Метилирование олигосахаридов

Следующая стадия исследования состоит в гидролизе метилированного производного олигосахарида. Однако, по-видимому, эта стадия не всегда необходима. Недавно был предложен метод определения места присоединения концевого моносахарида к восстанавливающему звену дисахарида с помощью масс-спектрометрии метилированных или триметил-силильных производных. Пути распада этих соединений под действием электронного удара резко различны в зависимости от места присоединения моносахаридных остатков друг к другу, что позволяет однозначно определять строение метилированного дисахарида по его масс-спектру. Такой путь изучения строения олигосахаридов представляется весьма перспективным. Однако до настоящего времени генеральным направлением метода метилирования остается расщепление метилированных олигосахаридов до производных моносахаридов и изучение строения последних. [c.438]

Как правило, метилированные олигосахариды гидролизуются значительно труднее, чем исходные олигосахариды, а при жесткой обработке кислотами может происходить частичная деструкция метилированных сахаров, в особенности деметилирование, что весьма существенно искажает результаты. Поэтому в ряде случаев вместо гидролиза более удобным оказывается метанолиз метилированного олигосахарида, проводимый чаще всего обработкой метанольным раствором хлористого водорода (см., например, ). В этих условиях деметилирование и другие побочные реакции, вызываемые кислотами, протекают в меньшей степени. [c.438]

Схема 2.11. Фрагменты, характерные для масс-спектров метилированных олигосахаридов, содержащих связи а - (1-1-2) Й - (1-1-4) в — (1-1-6) — остаток ПОЛНОСТЬЮ метилированной гексозы. [c.76]

Бирмингемская группа подробно исследовала поглощение производных пираноз в области 730—960 см . Впервые были изучены [128] (в вазелиновом масле) многочисленные производные о-глюкозы (метилированные сахара, метилглюкозиды, свободные и метилированные олигосахариды и полисахариды) с а- или Р-конфигурацией пиранозного цикла. В спектрах были найдены систематически повторяющиеся различия, позволившие отнести любое соединение из этих групп к а- или Р-ряду. Так, было отмечено три типа полос, которые обнаруживают смещение, характерное для а,Р-аномеризации, и они были сопоставлены со структурными особенностями, как это видно в таб.л. 6-6. [c.466]

Что касается концевого восстанавливающего моносахаридного звена со свободным полуацетальным гидроксилом, то, как и свободный моносахарид, бн может быть в разных таутомерных формах — пиранозной, фуранозной и оксо-форме. Однако, поскольку и здесь иные формы, кроме пиранозной, существуют в ничтожных количествах, можно полагать, что в метилированном олигосахариде восстанавливающий моносахаридный остаток будет в форме пиранозы и соединен с предыдущим звеном связью 1->4. [c.16]

Метод масс-спектрометрии играет большую роль в определении строения полисахаридов. Его используют не только для идентификации производных, полученных при анализе методом метилирования (см. разд. 26.3.2.1), но и для анализа олигосахаридов непосредственно после перевода их в одно из вышеупомянутых летучих производных [23—25, 44—47] (см. разд. 26.3.2.6). Этим методом может быть определена молекулярная масса небольших олигосахаридов, а также последовательность моносахаридных остатков и положение гликозидных связей, хотя для этого обычно необходимы сведения о природе входящих в состав олигосахарида углеводов [48,49]. Прямая масс-спектрометрическая идентификация олигосахаридов, содержащих более четырех моносахаридных остатков, затруднена, однако была изучена фрагментация полностью ацетилированных гликозидов пентасахаридов [50], а сравнительно недавно описан метод определения О-фруктозных звеньев в полностью метилированных олигосахаридах, который дает информацию о соотношении пиранозных и фуранозных форм и положении гликозидных связей [51]. [c.225]

Ограничения метода метилирования. Поскольку метод метилирования предусматривает гидролиз всех гликозидных связей, то по продуктам гидролиза метилированного олигосахарида нельзя получить информацию о конфигурации гликозидных связей олигосахарида. Кроме того, для моносахаридных звеньев, несущих заместители в положениях 4 или 5 (например, в случае альдоз), теряется также информация о размере цикла и месте присоединения заместителя, так как строение частично метилированных моносахаридов, образующихся из пиранозы с заместителем при С4 и из фуранозы с заместителем при С , одинаково. Например, для остатка D-маннозы две различные структуры фрагмента после метилирования и гидролиза приведут к одной и той же 2,3,6-тpи-0-мeтил-D-мaннoзe IX [c.435]

Лишь в тех случаях, когда фрагмент указанного типа находится на восстанавливаюш,ем конце олигосахарида, неопределенность устраняется путем метилирования продукта восстановления олигссахарида, как было показано выше на примере метилирования олигосахарида П. Однако значение этого ограничения относительно невелико, так как фурано-зидные и пиранозидные связи обычно легко удается различить по скорости кислотного гидролиза. [c.436]

Основное принципиальное ограничение метода метилирования состоит в том, что при гидролизе метилированного олигосахарида теряется почти вся информация о последовательности связи мономерных звеньгв в цепи, за исключением данных о концевых невосстанавливающих звеньях, дающих сполна метилированные производные моносахаридов. [c.436]

Прямая масс-спектрометрическая идентификация олигосахаридов, содержащих более четырех моносахаридиых остатков, затруднена, однако была изучена фрагментация полностью ацетилированных гликозидов пентасахаридов, а сравнительно недавно описан метод определения О-фруктозных звеньев в полностью метилированных олигосахаридах, который дает информацию о соотиощении пиранозных и фуранозных форм и положении гликозидных связей. [c.76]

Определение мест присоединения моносахаридных остатков друг к другу осуществляется исчерпывающим метилированием олигосахарида с последующим гидролизом и анализом образующихся продуктов. Метилирование а большинстве случаев проводится по методу С.-И. Хакомори (см. с, 468), при этом наряду с гидроксильными группами модификации подвергается также ацетамидная группа N-ацетилгексоэа-минов. Полнота реакции контролируется ИК-спектроскопией по отсутствию полосы поглощения гидроксильных групп. [c.463]

Идентификация метилированных сахаров, в частности определение положения свободных гидроксилов-, позволяет заключить, за счет каких гидроксилов были связаны моносахаридные звенья. Метилированный сахар, не имеющий ни одного свободного спиртового гидроксила (лишь один полуацетальный), например тетраметилгексоза, мо- жет образоваться лишь из концевого (неальдегидного) моносахаридного остатка. Метилированный сахар, содержащий один свободный спиртовой гидроксил (кроме полуацетального), например триметил-гексоза, может образоваться из промежуточных и альдегидного концевого остатка олигосахарида (так как при кислотном гидролизе полностью метилированного олигосахарида будут разрываться как гликозидные связи внутри полигликозидной цепи, так и гликозидная связь. [c.14]

Метилирование олигосахаридов проводится повторным действием диме-тилсульфата в щелочной среде (метод Хеуорзса) [9]. Если это оказывается недостаточным для исчерпывающего метилирования, дометилирование производят иодистым метилом в присутствии AggO (метод Пурди [10]). [c.14]

Необходимо подчеркнуть, что хотя метод метилирования дает довольно большую информацию о строении олигосахаридов, он имеет и ряд ограничений. Так, невозможно без дополнительных данных скорости гидролиза судить о размере кольца 2,3-диметилглюкозы. Далее, поскольку при гидролизе метилированных олигосахаридов-разрываются все гликозидные связи, нельзя говорить о последовательности расположения в цепи различных моносахаридных остатков, а также судить о конфигурации гликозидных связей. [c.17]

Анализ гидролизатов метилированных полисахаридов обычно труднее, чем при исследовании метилированных олигосахаридов. В последнем случае при небольшом числе моносазГаридных звеньев в молекуле содержание каждого метилированного компонента бывает достаточно большим. В смеси метилированных сахаров из полисахаридов содержание некоторых компонентов может быть очень малым (например, метилированной концевой группы при длинной линейной цепи). Поэтому здесь требования к точности анализа должны быть весьма большими. [c.69]