Аппарат электрофореза на бумаге

Электрофорез. Полоску фильтровальной бумаги кладут на рамку в электрофоретической камере таким образом, чтобы оба ее конца, выходящие за рамку, были погружены в буферный раствор (фиг. 1). После укладывания полосок камеру закрывают стеклянной крышкой и аппарат включают в электросеть. Электрофорез продолжается от 12 до 16 ч при 110 В и силе тока около 1 мА на полоску. [c.48]

Электрофорез на бумаге весьма часто применяют для разделения пептидов и качественного анализа аминокислот. Принцип, по которому классифицируются аппараты для электрофореза, обычно учитывает либо используемое напряжение, либо расположение листа бумаги в пространстве. [c.95]

Описание аппарата. На фиг. 15 схематически изображен изготовленный в мастерской аппарат для горизонтального электрофореза с охлаждающей плитой из плексигласа размером 44 х44 см. Циркуляция охлаждающей жидкости внутри плиты направляется особыми перегородками. В качестве такой жидкости применяют 50%-ный этанол, охлаждаемый в специальном резервуаре смесью льда с ацетоном или с помощью холодильного агрегата. Температура охлаждающей плиты должна быть примерно +6° С. На плиту кладут смоченный буферным раствором лист фильтровальной бумаги, соединенный с электродными отсеками прибора бумажными фитилями, покрытыми целлофаном. Сверху лист фильтровальной бумаги закрывают пластинкой из плексигласа толщиной 15 мм, которая в трех точках плотно прижимается к охлаждающей плите. [c.96]

В горизонтальных аппаратах для высоковольтного электрофореза одного типа охлаждение обеспечивается циркуляцией водопроводной воды в охлаждающей плите, изготовленной из металла. Металлическую плиту, разумеется, необходимо отделить от фильтровальной бумаги полиэтиленовой пленкой с соответствующими изоляционными свойствами. В аппаратах для высоковольтного электрофореза с водяным охлаждением фильтровальная бумага охлаждается и сверху и снизу двумя плитами, которые прижимаются друг к другу надувным резиновым кольцом. Если в ходе эксперимента применяли пришивание, то, для того чтобы обеспечить [c.113]

Буферный раствор состоит из 32 мл уксусной кислоты, 18 мл пиридина и 1950 мл дистиллированной воды. Стартовая точка находится на расстоянии одной трети длины листа от катода. Гидролизат наносят на сухую бумагу, причем стартовое пятно должно быть как можно меньше. Электрофорез продолжается 110 мин при градиенте напряжения 80 В/см. Если нет высоковольтной аппаратуры, то можно работать при среднем напряжении, пропорционально увеличив продолжительность электрофореза. Аппарат с непосредственным жидкостным охлаждением нельзя применять для первого электрофореза, поскольку ДНС-производные Про, Вал, Иле, Лей, Фен и Тир могут быть экстрагированы органическими растворителями. [c.276]

Разделение белков методом электрофореза на бумаге. В последнее время при исследовании белков, кроме фракционирования высаливанием, широко начали применять электрофоретическое разделение белкового комплекса, а также количественное определение отдельных фракций белков. Нередко электрофорез объединяют с хроматографией. В настоящее время есть множество приемов электрофоретического и хроматографического анализа белковых веществ, в связи с чем разработано много различных аппаратов для электрофоретического разделения белков. [c.44]

Сущность метода заключается в том, что оба конца ленты фильтровальной бумаги, смоченные буфером, нужно опустить в буферный раствор, связанный с электродами. Исследуемый раствор нанести на бумагу в виде точки или полосы из нескольких капель. Аппарат (рис. 18) закрыть, чтобы препятствовать испарению тонкого слоя буферного раствора. Через несколько часов электрофореза (в зависимости от применяемой силы поля) белки под действием тока отходят от места их нанесения на не- [c.156]

Рис. 18. Аппарат для электрофореза на бумаге

Сушественное значение имеет содержание влаги в бумаге. Крупнопористые бумаги с большим содержанием влаги дают обычно худшие результаты. Важен также способ расположения бумаги в аппарате — горизонтальный, вертикальный, с изгибами, насколько высоко от уровня жидкости в сосуде с электролитом находится бумажная полоска и т. д., так как этим определяется распределение влаги вдоль нее. Описание различных конструкций имеется в обзорах [6, 20, 33, 36, 37, 38], а по высоковольтному электрофорезу — [33, 39]. [c.94]

Для электрофоретического разделения полисахаридов пользуются как аппаратом Тизелиуса, так и электрофорезом на бумаге или на стекловолокнистой бумаге, а также на колонке со стеклянным порошком. Последние два метода имеют преимущества перед бумажным электрофорезом, поскольку в этих случаях исключается взаимодействие полисахаридов с целлюлозой бумаги, обладающей сильными сорбционными свойствами. [c.56]

Изучение чистоты фенилфлуорона электрофорезом на бумаге. Для электрофореза использовали аппарат ЭФА-1. Готовили 0,1%-ные спиртовые растворы фенилфлуорона, содержащие на 100 мл спирта 3 мл 6 я. соляной кислоты. Электролитом служил водный раствор, содержащий 0,05% щавелевой и 30% уксусной кислот. Электрофорез проводили при 600 в и силе тока 6 лга в течение 4—5 часов, используя хроматографическую бумагу марки средняя . Образовавшиеся две зоны резко отличаются по окраске желтая (фенилфлуорон) и коричневая (соединение II). [c.84]

В самое последнее время в практику вошел электрофорез на бумаге, в известной мере заменяющий исследования на громоздком и дорогостоящем аппарате Тизелиуса. При этом на пропитанную буферным раствором полосу хроматографической бумаги наносят каплю белковой смеси (сыворотка крови, лимфа и т. п.). Сама середина бумаги подвешивается на подставке и ее концы погружаются в катодную и анодную ванны, заполненные буфером, с угольными электродами. На угольные электроды подается известное напряжение. Капля белковой смеси, продвигаясь к тому или иному полюсу, расслаивается. Белки, имеющие наибольший электрокинетический потенциал, продвигаются быстрее, белки с меньшим потенциалом отстают. [c.279]

Литературу по электрофорезу на бумаге несколько осложняет разнообразие терминологии, используемой различными исследователями. Михаэлис [1] в 1909 г. применил термин электрофорез при описании движения коллоидных ионов в электрическом поле в обзоре, изданном в 1945 г., Мартин и Синге [2] называют электромиграцию ионов с низким молекулярным весом в опорной среде ионофорезом. Разделения как маленьких, так и больших молекул, основанные на различиях в заряде, проводятся в одинаковых или сходных аппаратах, и по этой причине большинство исследователей склонны применять термин электрофорез с соответствующим прилагательным, указывающим на характер используемой опорной среды. Тизелиус и др. предложили удачное выражение зональный электрофорез для разграничения этих методов от метода подвижной границы. По-видимому, нет надобности вводить специальные термины для обозначения побочных эффектов, обусловленных хроматографией, адсорбцией или испарением. [c.244]

Излагаются теоретические основы метода, приводятся данные по исследованию состояния ионов в растворах и расплавах и по разделению и выделению элементов различных групп периодической системы. Дается описание приборов и аппаратов, используемых на практике (приборы для периодического и непрерывного электрофореза, для электрофореза на бумаге, для фокусирующего обмена, для определения чисел переноса и подвижности ионов в расплавах и пр.) разбираются специфические особенности и возможные ошибки методов. [c.2]

Вероятно, широкое применение для аналитических и физико-химических исследований получит электрофорез Б тонком слое пористого наполнителя, в качестве которого можно использовать любой сыпучий материал, не проводящий электричества (силикагель, порошок целлюлозы, окись алюминия, мелкий песок и т. д.). На рис. 3.10 дана схема аппарата для тонкослойного электрофореза, аналогичного описанному в работах [119, 120]. Тонкий слой порошка 1 равномерно наносят в сухом состоянии на стеклянную пластину 2, которую помещают на металлическую поверхность 3 (А1, Си), интенсивно охлаждаемую снизу водой от термостата или водопровода. Контакт порошка с электролитом осуществляется с помощью полосок толстой фильтровальной бумаги 5 (с этой же целью можно использовать несколько слоев обычной фильтровальной бумаги). Прн этом порошок равномерно насыщается электролитом вследствие капиллярных явлений. Исследуемую пробу наносят на заранее отмеченное место и включают ток. [c.67]

В настоящее время существуют многочисленные варианты аппаратурного оформления описанного принципа. Эти варианты можно в основном разделить на три группы электрофорез с применением сыпучего наполнителя, электрофорез на листах фильтровальной бумаги и электрофорез в свободном растворе. Рассмотрим несколько аппаратов в соответствии с упомянутой классификацией. [c.71]

Многие методы, применяемые в настоящее время при экспериментальном изучении проблемы происхождения жизни, ничем не отличаются от методов, используемых в других областях, скажем в аналитической химии или биохимии белка. Так, например, наблюдая со стороны аналитическую часть исследований, в которых моделируется состав примитивной атмосферы, совершенно невозможно определить, что эти работы имеют отношение к проблеме происхождения жизни. Здесь точно так же используются хроматография на бумаге, электрофорез и другие методы, применяемые при решении самых разных химических задач. И при этом характер получаемых результатов, равно как и характер ограничений и ошибок, также будет одинаковым независимо от того, имеет данная работа отношение к проблеме биогенеза или нет. Но существуют и такие приемы, которые специфически присущи экспериментам, связанным с проблемой происхождения жизни, например заполнение и опорожнение аппаратов, предназначенных для проведения экспериментов с пропусканием искровых разрядов. Но даже и в этом случае многие индивидуальные операции, такие, как использование вакуумной техники и высоковольтного оборудования, идентичны тем, которые применяются при исследовании ряда химических и физических проблем. [c.50]

Аппарат для электрофореза состоит из двух кювет высотой 6 ом и шириной 7 ом, служаш,их электродными сосудами. Их длина подбирается соответственно числу одновременно используемых пластинок, В каждой кювете по всей ее длине проходит платиновая проволока. Сосуды заполняют буфером для электрофореза, наливая его до уровня верхнего сливного отверстия. Рекомендуется обеспечить циркуляцию буфера, чтобы избежать изменений его pH при проведении опыта, В буфер опускают полоски бумаги, покрытые слоем геля. [c.61]

Полосы ацетилцеллюлозной пленки матовой стороной вверх помещают на поверхность буферного раствора так, чтобы они плавали, а через 1—2 мин пленки погружают в раствор полностью и оставляют смачиваться в течение 10 мин. Потом полосы кладут между листами фильтровальной бумаги и осторожно удаляют избыток буфера. Смоченные буферным раствором полосы помещают в камеру для электрофореза, хорошо натягивают с помощью специальных валиков, имеющихся в аппарате, и на 10 мин включают рабочее напряжение — 250 В. Затем ток выключают и наносят образцы. [c.243]

Наиболее полное разделение смеси белков на индивидуальные компоненты достигается с помощью электрофоретических методов. Как уже обсуждалось в разд. 5.2, проведение препаративного электрофореза, несмотря на то что он обладает значительными теоретическими преимуществами, сопряжено с большими трудностями. Поэтому он используется не часто. В аналитическом же варианте электрофорез — это один из наиболее широко применяемых методов исследования. Действительно, чтобы охарактеризовать очищенные препараты белков, их теперь почти обязательно подвергают электрофоретическому анализу. Для проведения аналитического электрофореза в гелях требуется всего 5—25 мкг белка это обычно не слишком значительная часть полученного препарата. До того как были предложены гелевые системы, электрофоретический анализ проводили в аппарате Тизелиуса методом движущейся границы. Хотя для этого приходилось расходовать десятки миллиграммов белка, разделения очень сходных белков не достигалось и анализ каждого образца требовал больших усилий и внимания. Затем был разработан аналитический электрофорез на бумаге и других целлюлозных материалах, используемых в качестве носителей, что исключило два из указанных выше недостатков метода Тизелиуса количество необходимого для анализа белка значительно сократилось и проводить электрофорез стало намного легче, так как для этого метода требуется только простое оборудование. Однако разрешение осталось примерно таким же, как н прежде, даже при использовании обладающих хорошими качествами современных ацетатцеллюлозных пленок это объясняется тем, что разделение компонентов смеси происходит в соответствии только с приблизительной величиной отношения заряд/размер и многие белки движутся вместе в виде одной зоны (ср. с разд. 5.2). [c.316]

Необходимое количество исследуемого материала весьма мало. Например, для электрофореза на бумаге требуется 0,5—0,8 мг белка, а для электрофореза в полиакриламидном геле — всего 100—200 мкг. В то же время свободный электрофорез даже в аппаратах длямикро-или полумикроанализа требует значительных количеств сыворотки. Это является одной из причин, по которым задерживается широкое использование свободного электрофореза [c.10]

Аппарат для электрофореза. Схема электрофоретического аппарата представлена на фиг. 1. Он состоит из пластмассовой камеры с плотно прилегающей стеклянной крышкой 1. Обе электродные камеры перегородкой из пластика 2 разделены на два отсека. В наружных отсеках 3 расположены платиновые электроды диа-метром0,5—0,8 мм. В каждый из двух внутренних отсеков погружаются концы фильтровальной бумаги 4. В середине перегородки, которая разделяет наружный и внутренний отсеки электродной камеры, на высоте 40 мм расположено соединяющее их отверстие. Это отверстие (0,5 см в диаметре) неплотно закрыто стеклянной ватой. [c.46]

Аппараты для высоковольтного электрофореза, относящиеся к другой группе, устроены таким образом, что фильтровальная бумага погружена в охлаждающую жидкость, не смешивающуюся с водой тепло, воспринятое этой жидкостью, поглощается затем в системе водяным охлаждением. В таких аппаратах бумага помещается вертикально между двумя ваннами, содержащими буферный раствор. В связи с вертикальной укладкой бумаги важно правильно выбрать полярность электродов. Из-за электроэндоосмоса происходит перемещение буферного раствора от анода к катоду. Если, например, отрицательный полюс источника тока соединить с верхней ванной, то специфическое образование хвостов при электрофорезе, вызванное электроэндоосмотическим потоком снизу вверх,, будет полностью компенсировано неспецифическим образованием хвостов , обусловленным движением буферного раствора сверху вниз под влиянием силы тяжести. [c.114]

Таким образом, если смесь белков поместить в электрическое поле, то белки с суммарным отрицательным зарядом будут передвигаться по направлению к аноду, белки с положительным зарядом — к катоду, а белки, находящиеся в изоэлектрической точке (т. е. с нулевым суммарным зарядом), останутся на месте. Разделение такой смеси можно проводить на фильтровальной бумаге, пропитанной буфером, на забуференных крахмальных колонках или в усовершенствованном аппарате для электрофореза, сконструированном Тизелиусом. Для подробного ознакомления с принципами, положенными в основу использования аппарата Тизелиуса, рекомендуем две статьи Олберти [ 1 ]. [c.16]

В основу этого метода положен зонный электрофорез в электролите, который движется перпендикулярно направленик> электрического поля. Первоначальный вариант метода предназначен для разделения на бумаге. Позднее [2] он был применен в отсутствие носителя, при этом стабилизация зон осуществлялась ламинарным потоком достаточно тонкого слоя электролита. Электрофоретическая ячейка имела форму плоской квадратной или прямоугольной рамки, длина ее стороны составляла несколько десятков сайтиметров, а толщина слоя равнялась 0,25—0,60 мм. Вначале этот прибор использовался для разделения высоко- и низкомолекулярных пептидных соединений, нсь позднее выяснилось, что таким способом можно эффективно разделять не только растворимые электрофоретические соединения, но и коллоидные частицы, включая субклеточные частицы и клетки, если конструкция аппарата не допускает быстрого осаждения макрочастиц на стенках электрофоретической ячейки. Движение частиц в условиях непрерывного электрофореза описывается следующим простым соотношением [39] [c.285]

I — прибор с горизонтальной камерой, в котором бумага располагается между стеклянными пластинами (S) 2 — прибор обычного типа [33], пригодный для горизонтального электрофореза белков (разработано много модифицированных его вариантов) 3 — прибор с горизонтальной камерой для разделения белков у этого прибора небольшой объем влажной камеры и насыщение парами электролита происходит быстро 4 — аппарат Кре-мера и Тизелиуса [14], в котором отвод тепла осуществляется с помощью инертной жидкости 5 — аппарат с подвешенной в центре бумагой, часто используется (в виде различных модификаций) для рутинного анализа белков и низкомолекулярных соединений [62, 108] 6 — прибор, в котором избыточное тепло бысттро удаляется иаертной жидкостью, например ССЦ пригоден для разделения низкомолекулярных соединений при градиенте [c.290]

Использовались три типа основных электролитов А, Б, В, которые отличались концентрацией лиганда. Составы буферов а, б к в приведены в табл. 12.12. Бумага ватман № 2, аппарат с охлаждаемой пластиной ОЕ 205 фирмы Labor МШ (Будапешт), температура 20°С. Градиент напряжения 30 В/см. Время разделения 90 мин. Для одного разделения используют 10 мкл образца с 0,01 и. концентрацией каждого компонента. Детектирование электрофорез-грамма протягивается через насыщенный спиртовой раствор ализарина 0,1 М по H t и высушивается в атмосфере аммиака. [c.329]

Одно из первых сообщений о применении авторадиографии в электрофорезе на гелях принадлежит Фербенксу с сотр. [46], которые проводили разделение белков, меченных С, на дисковых электрофоретограммах. Гель в форме диска разрезали с использованием системы проволочек из нержавеющей стали. Срез геля помещали на влажную фильтровальную бумагу, накрывали пластиковой пленкой и подсущивали в аппарате для фильтрации под вакуумом. Были приняты меры, чтобы исключить усадку геля в процессе сушки, так как в противном случае получались ошибочные результаты. Высушенные срезы геля для получения авторадиограмм скрепляли с рентгеновской пленкой. [c.145]

Михль [101] описал аппарат для высоковольтного электрофореза (рис. 3.7). В аппарате бумага помещалась между алюминиевыми пластинами, покрытыми лаком в качестве изолятора. Пластины охлаждались водой. [c.63]

Аппаратурно несколько проще выглядит метод непрерывного электрофореза на листах фильтровальной бумаги, особенно широко применяемый Стрейном с сотр. [135, 143, 144]. Аппараты для непрерывного бумажного электрофореза описаны также в работах [56, 140, 145]. Лист фильтровальной бумаги или располагают между стеклянными пластинами [143, 144], или подвешивают на раме, которую помещают во влажную камеру для уменьшения испарения [56, 140, 145]. Верхний край бумаги спускается в кювету с фоновым электролитом. Движение раствора осуществляется самотеком благодаря гидростатическому давлению. Отбор осуществляется с помощью серии уголков, вырезанных в нижней части бумаги. Смесь разделяемых веществ подается с помощью бумажной ленты, один конец которой прижимается к листу бумаги, а другой опущен в сосудик с разделяемой смесью. Операцию нанесения смеси можно провести также с помощью приспособления, описанного Лоштиц-ким [146]. [c.74]

Широкое распространение для разделения органических и неорганических ионов получил метод непрерывного -бумажного электрофореза, предложенный Деррамом [55]. Особенностью данного метода является то, что электрический контакт создается с помощью уголков бумаги, опущенных в сосуды, в которые погружены электроды (рис. 3.13). Легко понять, что в этом случае поле является неоднородным, а эффективность разделения заметно ниже по сравнению с прямоугольным бумажным электрофорезом при равном общем напряжении. Однако простота конструкции в значительной мере компенсирует отмеченный недостаток. Кроме того, форму поля можно приблизить к равномерной, если сделать несколько дополнительных отводов по высоте бумаги и погрузить их в дополнительные сосуды с электролитом, к которым подведено общее напряжение. При этом эффективность разделения увеличивается примерно вдвое [147]. Методика работы на аппарате Деррама в общем не отличается от описанной ранее. [c.75]

Измененный вариант электрофореза, по Дерраму, описан Сароффом [148]. В данном случае лист фильтровальной бумаги оборачивается вокруг цилиндра, заполненного электролитом. Последний одновременно выполняет роль теплоносителя. Верхняя часть бумаги загибается внутрь цилиндра, и контакт с электролитом осуществляется с помощью бумажных фитилей. Уровень электролита поддерживается постоянным по принципу автопоилки. Основным преимуществом аппарата является высокая эффективность охлаждения, благодаря чему можно значительно повысить напряжение для более полного разделения. [c.75]

На рис. 254 показано разделение белков нормальной сыворотки методом электрофореза на бумаге . На полоску бумаги Перрингер 1389 или Шлейхер и Шюлль 2043 Ь размером 5 X 30 см, пропитанную 0,1 М вероналовым буферным раствором, наносят специальной пипеткой около 15 мкл сыворотки в виде узкого штриха. Бумагу помещают на 20 ч в аппарат Виланда и Фишера напряжение 120 в. Электрофореграмму погружают на 10 мин в 0,25%-ный раствор азокармина в метило вом спирте, содержащем 10% ледяной уксусной кислоты, и для обесцверва ния — трижды на 10 мин в метиловый спирт, содержащий 10% ледяной уксусной кислоты. Для количественного определения вырезают окрашен- [c.915]

В качестве исходных растворов, подвергавшихся электродиализу, применялись модельные растворы -лизин-НС1 концентрацией 30 г/л с содержанием минеральных солей (NH4 1) 20 г/л. Контроль за процессом электродиализа осуществлялся с помощью электрофореза на бумаге [ ]. Электрическая схема установки позволила проводить процесс электродиализа при неизменной плотности тока на каждом аппарате. [c.115]

Разделение белков путем электрофореза (в аппаратах Тизе-лиуса, электрофореза в крахмальном блоке или на бумаге). [c.10]

Дальнейших успехов в химии гликонротеинов следовало ожидать на основе развития методов и лабораторной техники идентификации и количественного определения малых количеств сахаров и аминокислот, структурного анализа олиго- и полисахаридов, эффективного разделения и очистки белков, оценки гомогенности макромолекул и определения их молекулярных весов. С введением улучшенных методов исчерпывающего метилирования и периодатного окисления углеводов, реагентов (борогндридов щелочных металлов), избирательно восстанавливающих карбонильную группу, аналитической ультрацентрифуги Сведберга, аппарата Тизелиуса для электрофореза с подвижной границей, ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии, метода меченых атомов, метода фракционирования белков плазмы крови холодным спиртом по Кону, хроматографии на бумаге и на колонках, хроматографии на ионообменниках, полученных из целлюлозы, упрощенных микрометодов электрофореза (электрофорез на бумаге, крахмальном или агаровом гелях), иммуноэлектрофореза и, наконец, последнего по времени, но важного в этой области открытия конститутивных и индуцируемых бактериальных ферментов, действующих избирательно на гетеросахариды, настало время для третьего и наиболее сложного и плодотворного периода исследования гликонротеинов. [c.18]

Прежде чем налить раствор верхнего концентрирующего геля, сливают бутанол и слой незаполимеризовавшегося раствора и промывают край нижнего геля верхним буфером. Остатки буфера можно удалить полоской хроматографической бумаги, не касаясь поверхности геля. Затем вставляют шаблон в виде гребешка (рис. 3, ) так, чтобы до поверхности нижнего геля оставалось около 5 мм, и заливают раствор верхнего геля. Гель оставляют для полимеризации на 30 мин, а затем пластинку сразу же используют в диск-электрофорезе, так как со временем различие в pH между верхним и нижним гелями сглаживается и в результате концентрирующая способность верхнего геля падает. После полимеризации концентрирующего геля нижнюю плексигласовую прокладку удаляют и камеру помещают в аппарат для [c.102]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология