Электрофорез высоковольтный

Рис. 484. Аппарат для высоковольтного электрофореза.

Электрофорез, процесс разделения молекул, основанный на разной скорости перемещения их в электрическом поле, проводят самыми разными способами. Очень небольшое количество раствора, содержащего смесь белков (например, белков сыворотки крови), наносят в виде тонкой полоски на лист фильтровальной бумаги или ацетата целлюлозы. Лист насыщают буфером и пропускают через него электрический ток. Напряжения в несколько сот вольт достаточно для разделения белков сыворотки в течение 1 ч. Для ускорения процесса и снижения диффузии низкомолекулярных веществ широко используют высоковольтный электрофорез. Прикладываемое напряжение составляет в этом случае 2—3 тыс. вольт. Образец постоянно охлаждают с помощью термостатируемых пластин иногда для той же цели всю систему погружают в сосуд с керосином. Электрофоретическое разделение больших количеств материала проводится в плоских лотках, заполненных крахмальным или каким-либо другим гелем. Одним из наиболее распространенных и чувствительных методов разделения белков является электрофорез в колонке, заполненной полиакриламидным гелем. Этот метод, в настоящее время сильно усовершенствованный, позволяет проводить разделение молекул одновременно и по размеру, и по электрическому заряду его называют методом электрофоретического молекулярного сита 127, 128]. [c.164]

Наилучшее разделение достигается обычно на приборах, рассчитанных на рабочее напряжение порядка 3000—10 ООО в. Схема такого высоковольтного электрофореза [53] показана на рис. 483. Обязательным условием успешного проведения высоковольтного электрофореза является [c.539]

Метод пептидных карт представляет собой сочетание бумажной и тонкослойной хроматографии с высоковольтным электрофорезом. В качестве носителей используют силикагель или порошок целлюлозы. Вначале проводят хроматографию, для чего пробу наносят в точку вблизи одной стороны бумаги или пластинки, а затем под углом 90° проводят высоковольтный электрофорез. Метод применяют для разделения смеси низкомолекулярных соединений. [c.149]

В горизонтальных аппаратах для высоковольтного электрофореза одного типа охлаждение обеспечивается циркуляцией водопроводной воды в охлаждающей плите, изготовленной из металла. Металлическую плиту, разумеется, необходимо отделить от фильтровальной бумаги полиэтиленовой пленкой с соответствующими изоляционными свойствами. В аппаратах для высоковольтного электрофореза с водяным охлаждением фильтровальная бумага охлаждается и сверху и снизу двумя плитами, которые прижимаются друг к другу надувным резиновым кольцом. Если в ходе эксперимента применяли пришивание, то, для того чтобы обеспечить [c.113]

Аппараты для высоковольтного электрофореза обеспечивают градиент напряжения от 50 до 100 В/см. В них специальное охлаждение становится обязательным. В горизонтальных камерах оно осуществляется с помощью металлической охлаждающей плиты, а в вертикальных — с помощью эффективного контакта с органическими растворителями. [c.95]

Рнс. 483. Схема высоковольтного электрофореза [53]. [c.539]

В. МЕТОД ВЫСОКОВОЛЬТНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА [c.113]

Глава III МЕТОДЫ СРЕДНЕ- И ВЫСОКОВОЛЬТНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА [c.95]

Другая схема прибора для высоковольтного электрофореза представлена на рис. 485. Охлаждение здесь осуществляется при помощи инертного [c.539]

Упомянем также об обнаружении фосфорилированных под действием киназ аминокислот после кислотного гидролиза белков. В этом случае наиболее удобным оказался двумерный высоковольтный электрофорез на бумаге ( Whatman ЗММ ) при pH 3,5 и 1,9 [ linton et al., 1982]. [c.485]

При наиболее продуктивном в аналитической химии белка электрофорезе с носителем в качестве носителя для потока буферного раствора используют целлюлозы, гели и пленки. Работают с напряженностью поля 6—10 В/см (низковольтный электрофорез) и при охлаждении с напряженностью до 100 В/см (высоковольтный электрофорез). [c.351]

Средне- и высоковольтный электрофорез [c.97]

Рис. 170. Устройство для осуществления высоковольтного электрофореза гидролизата РНК на полоске ацетилцеллюлозы [ВаггоИ, 1971]

При высоковольтном электрофорезе градиент напряжения равен 50—100 В/см. Сила используемого тока также увеличивается, а следовательно, возрастает теплообразование и повышается температура бумаги. Для рассеяния образующегося тепла необходимо более эффективное охлаждение. [c.113]

Существенное преимущество аппаратов для высоковольтного электрофореза заключается в том, что они позволяют значительно сократить продолжительность электрофореза, а следовательно, уменьшить диффузию и сделать границы зон более четкими. [c.114]

Буферный раствор состоит из 32 мл уксусной кислоты, 18 мл пиридина и 1950 мл дистиллированной воды. Стартовая точка находится на расстоянии одной трети длины листа от катода. Гидролизат наносят на сухую бумагу, причем стартовое пятно должно быть как можно меньше. Электрофорез продолжается 110 мин при градиенте напряжения 80 В/см. Если нет высоковольтной аппаратуры, то можно работать при среднем напряжении, пропорционально увеличив продолжительность электрофореза. Аппарат с непосредственным жидкостным охлаждением нельзя применять для первого электрофореза, поскольку ДНС-производные Про, Вал, Иле, Лей, Фен и Тир могут быть экстрагированы органическими растворителями. [c.276]

То же, выпускается также в рулонах шириной 1 м. 20—22. Мягкая бумага ( быстрая ). 23—27. Средняя бумага. 28—31. Жесткая бумага ( медленная ).. 32—37. Промытые сорта бумаг W 20—31. 38—40. Для препаративных работ. 41. Для высоковольтного электрофореза. 43— [c.151]

Зонный электрофорез на бумаге. Различают бумажный электрофорез низковольтный (при градиенте напряжения 20—30 В/см) и высоковольтный (с градиентом напряжения до 200 В/см). Высоковольтный электрофорез применяют для разделения низкомолекулярных соединений. Приборы оборудуют устройствами для отвода джоулевой теплоты, для чего используют инертные жидкости (тетрахлорид углерода, толуол), в которые помещают пропитанные буферным раствором бумажные полоски (фореграммы). Сама жидкость охлаждается с помощью погруженного в нее холодильника. [c.363]

В смеси инертных комплексов миграция их под действием диффузионных электрофоретических или каких-либо других сил происходит для каждого сорта ионов с характерной скоростью. На этом основано применение хроматографии при синтезе комплексных соединений. Хроматография и электрофорез могут быть использованы при синтезе, очистке и разделении координационных соединений. Например, очистка [Сг(ННз)в] " от [Сг(ННз)б (Нр) и [Сг(ЫНз)4 (Н20)2] на ионообменной колонке с AljOg использование для синтеза хлороаквокомплексов Rh , и и т. д. высоковольтного электрофореза на бумаге. [c.195]

Т. к. раств. в воде, для выделения из клеточной стенки их обычно Экстрагируют 10%-ной трихлоруксусной к-той при 2-4 °С в течение 24 ч с послед, осаждением этанолом или ацетоном. Более продолжит, экстракция может приводить к частичному гидролизу фосфодиэфирных связей или потере О-ацильных заместителей. Иногда Т.к. экстрагируют водным р-ром NaOH или диметилгидраэином, но в этих условиях более вероятна частичная деструкция полимера. Ли-по-Т. к. выделяют обработкой разрушенных клеток водным фенолом. Дальнейшую очистку Т.к. проводят методами гель-хроматографии, ионообменной хроматографии, высоковольтного электрофореза на бумаге и аффшшой хроматографии на лектинах. [c.510]

По сравнению с хроматографией на бумаге разделение веществ при помощи электрофореза происходит гораздо быстрее (время разделения при высоковольтном электрофорезе составляет от 1 до 2 час). Подбором соответствующего pH при помощи буфера можно добиться разделения даже очень близких веществ. На рис. 486 показаны примеры разделения смеси аминокислот и пептидов на приборах со средним и высоким напря кением. [c.541]

Важнейшей деталью аппаратуры для электромиграции является источник постоянного тока. Для электрофореза на бумаге необходим источник с регулируемым напряжением порядка 200—600 б и с силой тока до 50 ма, для высоковольтного электрофореза — источник с напряжением 3000—10 ООО б и с силой тока до 500 ма. При электромиграции в геле или в пористой среде сила тока достигает 1 а при напряжении 200—600 в. Наиболее подходящим источником постоянного тока являются выпрямители с регулировкой выходного напряжения в требуемом диапазоне, питающиеся от обычной электросети. При небольшой силе тока достаточен, например, простой селеновый выпрямитель при электромиграции в агаре или силикагеле используют тиратроновые выпрямители и т. д. В большинстве случаев специального охлаждения не требуется. [c.542]

Исследована [1332] подвижность комплексов 8Ь(1П), Зп(1У) Hg(II), РЬ(П), В1(П1), А (1), Си(П), 2п(П), Мп(П), №(П), Со(П) и Ре(1П) с ЭДТА и нитрилотриуксусной кислотой при высоковольтном электрофорезе (10 000 й) при pH 3—8. Изменение концентрации указанных веществ в пределах 0,01—0,05 М по-разному влияет на подвижность и размер пятен указанных элементов. Нитрилотриуксусная кислота оказалась более эффективной. Иногда вместо введения комплексообразующих реагентов в анализируемый раствор используют бумагу, импрегнированную этими реагентами [1116]. [c.118]

Электрофорез не заменяет хроматографию, но дает очень ценную дополнительную информацию, так как разделение при электрофорезе основано на других свойствах молекул (заряд, размер, форма). Высоковольтный электрофорез на бумаге применен для разделения не только моно-, но и олигосахаридов. Этот метод может быть использован не только для производных углеводов, содержащих заряженную группу (как, например, гексуроновые кислоты, аминомоносахариды, сульфаты и фосфаты моносахаридов), но и для нейтральных соединений, способных образовывать заряженные комплексы с такими электролитами, как борат, арсе-нит или молибдат натрия. Относительные подвижности углеводов зависят от природы комплексообразователя [57]. Правильный выбор электролита часто позволяет идентифицировать углевод. Разделение кислых полисахаридов [58] проводят с помощью высоковольтного электрофореза на бумаге, нейтральные полисахариды предварительно превращают в боратные производные [59]. [c.226]

Определение ЗзОб , 840 , З5ОГ и ЗвО меченных радиоизотопом 3, на бумажных полосках после их разделения методом высоковольтного электрофореза проводят двумя методами. В первом случае вымывают вещество из электрофоретической зоны, превращают его в Ва304 и измеряют -радиоактивность осадка на торцевом счетчике во втором случае измеряют радиоактивность 3 непосредственно на участке электрофореграммы с помощью жидкостно-сцинтилляциопного спектрометра. Последний метод более простой и чувствительный, но его эффективность зависит от природы присутствующих в электролите ионов [616]. [c.60]

Общие методы разделения включают хроматографию в смесях водных и органических растворителей или электрофорез, или и то и другое на бумаге. Из двух методов более медленным является хроматография, в то время как высоковольтный электрофорез может быть проведен в течение 30 мин. Способы обнаружения фосфатов на бумаге варьируют в зависимости от исследуемых соединений наличие в молекуле нефосфатного фрагмента может позволить применить быстрый недеструктивный метод анализа, например нуклеотиды можно определять по поглощению в УФ-свете. [c.411]

Однако в ряде случаев, чтобы добиться необходимого разделения в аппаратах для средневольтного электрофореза, требуется значительно увеличивать продолжительность опыта. Этот недостаток в известной мере обесценивает ту легкость, с которой эти приборы можно изготовить даже в самой простой мастерской. С увеличением продолжительности электрофореза возрастает эффект диффузии, и границы зон теряют свою четкость. В то же время высоковольтный электрофорез при градиенте напряжения 50—100 В/см позволяет примерно в 2 раза сократить продолжительность опыта, что уменьшает диффузию и увеличивает четкость зональных границ. [c.95]

Аппараты для высоковольтного электрофореза, относящиеся к другой группе, устроены таким образом, что фильтровальная бумага погружена в охлаждающую жидкость, не смешивающуюся с водой тепло, воспринятое этой жидкостью, поглощается затем в системе водяным охлаждением. В таких аппаратах бумага помещается вертикально между двумя ваннами, содержащими буферный раствор. В связи с вертикальной укладкой бумаги важно правильно выбрать полярность электродов. Из-за электроэндоосмоса происходит перемещение буферного раствора от анода к катоду. Если, например, отрицательный полюс источника тока соединить с верхней ванной, то специфическое образование хвостов при электрофорезе, вызванное электроэндоосмотическим потоком снизу вверх,, будет полностью компенсировано неспецифическим образованием хвостов , обусловленным движением буферного раствора сверху вниз под влиянием силы тяжести. [c.114]

Все методы, описанные для средневольтного электрофореза, без каких-либо изменений можно воспроизвести на аппаратах для высоковольтного электрофореза. Исключение составляет двухбуферная система. Как известно, в аппаратах с непосредственным [c.114]

Для разделения Zn, u и Ga был использован метод высоковольтного электрофореза на бумаге Ватман № 3 [637]. Разделение проводят в 0,1 М растворе винной кислоты при напряжение 80 в/см в течение 28 мин. при 25 С. Этот же метод используется для количественного анализа смеси 38 неорганических июнов (в том числе Ga +) на бумаге Ватман № 1 в 1 лимонной кислоте при 30 в/см и силе тока 2—3 ма [1309. [c.65]

Аналитическая химия серы (1975) -- [ c.60 ]

Аминокислоты, пептиды и белки (1976) -- [ c.113 ]

Лабораторное руководство по хроматографическим и смежным методам Часть 2 (1982) -- [ c.0 ]

Методы химии белков (1965) -- [ c.40 ]

Биохимия человека Т.2 (1993) -- [ c.32 ]

Биохимия человека Том 2 (1993) -- [ c.32 ]

Методы практической биохимии (1978) -- [ c.127 ]

Физическая Биохимия (1980) -- [ c.226 , c.227 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология