Центрифугирование в градиенте плотности сахарозы

Фракционирование белков, нуклеиновых кислот и других макромолекул при центрифугировании в градиенте плотности сахарозы основано на различии в скорости седиментации молекул, пропорциональной их молекулярной массе. Фракции РНК, обладающие различной молекулярной массой, после центрифугирования распределяются в линейном градиенте концентрации сахарозы при этом благодаря значительной вязкости растворов сахарозы улучшается разделение и уменьшается возможность смешивания различных фракций. [c.172]

Б. Разделение тех же РНК путем центрифугирования в градиенте плотности сахарозы и сбора проб в пробирки, как указано в подписи к фпг. 8. [c.41]

Методы выделения РНК (обзоры — см. в общем, довольно близки к методам выделения ДНК. Экстракцию клеток или субклеточных частиц для получения РНК проводят обычно фенолом остаточный белок часто удаляют обработкой детергентом или смесью хлороформа с октиловым спиртом. Отделение ДНК от РНК происходит обычно на стадии экстракции, так как можно подобрать условия, в которых РНК переходит в водный слой, а ДНК остается в интерфазе. Часто применяют для этой цели фракционное осаждение, реже — обработку препарата ДНК-азой. Различные типы клеточной РНК могут быть разделены фракционным осаждением, центрифугированием в градиенте плотности сахарозы методами хроматографии и электрофореза в геле [c.36]

Осадок (ядра), очистка путем центрифугирования в градиенте плотности сахарозы [c.12]

Ретикулоциты инкубировали с меченой аминокислотой в течение 45 сек, после чего их лизи-ровали. Полисомы отделяли путем центрифугирования в градиенте плотности сахарозы. Затем определяли по всему градиенту количество рибосом и связанной с рибосомами меченой аминокислоты (растущие полипептидные цепи). Обозначения кривых I — радиоактивность II — оптическая плотность [28]. [c.26]

Четко разграниченные пики, приведенные на фиг. 7, А, соответствуют полисомам, коэффициенты седиментации которых свидетельствуют о том, что они содержат одну, две, три, четыре и т. д. рибосом. В свою очередь центрифугирование в градиенте плотности сахарозы позволяет отделить 808-частицы от более тяжелых и более гетерогенных полисом (фиг. 7, Б). [c.26]

То, что именно полисомы участвуют в белковом синтезе, может быть показано методом центрифугирования в градиенте плотности сахарозы. Для этой цели клетки в течение короткого промежутка времени обрабатывают меченой аминокислотой, после чего из этих клеток выделяют рибосомы. Затем эти рибосомы разделяют путем центрифугирования в градиенте плотно- [c.26]

Для того чтобы отделить рибосомы от полисом, был использован метод центрифугирования в градиенте плотности сахарозы. Этот метод позволяет разделять материалы, осаждающиеся с разными скоростями в сильном гравитационном поле, и заключается в следующем. Пластмассовую центрифужную пробирку наполняют раствором сахара, концентрация которого плавно меняется, например от 30% на дне пробирки до 15% в верхнем слое. Для получения градиента медленно наполняют пробирку из двух сосудов, содержащих 15-процентный и 30-процентный раствор сахарозы. По мере наполнения количество приливаемого 30-процентного раствора убавляют, а 15-процентного — прибавляют. Испытуемый материал, состоящий из молекул различной величины, осторожно наслаивается поверх раствора сахара, после чего пробирку помещают в ротор центрифуги. Сахарозный градиент сохраняется во время центрифугирования и после него за счет силы тяжести. Во время центрифугирования молекулы разного размера проходят неодинаковое расстояние и остаются разделенными и после центрифугирования. Дно пластмассовой пробирки можно проколоть и собрать отдельные фракции, а затем их проанализировать. [c.310]

Бракк (Вгакке) использовал центрифугирование в градиенте плотности сахарозы для очистки вирусов растений [c.211]

Из этих исследований видно, что для разделения 23 S и 16 S РНК метод электрофореза в геле по чувствительности, разрешающей способности и скорости анализа превосходит метод центрифугирования в градиенте плотности сахарозы или хроматографию на колонке метилированного альбумина на кизельгуре (МАК). Используя метод диск—электрофореза, после окрашивания или сканирования в УФ-свете можно обнаружить уже 1 мкг нерадиоактивной РНК, тогда как в случае метода центрифугирования в градиенте плотности сахарозы или хроматографии на МАК нужны в 100 раз большие количества. Применяя капилляры или [c.246]

Работа выполнена на субклеточных фракциях головного мозга кроликов. Субклеточные фракции микросом, миелина и синаптосом получены с помощью метода дифференциального центрифугирования в градиенте плотности сахарозы (Белик и др., 1969). Первоначально были использованы водные растворы следующих ПАВ тритон Х-100, трис-дезоксихолат (дезоксихолевая кислота, нейтрализованная 1 М раствором трис до нейтральной реакции по бромтимоловому синему), додецилсульфат натрия и дигитонин. В ходе работы по определению ККМ оказалось желательным исследовать влияние ряда других ПАВ дезоксихолата натрия, октил-сульфата натрия, а также провести сравнение двух препаратов дигитонина. [c.119]

Фиг. 204. Электронные микрофотографии рибосом из полос 1 (справа), 3 (в центре) и 5 (слева),] полученных при i центрифугировании в градиенте плотности сахарозы

Центрифугирование в градиенте плотности сахарозы [c.50]

Для идентификации гена, кодирующего протоксин, используют обычную методику. В. thuringiensis выращивают в культуре и лизируют клетки. Выделяют суммарную клеточную ДНК и центрифугируют ее в градиенте плотности s l, чтобы разделить плазмидную и хромосомную ДНК. Если гены протоксинов входят в состав генома, создают банк клонов хромосомной ДНК. Если же они содержатся в плазмиде, то плазмидную ДНК фракционируют по размерам центрифугированием в градиенте плотности сахарозы. Это обогащает ту плазмидную фракцию, которая послужит в дальнейшем исходным материалом для идентификации генов протоксинов (рис. 15.3). [c.335]

Лизосомы (диаметр 200—600 ммт меньше по размерам, чем митохондрии, от которых их можно отделить при помош,и центрифугирования в градиенте плотности сахарозы [104, 222]. Они служат вместилищем высокоактивных гидролитических ферментов, в том числе рибонуклеазы, дезоксирибонуклеазы, фосфатаз, катеп-сипов, гликозидаз и сульфатаз. [c.133]

Для определения молекулярного веса ДНК (обзоры — см. наиболее широко используются методы, основанные на определении скорости седиментации макромолекул. Это определение может быть выполнено по различным методикам наиболее широкое распространение в последнее время приобрела методика, основанная на зональном центрифугировании в градиенте плотности сахарозы в препаративной ультрацентрифуге В данном случае распределение веществ по скорости осаждения можно контролировать по радиоактивной метке, что обеспечивает высокую чувствительность с другой стороны, методика практически без изменений может быть применена и для препаративного разделения нуклеиновых кислот. Предложен ряд эмпирических уравнений, связывающих скорость седиментации двухцепочечного комплекса ДНК со значением молекулярного веса определенным независимыми методами. Последнее из этих уравнений охватывает пределы мол. веса 0,2— 130 108. [c.30]

После отделения ядер хлоропласты могут быть осаждены (в случае анализа фотосинтезирующих тканей) путем центрифугирования яри 500—2000 g. Хотя дифференциальное центрифугирование по предложенной схеме в некоторых случаях и обеспечивает разделение ядер и хлоропластов, обычно фракция ядер оказывается загрязненной хлоронластами и наоборот. Для лучшего разделения компонеитов используют центрифугирование в градиенте плотности сахарозы. В общих чертах метод сводится к следующему. Центрифужную пробирку заполняют раствором сахарозы, так что его концентрация в пробирке плавно уменьшается в направлении снизу вверх. Например, в нижней части пробирки концентрация раствора сахарозы может составлять 1,6 М, тогда как в верхней части концентрация может соста- [c.11]

А. Разделение путем аналитического ультрацентрифугирования (с использованием шлирен-оптики). Пик 1 соответствует 808-рибосомаи, пики г, 3, 4 а 5 соответствуют частицам, содержащим 2 рибосомы (коэффициент седиментации 1103), 3 рибосомы, 4 и 5 рибосом соответственно [1]. В. Отделение рибосом от полисом миксомицета путем центрифугирования в градиенте плотности сахарозы. Ник справа соответствует полисомам, в состав которых входит от 2 до 20 и более рибосом [26]. [c.26]

При такой обработке разрушаются не только клеточные стенки, но и ядерные мембраны и происходит освобождение субъядерных компонентов. При такой обработке сильно повреждаются также ядрышки. Профильтрованный гомогенат затем центрифугируют нри таких скоростях, которые недостаточны для осаждения митохондрий (4000 g в течение 30 мин). Полученный осадок содержит крахмальные зерна, на которые наслоены хроматин и фрагменты ядер. Хлоропласты и фрагменты хлоропластов, если они присутствовали в исходной ткани, также обнаруживаются в этом осадке. Студенистый слой отделяют от нижележащего крахмального слоя, ресуспендируют в среде для растирания и вновь центрифугируют несколько раз для удаления крахмала. Неочищенный хроматин затем очищают центрифугированием в градиенте плотности сахарозы (0,0— 1,8 М). Для полного осаждения хроматина необходимо центрифугирование в течение 2 час при 22 ООО об/мин на 8р1псо 8 У 25 [25]. Нехромосомный материал удаляется главным образом на этой последней стадии, которая может быть повторена. Непосредственное выделение хроматина из тканей не требует большой затраты времени и позволяет получить до 95% присутствовавшего в исходной ткани хроматина, причем степень чистоты препарата в данном случае такая же, какая достигается и нри выделении хроматина из изолированных ядер. [c.31]

Суммарную 32р рр можно затем очистить электрофорезом в полиакриламидном геле или центрифугированием в градиенте плотности сахарозы. [c.227]

Пчела Фракционирование (N114)2804, центрифугирование в градиенте плотности сахарозы -гч > 208 2.2 27 низкими концентрациями бутанола Очищенный фермент со- 1963 Dauterman et al., [c.198]

ОПЫТОВ по седиментации, показанными на фиг. 205. В этом случае исследовался тот же экстракт рибосом, что и на фиг. 203, однако перед центрифугированием в градиенте плотности сахарозы его обработали ферментом рибонуклеазой, вызывающей гидролиз полинуклеотидной цепи мРНК. Видно, что в результате такого гидролиза цепи мРНК полирибосомные грозди разрушаются. Это проявляется в переходе быстро седиментирующих полос в медленно седиментирующую полосу, состоящую из отдельных рибосом. [c.411]

Возможность использования ДНК фага ptA—Е в качестве специфического детектора /г/ -мРНК позволяет также прямо проверить точку зрения, выдвинутую в гл. XVI, что молекулы мРНК представляют собой полигенные матрицы, содержащие последовательность нуклеотидов нескольких соседних генов. С этой целью меченная Н РНК, выделенная из дерепрессированных бактерий, была подвергнута центрифугированию в градиенте плотности сахарозы. РНК, содержащуюся в разных фракциях этого градиента, гибридизовали с ДНК фага ptA—Е для того, чтобы выяснить положение радиоактивной /гр-мРНК в градиенте и, следовательно, рассчитать скорость ее седиментации. [c.490]

Для разделения белков в первом направлении можно использовать не только электрофорез, но и другие методы. Так, например, Пиндер и Гратцер [1008] описали простой и прямой способ последовательного сочетания центрифугирования в градиенте плотности сахарозы и электрофореза в геле. Белки сыворотки человека центрифугировали в градиенте 0—40%-ного раствора сахарозы, содержащего 5% акриламида (2,5% составлял бас-акриламид), ТЕМЭД, (1 мг/мл) и рибофлавин (50 мкг/ /мл). После центрифугирования пробирки облучали люминесцентной лампой для полимеризации акриламида. Чтобы видеть, результаты центрифугирования, один из параллельных гелей окрашивали амидовым черным. Затем из центральной части неокрашенного геля вырезали полоску шириной 2 мм и использовали ее как стартовую зону для электрофореза на пластине 57о-но-го полиакриламидного геля при pH 8,5. [c.234]

Мы определили общее содержание железа в крови 10 особей моллюсков М. mus osa каждую особь исследовали дважды с помощью колориметрического метода Фишера и Прайса (Fis her, Pri e, 1964). Оказалось, что концентрация железа варьирует в пределах от 42 до 113 мкг/мл. Сначала, пытаясь охарактеризовать состояние железа в крови, мы обнаружили, что фракционирование с помощью хроматографии в агарозном геле дает единственный содержащий железо пик, соответствующий молекуле белка определенной величины. Затем путем центрифугирования в градиенте плотности сахарозы мы установили, что компоненты этого пика обладают коэффициентами седиментации, колеблющимися в широком диапазоне (от 66 до 20S). Такие свойства [c.97]

В условиях стабильного функционирования фотосинтетического аппарата быстрой деградации белка D1 должен сопутствовать такой же интенсивный его синтез (Gaba et a . 1987). Процесс присоединения вновь синтезированного белка D1 к комплексу ФСИ можно отслеживать, используя ради-активно меченный S-метионин, который добавляется в систему трансляции белка D1 in vitro, в результате чего он включается в состав этого протеина. Затем проводится анализ включения этого радиоактивно-меченного белка в различные формы комплекса ФСИ, полученные при центрифугировании в градиенте плотности сахарозы тилакоидных мембран, предварительно солюбилизированных слабым детергентом />додецил /5-0-мальтозидом. [c.139]

Смотреть страницы где упоминается термин Центрифугирование в градиенте плотности сахарозы: [c.240] [c.74] [c.564] [c.205] [c.72] [c.359] [c.11] [c.23] [c.26] [c.26] [c.31] [c.32] [c.135] [c.154] [c.388] [c.389] [c.409] [c.473] [c.485] [c.96]

Установление первичной структуры нуклеиновых кислот (1975) -- [ c.2 , c.3 , c.4 , c.5 , c.6 , c.7 , c.8 , c.9 , c.10 , c.11 , c.12 , c.13 , c.14 , c.15 , c.16 , c.17 , c.18 , c.19 , c.20 , c.21 , c.22 , c.23 , c.23 , c.24 , c.25 , c.26 , c.27 , c.28 , c.29 , c.30 , c.31 , c.32 , c.33 , c.34 , c.35 , c.36 , c.37 , c.38 , c.39 , c.40 , c.41 , c.42 , c.43 , c.44 , c.45 , c.46 , c.47 , c.48 , c.49 , c.50 ]

Молекулярная генетика (1974) -- [ c.193 , c.195 , c.388 , c.390 ]

Биохимия человека Т.2 (1993) -- [ c.50 ]

Биохимия человека Том 2 (1993) -- [ c.50 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология