концевая последовательность определение

Проточное брожение — непрерывное, в каждом из аппаратов батареи осуществляется лишь часть общего процесса, продолжительность его теоретически не ограничена и не предусмотрена остановка для стерилизации. Однако надо проводить профилактическую стерилизацию аппаратов строго последовательно, по номерам аппаратов — от головного к концевому через определенные промежутки времени и независимо от состояния, степени и стадии брожения. [c.1061]

Кроме того, выделен в чистом виде [94] 7-глиадин (глиадин 50), который по молекулярной массе явно превосходит все другие, обнаруженные ранее 7-глиадины. Таким образом, еще остается определенная неясность в отношении истинных молекулярных масс у разных 7-глиадинов, которая может очень отчетливо отражать гетерогенность 7-глиадинов, намного более сильную, чем та, что выявляет анализ с помощью электрофореза в кислой среде. Впрочем, выявлено существование, по крайней мере, 9 7-глиадинов [134], а некоторые исследователи на основе анализа N-концевых последовательностей полагают, что фракция, обозначаемая 72 в действительности, включает не менее двух главных и трех минорных белков и что фракция 73 также гете-рогенна [19]. По молекулярной массе ш-глиадины превосходят а-, Р- и 7-глиадины, но они также образованы одной — единственной полипептидной цепью. Совокупность результатов, полученных разными авторами, указывает на существование двух групп ш-глиадинов — с молекулярными массами соответственно около 65 000 и 75 000—80 000 (табл. 6Б.7). [c.191]

Определение С-концевых остатков в пептидах и белках разработано менее удовлетворительно, нежели определение iV-концевых. Предлагались многочисленные химические методы, но ни один из них не выдержал проверку временем. К счастью, с помощью двух панкреатических ферментов — карбоксипептидазы А и карбокси-пептидазы-В — можно получить некоторую информацию о С-кон-цевой последовательности. Карбоксипептидаза А преимущественно отщепляет аминокислоты с ароматическими боковыми группами, а большинство остальных аминокислот отщепляет гораздо медленнее. С-концевой Pro устойчив. Этот фермент хорош при идентификации С-концевых последовательностей у пептидов, образующихся в результате расщепления с помощью а-химотрипсина (см. разд. 23.3.6), так как такие пептиды на С-конце имеют ароматические аминокислоты. При обработке пептида или белка карбокси-пептидазой А возникают те же трудности, что и при использовании аминопептидаз для анализа iV-концевых последовательностей (см. разд. 23.3.4.1). Карбоксипептидаза В гораздо более специфич- [c.272]

И. ОПРЕДЕЛЕНИЕ С-КОНЦЕВОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ [c.291]

В качестве иллюстрации эффективности такого подхода рассмотрим определение 5 -концевой последовательности 55 РНК из 16 нуклеотидов [схема 2, часть (а)]. Отправной точкой здесь может служить концевой остаток уридин-5 -фосфата он входит в состав динуклеотида Е1, полученного при полном гидролизе гуанил-РНК-азой, и тринуклеотида Д1, полученного с помощью хи- [c.78]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ К-КОНЦЕВОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ АМИНОКИСЛОТ [c.136]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ М-КОНЦЕВОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ АМИНОКИСЛОТ 139 [c.139]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ N-КОНЦЕВОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ АМИНОКИСЛОТ 51 [c.151]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ --КОНЦЕВОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ АМИНОКИСЛОТ ] 59 [c.159]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ Ь -КОНЦЕВОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ АМИНОКИСЛОТ ]07 [c.167]

Несомненный интерес представляет также сравнение строения белков, выделенных из далеко отстоящих видов, например млекопитающих и пресмыкающихся. Определение структуры цитохрома с из сердечной мышцы гремучей змеи показало, что он состоит из 104 аминокислотных остатков, имеет N-концевой ацетилированный глицин, гем, присоединенный к остатку цистеина в положениях 14 и 17, и отличается от белка человека только 14 аминокислотными остатками 11 из них приходятся на 24 остатка с С-конца это может свидетельствовать о несущественной роли значительного отрезка полипептидной цепи у С-конца в определении функциональных свойств молекулы. Таким образом, даже у столь отдаленных видов, как человек и гремучая змея, структура цитохромов с оказывается сходной. В то же время цитохром с, выделенный из дрожжей, несколько отличается от цитохромов позвоночных. К остатку глицина, который в белках позвоночных является N-конце-вым, вместо ацетильной группы у него присоединена дополнительная последовательность из четырех аминокислот остатки в С-концевой последовательности также отличаются. [c.162]

Столь же достоверны результаты исследования конформаций нерегулярных участков (этап 4), которые включают 40 (петля 1), 9 (петля 2) и 24 (петля 3) аминокислотных остатков. Кроме того, нерегулярными участками являются N-концевая последовательность из шести остатков и С-концевая — из восьми (рис. 11.11). Итого, около 45% остатков не входит во вторичные структуры. Исходные для минимизации конформационные варианты нерегулярных фрагментов генерировались таким образом, чтобы их геометрические мотивы приближались к пептидному скелету кристаллической структуры Met -соматотропина и при этом выдерживались определенные расстояния, присущие супервторичной структуре, в частности, расстояние между двумя парами остатков ys, образующих дисульфидные связи. Предпринятая авторами попытка пойти дальше наблюдаемой структуры и рассчитать конформационные состояния остатков нерегулярной части белка заканчивается, как и в аналогичных случаях с конкретизацией до атомного уровня геометрии спиралей и суперспирали, неудачей [285]. При комбинированном подходе и, прежде всего, при использовании методики формирования нулевых приближений иного результата быть не может. [c.326]

Определение аминокислотного состава и N-концевой последовательности основного компонента.Фрагментация на аналитическом уровне протеазой(ами) и приготовление пептидной карты (электрофорез при pH 6,5и2,1) [c.345]

Хотя повышение pH и ионной силы или присутствие липидов способствует агрегации всех глиадинов [10], образование фибрилл наблюдалось только у некоторых а-глиадинов. Ввиду этого возможно, что образование фибрилл вовлекает вторичные специфические взаимодействия, зависящие от конформации основных единиц [114]. Структура других глиадинов может препятствовать образованию фибрилл этого типа. К тому же иммунохими-ческое исследование глиадинов [28] показывает, что а-, р-, у- и ы-глиадины состоят из иммунологически различных белков, т. е. различных по своей третичной структуре. Различие антигенных структур недавно подтверждено методом ELISA [179]. Обнаружены различия в N-концевых последовательностях. Изучение структуры глиадинов с помощью трансмиссионной и сканирующей электронной микроскопии обнаруживает в них не определенную структуру, а аморфную совокупность [55, 142]. [c.198]

Основываясь на ряде известных фактов и собственных наблюдений, Г. Блобель и Д. Сабатини в 1971 г. предположили, что мРНК, которым надлежит транслироваться мембраносвязанными рибосомами, имеют специальную последовательность сразу вслед за инициирующим кодоном, которая кодирует особую Ы-концевую последовательность растущего пептида, служащую сигналом для узнавания мембраной или фактором, посредничающим между рибосомой и мембраной. Таким образом, если рибосома транслирует данную мРНК, кодирующую секреторный или мембранный белок, то через определенное время после инициации трансляции из рибосомы высунется М-концевая часть растущего пептида, несущая сигнал для присоединения к мембране рибосома станет [c.277]

Для определения локализации дисульфидных связей белок подвергают частичному гидролизу на относительно малые фрагменты с помощью протеиназы низкой специфичности, такой как пепсин, в условиях, при которых протекает минимум обменных реакций. Пептиды разделяют и определяют их аминокисло гный состав для того, чтобы убедиться в том, что они гомогенны и содержат одну дисульфидную связь. Дисульфидная связь в каждом пептиде разрывается (см. разд. 23.3.3) и образуются два фрагмента. Если первичная структура белка известна, то достаточно аминокислотного анализа и частичного определения Л/-концевой последовательности в двух фрагментах для того, чтобы определить ту часть цепи (ей), из которой образовался каждый фрагмент. [c.280]

Если белок состоит из нескольких неидентичных полипептид-] ных цепей, как в случае гемоглобина, то данный метод непригоден1 для определения С-концевой последовательности. Гидролитические продукты двух (или более) различных полипептидных цепей при этом дадут весьма сложную смесь. [c.292]

Си через определенные интервалы времени из реакционной смеси отбираются аликвотные части, реакция останавливается подкислением и количество отщепленных аминокислот определяется на аминокислотном анализаторе. Построив график зависимости количества отшеплеиных аминокислот от времени (рис. 22), можно определить С-концевую последовательность. Таким образом удается установить последовательность до 5 аминокислотных остатков. [c.68]

Путь а (как при использовании чисто химических средств, так и при комбинированном использовании химических реакций и ферментов) предъявляет очень жесткие, практически в настоящее время еще недостижимые требования к специфичности и количествен-ности протекающих химических и ферментативных реакций. Поэтому данный путь используется пока лищь для определения сравнительно коротких концевых последовательностей или для установления строения олигонуклеотидов, содержащих до десяти нуклеотидных остатков. [c.17]

Окисление изолированной гидроксильной группы в олиго- и полинуклеотидах находит некоторое применение для определения концевых последовательностей в олигодезоксинуклеотидах (см. гл. 1). В ряду рибонуклеотидов гораздо шире используется для этой цели окисление ц с-гликольной группировки с помощью перйодата. [c.512]

ВОГО замечательного достижения были разработаны химические способы последовательного отщепления N-концевых аминокислот пептидов [8]. Благодаря получению высокоочищенных препаратов карбоксипептидазы и амино-пептидазы позднее удалось разработать методы ферментативного гидролиза для определения концевых последовательностей аминокислот полипептидных цепей. Хартли и Грей [13] предложили метить N-концевые аминокислоты пептидных фрагментов 1-диметиламинонафтил- [c.100]

Для ферментативного определения Ы-концевых групп иногда применяют и аминопептидазы — ферменты, которые последовательно отщепляют аминокислоты с Ы-конца полипептидной цепи. Наиболее хорошо изученным и часто применяемым ферментом является лейцинаминопептидаза, выделяемая из почек свиньи. Этот энзим был использован для изучения Ы-концевой последовательности инсулина и рибонуклеазы. В опытах на синтетических пептидах и амидах аминокислот было показано, что весьма медленно отщепляются те Ы-концевые аминокислоты, рядом с которыми стоят лизин, аргинин И ароматические аминокислоты. Эта относительно узкая специфичность действия энзима затрудняет его применение специфичность действия других аминопеп-тидаз изучена недостаточно. [c.75]

Иногда можно получить более полные данные о С-кон-цсвой последовательности, если построить график скоростей отщепления различных аминокислот под действием карбоксипептидазы. На фиг. 66 приведены данные такого рода для а-кортикотропина, полученные Харрисом и Ли [5] при отношении фермент/ субстрат=1,25, pH 8,0—8,5 и температуре 37°. Пробы отбирали через определенные промежутки времени, фермент инактивировали соляной кислотой, доводя pH до 3,0—3,5 аминокислоты идентифицировали в виде их ДНФ-ироизводных после обработки реакционной смеси ФДНБ при pH 9,0. Было установлено, что С-концевая последовательность следующая . ..-Лей-Глу-Фен действие фермента прекращалось у остатка пролина. [c.188]

Для большинства просто устроенных вирусов, к которым относятся ВТМ и мелкие фаги, молекулярные веса РНК или ДНК, определяемые по константе седиментации, соответствуют значениям, которые можно предположить, если па каждую вирусную частицу приходится одна-единствепная молекула нуклеиновой кислоты об этом свидетельствуют и такие аналитические данные, как анализ по фосфору, определение оснований или ультрафиолетовый спектр поглощения [153, 162]. В тех случаях, когда имеются данные о концевых группах, они, как правило, подтверждают это заключение. Современные данные о концевых последовательностях молекул вирусных РНК приведены в табл. 5. (Некоторые из них уже обсуждались в предыдущем разделе.) [c.111]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология