол, хлороформ, эфир, ацетон, спирт, уксусная кислота. В менее полярном растворителе адсорбированное вещество удерживается на адсорбенте более прочно, и элюирование часто достигается при замене этого рас-пворителя более полярным. Большинство адсорбированных веществ удаляется метиловым или этиловым спиртом. Часто является достаточным добавление к растворителю этих спиртов в количестве 0,2—0,5%-Для элюирования жирных кислот и липидов обычно применяют смеси растворителей. [c.49]

Липиды, растворенные в петролейном эфире (20 мл), осторожно переносят пипеткой в колонку. Элюируют последовательно петролейным эфиром с содержанием 1%, 3% и 10% (объем/объем) диэтилового эфира с метанолом (3 1, объем/объем). Собирают фракции каждого элюата по 750 мл. Растворитель удаляют в вакууме. Каждый элюирующий растворитель используют до тех пор, пока практически не прекращается выход какого-либо липида из колонки этим растворителем. С целью проверки хода элюирования с липидными фракциями проделывают реакцию Либермана — Бурхарда. [c.74]

Иногда нужно удалить органические вещества, адсорбированные на силикагеле. Как показали Кирхнер и сотр., это можно сделать после нанесения слоя адсорбента [126] путем элюирования пластинки подходящим растворителем с последующим высушиванием. Однако промыть растворителем адсорбент можно и до нанесения его на пластинку [127]. Страк [128] выдерживал силикагель в метаноле в течение ночи, отфильтровывал его, промывал еще дважды метанолом и высушивал при 100°С в течение получаса. Боур и сотр. [129] промывали кремневую кислоту смесью хлороформа с метанолом (2 1). Приветт и Бланк [130] с этой же целью обрабатывали кремневую кислоту сначала хлороформом, а затем эфиром. Миллер и Кирхнер [127] показали, что в некоторых случаях приходится соблюдать особые предосторожности, чтобы не загрязнить промытый адсорбент в процессе сушки примесями из окружающего воздуха. Эти авторы использовали для сушки адсорбента модифицированный стандартный сушильный шкаф с принудительной вентиляцией и со специальным уплотнением вокруг оси вентилятора. Воздух для осушки пропускали через фильтр с кремневой кислотой. Саммерс и Мефферд [131] для работы с липидами чистили силикагель в аппарате Сокслета, последовательно экстрагируя его гептаном, хлороформом и 95%-ным этанолом. Каждая [c.49]

Липиды, содержащиеся в метанольпых экстрактах биологических материалов, мешают разделению тироидных гормонов. Чтобы избежать мешающего влияния липидов, Цаппи и др. [83] наносили пробы на слои целлюлозы на равном расстоянии от боковых сторон пластинки и на расстоянии в 4 см от одного из краев. С противоположного края пластины элюирование вели хлороформом. Когда хлороформ достигал пробы у верхнего края, он растворял липиды и смещал их вверх, тогда как аминокислоты оставались в местах нанесения проб. Липидные примеси соскребали со слоя и проводили элюирование с этого же края смесью ацетон — 0,1 н. уксусная кислота (1 4). [c.493]

Поллак и др. [24] разработали методику многократного элюирования, имеющую ряд преимуществ по сравнению с другими методиками. Добавляя к составным растворителям три-метилборат, они практически исключили возможность взаимных превращений 1,2- и 1,3-дипальмитинов и, возможно, 1- и 2-моноглицеридов, которые обычно происходят при разделении на силикагеле О. Кроме того, с помощью метода Поллака и сотрудников можно разделять сложные смеси липидов, содержащие нейтральные липиды, глико- и фосфолипиды. При использовании пластинок с силикагелем О, очищенных предварительным элюированием сначала хлороформом, а затем смесью бензол—этилацетат (5 1), первое основное элюирование проводят на 18 см смесью хлороформ—этанол—триметилборат (100 1 6). После этого пластинки поворачивают на 90° для элюирования во втором направлении смесью бензол—этилацетат—триметилборат (100 20 7,2) при такой же длине пути элюирования. Далее пластинки опять поворачивают на 90°, т. е. на 180° по отношению к положению первого элюирования, и элюируют смесью гептан—бензол (3 2) на 18 см. Четвертое элюирование проводят на 10 см гептаном, предварительно повернув пластинку еще на 90° (т. е. на 180° по отношению к положению при втором элюировании). [c.55]

Первые три направления, непомеченные пятна и соответствующие положения фронта элюирования аналогичны приведенным на рис. 23.2А. После элюирования в трех направлениях участок хроматограммы с полярными липидами был изолирован вокруг него соскоблили слой силикагеля, после этого провели следующее разделение во втором направлении смесью хлороформ—MeTanOvi—вода (70 20 2,5). Обозначения те же, что и на рис. 23.2А, см. также текст. [c.58]

Для быстрого выделения холестерина и триглицеридов из сыворотки Уитнер и др. [39] наносили 20 мкл сыворотки непосредственно на слой силикагеля и элюировали пластинки смесью гексан—эфир—уксусная кислота (80 20 1,5). Если холестерин не отделялся от других медленно перемещающихся липидов, то применяли более толстый слой адсорбента (0,25 мм) и проводили сначала тройное элюирование на расстояние 5— [c.60]

Литчфилд [43] использовал для разделения триглицеридов силанизованный силикагель, пропитанный 8 %-ным раствором гексадекана. Применявшийся как растворитель нитроэтан также насыщали гексадеканом. Перед анализом методом ГХ полученные фракции подвергали гидрогенизации. В результате были получены 30 различных групп триглицеридов. Объединив адсорбционную хроматографию и хроматографию с обращенными фазами, Кауфман и Вессельс [44] исследовали триглицериды, содержащиеся в подсолнечном масле, проводя элюирование вдоль хроматографических пластинок размером 10x40 см. Для адсорбционного разделения эти авторы использовали в качестве адсорбента силикагель, пропитанный нитратом серебра, а в качестве растворителя — смесь бензола и эфира (4 1). Предварительное разделение, необходимое для наработки достаточного количества материала, проводилось на адсорбционных слоях толщиной 0,7 мм в процессе его образцы выделялись в виде полос, а не пятен, так что таким способом можно было разделить до 80 мг липидов. Затем полосы удаляли с пластинок, с тем чтобы провести дальнейшее разделение на отдельные соединения,— на этот раз методом распределительной хроматографии. [c.61]

Ятцкевнтц [172] применил двустадийный метод для разделения сфинголипидов мозга, а Пейн [173] использовал те же растворители для анализа липидов нервных тканей. На слоях кремневой кислоты первое элюирование велось смесью хлороформ—метанол—вода (14 6 1) при длине пути элюирования 15 см. Затем пластинки сушили и элюировали на 10 см смесью н-пропанол—12,5 %-ный раствор гидроксида аммония (39 11). Величины Rf этой группы соединений приведены в табл. 23.8. [c.90]

Адамс и Сэлли [174] описали методику двустадийного хроматографирования на силикагеле в камере, выложенной бумагой. Сначала пробу элюировали в течение 9 мин смесью тетрагидрофуран—метанол (3 1). После этого удаляли растворитель и повторяли элюирование в том же направлении на 17 см смесью хлороформ—метанол—4М раствор гидроксида аммония (75 37 7). Несковнц и Костиц [175] комбинировали в двустадийном методе кислотные и основные растворители. Они готовили адсорбционные слои по методу Раузера и др. [176] 54 г силикагеля Н и 6 г тонкоразмолотого флоризила смешивали со 135 мл воды до образования кашицы. Первое элюирование проводили на 15 см смесью хлороформ—метанол—30 %-ный аммиак—вода (140 50 7 3) второе элюирование вели до самого верха пластинки смесью хлороформ—уксусная кислота—метанол—вода (160 4 20 1,5). Применяя сульфат магния, удается почти полностью избежать растекания пятен кислотных липидов [176]. [c.90]

Хаахти и др. [249, 250] анализировали методом ТСХ воски и стериновые эфиры, содержащиеся в сале, отобранном с поверхности кожи животных. При разделении адсорбентами служили силикагель, оксид алюминия, а также силикагель, пропитанный раствором нитрата серебра. Никкари и Хаахти [251] нашли в липидах, отобранных с поверхности шкурок крыс, два типа диэфиров. Они проводили ТСХ на силикагеле со смесями бензол—гексан (1 1) и гексан—эфир (9 1) в качестве растворителей. Николаидес и др. [252] также нашли диэфирные воски в липидах с поверхности кожи животных. Они применяли многостадийное элюирование вначале элюировали до половины высоты пластинки смесью гексан—эфир—уксусная кислота (80 20 1), затем доверху смесью гексан—эфир (19 1) и еще раз доверху, но уже только гексаном. [c.97]

Исследованию холестерина и его эфиров, находящихся в липидах сыворотки, посвящен ряд работ [23—28]. Целнер и др. [25] определяли содержание эфиров холестерина в пробе сыворотки объемом всего 0,4 мл. С помощью многократного элюирования тетрахлоридом углерода на кремневой кислоте можно различить пять таких эфиров свободный холестерин при этом остается на стартовой линии. Бьюкерс и др. [271 элюировали пробы сыворотки смесью петролейный эфир (60—80 С)—диэтиловый эфир (4 1), с тем чтобы разделить и идентифицировать свободный холестерин и его эфиры. Соответственно возрастанию величин Rf на силикагеле выделены следующие группы липидов фосфолипиды, свободный холестерин, триглицериды и эфиры. Клод и Бьюмонт [28] изучали содержащиеся в сы- [c.290]

Удаление нелипидных фракций. Липиды отделяют от нелипидных соединений на колонке из порошкообразной целлюлозы следующим образом из порошкообразной целлюлозы стандартного сорта Ватман готовят суспензию в смеси хлороформа и метанола (2 1, по объему) и помещают ее в колонку размером 30 X 2 см. Колонку промывают растворителем (около 200 мл) до прекращения элюирования мелких частиц. Не более 500 жг липида вводят в колонку при максимальном объеме смеси хлороформа с метанолом 5 мл. Липиды элюируют примерно 250 мл растворителя. Элюат упаривают почти досуха и остаток метанола удаляют двухкратным добавлением небольших количеств петролейного эфира и испарением почти досуха. Добавляют петролейный эфир, доводя объем экстракта до 15 мл. [c.449]

Углеводороды, высшие спирты жирного ряда и стерины составляют компоненты неомыляемой фракции, которые необходимо раньше разделить, а уже затем хроматографировать. Для этого неомыляемую фракцию обрабатывают мочевиной в горячем спиртовом растворе [85]. При охлаждении мочевина со спиртами жирного ряда и углеводородами образует кристаллические клатрат-ные соединения. Стерины остаются в верхнем слое. При кипячении клатратов с водой выделяются спирты жирного ряда и углеводороды. Методом жидкостно-адсорбционной хроматографии на окиси алюминия полученные фракции можно разделить далее на углеводороды, одноосновные и двуосновные спирты [18]. Неомыляемую же фракцию липидов можно сразу разделить на окиси алюминия без предварительного фракционирования мочевиной [57]. Сырую фракцию спиртов затем разделяют хроматографически на окиси алюминия на одноатомные спирты, а,а)-диолы и а,р-диолы, используя для элюирования различные сочетания растворителей. [c.454]

Хроматографическое разделение метиловых эфиров высших жирных кислот на неполярной жидкости описали многие авторы, в том числе Джемс, Инсулл, Липский и Биртуис. Наиболее часто применяемой распределительной средой служит высоковакуумная смазка апьезон Ь или апьезон М, нанесенная на фракционированный целит. Эти смазки выдерживают температуру до 300° без заметного разложения или потери. Джемс 136] использовал набивку, изготовленную из апьезона Ь и целита, обработанного щелочью (100/210 меш), для разделения метиловых эфиров жирных кислот с 10—18 атомами углерода, полученных из фекальных липидов. При температуре 197° и давлении на входе в колонку на 760-мм рт. ст. выше атмосферного метиловые эфиры стеариновой кислоты элюируются через 65— 70 мин. Для элюирования метиловых эфиров жирных кислот с числом атомов углерода до 30 необходимо применять более высокие температуры, чтобы проводить анализ за приемлемое время при использовании стандартных набивок колонки. Биртуис и др. [4] применяли колонку, содержавшую апьезон Ь, нанесенный на целит 545, при отношении жидкая фаза — [c.489]

Диацилглицерины можно экстрагировать смесью хлороформ — метанол — вода — 28%-ный раствор аммиака (100 50 6 1) [48], для выделения ганглиозидов применяют смесь метанол — хлороформ— (2 1) [49]. При выделении фосфолипидов обычни используют систему хлороформ — метанол — уксусная кислота— вода в соотношениях 50 39 1 10 [50], 25 15 4 2 [51] или 49 49 2 1 [28], а также систему хлороформ — метанол — муравьиная кислота (1 1 2) [52]. При элюировании нейтральных и полярных липидов с силикагеля, пропитанного карбонатом натрия, ацетатом магния, щавелевой или борной кислотой, никаких дополнительных затруднений не возникает. А при использовании силикагеля, пропитанного нитратом серебра, к элюирующим растворителям необходимо добавить несколько капель разбавленной (1,5 М) соляной кислоты, чтобы осадить соли серебра [53]. [c.134]

Поскольку большинство липидов содержит жирные кислоты с одной и более двойными связями, определенные меры предосторожности при работе с образцом и при его хранении следует соблюдать, с тем чтобы избежать аутоокисления. Его можно свести к минимуму, если работать с растворителями, из которых предварительно удален кислород, и все манипуляции с пробой выполнять в атмосфере азота [42]. Очищенные экстракты липидов следует хранить в плотно закрытых флаконах при низких температурах (—20 °С и ниже) в присутствии инертных растворителей и газов и ие слишком долго [48,54]. Можно применять антиоксиданты, например 2,6-ди-г/зет-бутил-/г-крезол, который даже в концентрации менее 0,005% эффективно предотвращает окислительное расщепление ненасыщенных липидов [55]. Этот антиоксидант легко удалить хроматографически [34], однако следует помнить, что при ГЖХ на большинстве носителей его время элюирования совпадает с временем элюирования метилмиристата [48]. [c.134]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология