Антигены флуоресцирующие

Иммуноглобулины находятся также на поверхности В-лимфоцитов. Связывание специфических антигенов с этими поверхностными антителами заставляет В-клетки размножаться и продуцировать значительные количества антител в ответ на инфекцию. Для образования молекул IgG необходимы также Т-клетки (существует несколько их типов) в отсутствие последних образуются только молекулы IgM. Считают, что некоторые Т-клетки также распознают антигены, после чего они стимулируют деление В-клеток. Перед тем как лимфоциты начинают делиться, на их поверхности происходят интересные процессы. Если пометить лимфоцит флуоресцирующими антигенами, то видно, что комплексы антитело — антиген сначала располагаются на поверхности клетки относительно равномерно, но вскоре антигены начинают агрега-ровать, образуя пятна , которые затем мигрируют к одному из краев клетки, где в конце концов из них формируется шапочка . Через некоторое время после зтого содержимое шапочки проникает внутрь лимфоцита. [c.386]

Принцип использования флуоресцирующих антител был приспособлен и для электронной микроскопии антитела или гаптены соединяются с электроноплотными веществами (например, с железосодержащим белком ферритином) или такими, которые могут быть сделаны электроноплотными уже после реакции антиген — антитело (например, с антителом связывается пероксидаза из хрена, которой после связывания дают возможность реагировать с диаминобензидином). На практике используется множество комбинаций, включающих антисыворотки с различными специфичностями, фрагменты антител, гаптены, а также такие маркеры для визуализации, как небольшие вирусы и т. п. Эти методы, применимые к целым бактериям, позволяют локализовать поверхностные антигены точнее, чем это делают с помощью оптического микроскопа. Преимущества электронной микроскопии становятся еще более очевидными, когда меченые антитела применяют еще до фиксации, заливки и приготовления срезов, так что метка видна в тонких срезах. В некоторых случаях аналогичным образом метят не антитела, а другие вещества с известной специфичностью чаще всего применяются лектины растений, такие, как конканавалин А, которые специфично связываются с сахарными остатками [88]. [c.125]

Одно из крупнейших достижений последних лет — возможность локализовать нейроактивные вещества типа пептидов внутри отдельных нейронов, используя иммунологические методы. Коротко говоря, интересующее вещество (X) сначала вводят как антиген в организм подходящего для этого животного (кролика), чтобы вызывать появление антител (анти-Х) в крови. Затем делают срезы тех нервных тканей, в которых желательно установить клеточную локализацию X. Эти срезы обрабатывают рядом агентов, начиная с анти-Х, который затем заставляют реагировать с другими антителами — к анти-Х. Эти вторые антитела связывают агентами, обеспечивающими визуализацию обычно это молекулы флуоресцирующего вещества или фермент —пероксидаза хрена. Пример получаемых результатов показан на рис. 9.8. [c.220]

Существуют три основных методических подхода для решения этой задачи. Первый способ — избирательное окрашивание нейронов, выделяющих определенный нейромедиатор, может осуществляться с помощью преобразования естественного медиатора в его флуоресцирующее производное. В этом случае флуоресценция определенных групп клеток поможет выявить специфические связи в структурах мозга. Второй экспериментальный подход связан с введением молекул медиатора, предварительно меченного радиоактивным изотопом. Нейронные окончания, содержащие исследуемый медиатор, способны избирательно захватывать метку. Затем их легко выявить методом авторадиографии. Третий способ обнаружения специфических связей в нервной системе состоит в использовании высоко специфичной способности узнавать либо антигенные детерминанты медиатора, либо определенные ферментные белки, участвующие в метаболизме нейромедиаторов, либо нейрорецептор-ные компоненты на мембране клетки. Последние считаются наиболее убедительным свидетельством в пользу существования конкретных нейрохимических взаимодействий межцу клетками и зонами мозга. Обычно для иммунохимической идентификации используют флуоресцентный краситель или изотоп, который маркирует антитела. В последние годы широко распространились методы, использующие антитела, меченные частицами тяжелых металлов, например коллоидного золота, железа и др. [c.224]

Флуоресцентные методы основаны на способности остатков триптофана в молекулах белков флуоресцировать (330—360 нм) при возбуждении УФ светом (280 нм). Взаимодействие ряда антигенов с антителами приводит к изменению интенсивности флуоресценции, что может быть использовано для оценки количе- [c.43]

Значительно более прецизионный подход основан на титровании активных центров иммобилизованных антител меченым антигеном. В качестве метки целесообразно использовать низкомолекулярные соединения (изотоп, флуоресцирующий краситель, кофактор и т. д.), чтобы в максимальной степени снизить вероятность экранирования меткой антигенных детерминант. Суть метода заключается в насыщении микроколичеств иммуносорбента меченым антигеном. Получаемая в результате опыта изотерма адсорбции позволяет вычислять концентрацию и константы связывания иммобилизованных молекул антител. Так как в подобном эксперименте определяется не абсолютная концентрация активных центров антител, а концентрация центров, доступных для взаимодействия с антигеном, следует ожидать, что эта величина будет различной для антигенов с разными размерами и молекулярной массой. Например, при иммобилизации антител разной специфичности часть центров может экранироваться носителем от контакта с макромолекулярным антигеном, но быть доступной для низкомолекулярного. [c.218]

ФЛУОРЕСЦИРУЮЩИЕ АНТИТЕЛА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ АНАЛИЗЕ АНТИГЕНОВ ЛИМФОИДНЫХ КЛЕТОК [c.164]

Подобным образом можно выявить клетки, продуцирующие антитела данной специфичности. Для этого образцы сначала инкубируют с соответствующим растворимым антигеном в концентрации не более 50—100 мкг/мл, а затем, после отмывания, — со специфической флуоресцирующей антисывороткой. [c.178]

Для выявления вирусного антигена в зараженных клетках используют флуоресцирующие антитела. В каждую лунку планшета Терасаки вносят по 5 мкл конъюгированных с флуоресцеином антител против одного из вирусных антигенов (например, против нуклеокапсидного белка) и инкубируют планшет 30—60 мин при 37 °С во влажной камере. Следует убедиться в том, что на стенках лунок отсутствуют пузырьки воздуха. Альтернативный, непрямой метод идентификации вирусных антигенов предполагает использование моноклональных противовирусных антител мыши и конъюгированных с флуоресцеином антител против иммуноглобулинов мыши. [c.121]

Пример 15-Х. Метод флуоресцирующих антител Антитело к определенному веществу (например, вирусному антигену или компоненту клеточной стенки) связывается с флуоресцирующим красителем. Если антитело инкубировать с клетками, содержа щими антиген, и затем отмыть, то при исследовании клеток с помощью флуоресцентной микроскопии флуоресценция будет наблюдаться только там, где присутствует антиген. Этот метод широко используется для обнаружения антигенов опухолей и для идентификации внутриклеточных вирусов. Более полное описание метода дано в гл. 2, а на рис. 2-20 приведен пример его использования. [c.446]

При помощи флуоресцирующих антител вирусный белок был обнаружен в цитоплазме через 2 часа после инфицирования клеток. Через 3 часа антиген определялся в ядре клетки, а через [c.115]

Л. а. используют в иммунохим. анализе для определения антител, гормонов, лек. препаратов, вирусных и бактериальных антигенов по концентрации комплекса антиген-антитело. При этом в иммунном флуоресцентном анализе к антителу непосредственно присоединяют флуоресцирующие в-ва, напр. РЗЭ, флуоресцирующие красители (чувствительность метода 10" моль/л), а в иммуноферментном анализе к антителу присоединяют фермент и в результате ферментативной р-ции, сопровождаемой биолюминесценцией, определяют ферментативную активность (чувствительность метода 10" моль/л). [c.614]

Флуоресцеин (Fluores ein) Флуоресцирующий краситель, часто использующийся в качестве метки для антител. Позволяет визуализировать антитела после их связывания с антигеном. [c.563]

Другой метод, не связанный с присутствием в белке остатков триптофана, тирозина и фенилаланина, состоит во введении в белок флуоресцирующей метки, например, с помощью флуо-ресцеинизотиоцианата или 5-диметиламинонафталинсульфохло-рида (ДНС-хлорида). Метод применялся для введения флуоресцентной метки в антитела [81, 82], которые затем использовали для обнаружения антигенов. [c.459]

В. Я. Ш е в л я г ин, Успехи соврем, биологии 45, вып. 2, 218 (1958). Обнаруя е-пие антигенов с помощью флуоресцирующих антител. [c.324]

Основной экснериментальной трудностью здесь оказывался вопрос о том, как пометить именно те клетки лимфатического узла, которые вырабатывают антитела к заданному антигену. В качестве гаптена Кунс взял краску, флуоресцирующую при освещении ультрафиолетовым светом (например, флуоресцеин). Антитела вырабатывались клетками к белку с присоединенной к нему гантенпой группой. Затем, когда антитела уже образовались вн5 три клеток лимфатического узла, проводилась при- [c.503]

Локализация антигенов в клетках тканей II. Усовершенствование метода обнаружения антигенов при помошр флуоресцирую-п их антител [c.47]

Лебедев разработал и создал первый интерференционный микроскоп. В 1932 i. Чернике (Zerni ke) изобрел фазово-контрастный микроскоп. Эти два изобретения позволили наблюдать неокрашенные живые клетки и изучать их строение 1941 - Кунс ( oons) для выявления клеточных антигенов использовал антитела, связанные с флуоресцирующими красителями [c.173]

В наиболее широко используемых методах выявления бактериальных антигенов in situ применяются фракции антисывороток или антител, меченных флуоресцирующими красителями, такими, как флуоресцеин или родамин (разд. 1.4.). Связывание, которое происходит исключительно с поверхностными антигенами интактных бактерий, выявляется с помощью оптической темнопольной микроскопии с ультрафиолетовым светом, прошедшим через соответствующие светофильтры, чтобы вызвать характеристическую эмиссию флуорохрома в видимой области. Этот метод очень важен в диагностических и таксономических исследованиях, и поэтому промышленностью выпускается множество меченых антисывороток. По теории и практике этого вопроса опубликовано много трудов [83—85]. [c.125]

Главным инструментом при изучении антигенов клеточных мембран служат флуоресцирующие антитела. Соответствующий метод, впервые разработанный Кунсом и его сотрудниками еще в 1941 г. (обзор СоМтап, 1968), состоит в применении аитител, конъюгированных с флуорохромами, для определения точной локализации специфических антигенов на срезах ткаией или мазках. Этот метод, сочетающий гистохимические и иммунохимические подходы, благодаря своей универсальности, специфичности и простоте занял важное место в клеточной биологии. Чувствительность окрашивания можно повысить, если ис-пользовать непрямой метод. Прн этом немодифициро-ваниую специфическую антисыворотку наносят на исследуемый образец, и антитела соединяются с антигеном. Затем образец отмывают от избытка антисыворотки и обрабаты1вают меченными флуоресцеином антителами к иммуноглобулинам того вида животных, от которого была получена первая антисыворотка. [c.161]

Как прав1ИЛо, для упомянутых исследований обычные прямой и непрямой методы флуоресцирующих аитител не совсем пригодны. Дело в том, что большинство дифференцировочиых антигенов выявляются только как аллоантигены, н поэтому [c.161]

Разумеется, для получения надежных результатов необходимы высокоактивные и высокоспецифические флуоресцирующие реагенты. Многие из широко используемых реагентов, например антисыворотки к иммуноглобулинам человека, имеются сейчас в продаже, однако выбор их, конечно, весьма ограничен. В настоящей главе мы рассмотрим приготовление, очистку и контроль препаратов антител, меченных флуорохромами, и применение таких антител для анализа мембранных антигенов живых клеток и внутренних антигенов фиксированных клеток. Читатель не найдет здесь полного обзора методов иммунофлуоресцеиции, а познакомится с практическими рекомендациями, помогающими в их освоении. [c.165]

Для выявления внутриклеточных антигенов клетки обрабатывают фиксаторами, которые до такой степени нарушают структуру поверхностной мембраны, что она становится проницаемой для флуоресцирующих антител. Ниже будет описан метод выявления интрацитоплазматических антигенов в отдельных клетках. [c.177]

Для выявления какого-либо поверхностного клеточного антигена нужно иметь специфичные к нему антитела и метод, позволяющий подсчитать, какое число клеток в данной популяции связывает эти антитела. Приготовление антисывороток к поверхностным клеточным антигенам подробно описано в гл. 13. Существуют два основных способа выявления клеток, несущих такие антигены. Один из них состоит в том, что антисыворотку обрабатывают флуорохромом, и в результате этого соответствующие клетки флуоресцируют в ультрафиолете (см. гл. 9). Вместо этого можно обрабатывать клеточную популяцию антисывороткой и комплементом при этом клетки, связавшие антитела, погибают, и их можно обнаружить с помощью витального красителя, например трипанового синего. В настоящей главе описан метод определения поверхностных клеточных антигенов, в котором клетки, связавшие антитела, выявляются с помощью особым образом обработанных бараньих эритроцитов (БЭ). Преимущество этого метода состоит в том, что, обладая высокой чувствительностью, он позволяет достаточно быстро исследовать большое число клеток антитела при этом используются в немодифи- [c.273]

Этот бурно развивающийся раздел гистохимии использует способность организма к образованию спещ1-фических антител против чужеродного материала (антигенов). Антиген и антитело взаимодействуют друг с другом с высокой спещ1фичностью. Антигены, антитела, а также комплексы антиген — антитело не видны под микроскопом. Можно, однако, получить конъюгат антител с флуоресцеетным красителем, не вызывая при этом ослабления сродства антител к антигену. При нанесении такого конъюгата на срез ткани происходит специфическая реакция антиген —антитело, которую легко увидеть благодаря характерной флуоресценции в ультрафиолетовом свете при наблюдении в флуоресцентном микроскопе. На этом принципе, основан метод флуоресцирующих антител, позволяющий локализовать специфические реакции антиген — антитело. [c.297]

Этот метод сводится к локализации антител путем прямого связьшания с флуоресцирующим антигеном. [c.299]

Флуоресценцию наблюдают в темнопольном микроскопе флуоресцентной приставкой. Ядра, содержащие Т-антиген, имеют желто-зеленую окраску и темные ядрышки (рис. 8.7). Позднее (через 36—48 ч после начала инфекции) Т-антиген локализуется уже не только в ядрах, но и в цитоплазматических включениях. В качестве контроля исследуют неинфициро-ванные культуры, обработанные флуоресцирующей антисывороткой, для исключения неспецифической флуоресценции. При подсчете положительных клеток учитываются только те, в которых четко видны окрашенные ядра. Мертвые клетки обычно дают высокий уровень неспецифической флуоресценции. [c.244]

Лиганд (например, сАМР или прогестерон) ковалентно связывают с хемилюми-несцирующим соединением (АВЕ1), а антитело делают флуоресцирующим, присоединяя к нему флуоресцеин. Перенос энергии определяется уравнением Ферстера, которое предполагает сближение донора и акцептора на близкое расстояние (около 50 А) [26]. Таким образом, связанный изолюминол излучает зеленый свет, а свободный сохраняет характерное для него голубое свечение. В данной системе можно использовать различные фильтры (полосы излучения достаточно широки), но лучшие результаты получаются при соотношении 460/525 нм. Принцип данного метода заключается в следующем. Антиген (А ) метят хемилюминесцирующим соединением (С), а антитело (АЬ) - флуоресцентным акцептором (Р). При вытеснении А —С определяемым веществом (в данном случае антигеном А и)) неизвестной концентрации расстояние между С и Р становится слишком большим для переноса энергии, так что связанный и свободный антиген легко различимы. [c.498]

Быстрый прогресс клеточн й тммуиологии был связан с использованием иммунологических методов. Особую роль сыграло применение меченых антител, каждое из которых реагирует с одним из вариантов Н-или Ь цепей или с каким-либо иным антигеном. Пометив такое антитело радиоактивным соединением (например, Н, 1) или флуоресцирующим красителем и обработав ими пр параты (ма ки или срезы) лимфатических кл ток, можно с потной определенностью выявить клетки, с кретирующпе ти содержащие на поверхности тот ти инои антиген, например антиген ц-цепи имм н поб>л ш в. [c.6]

Буклей (1956), применяя технику флуоресцирующих антител, показала, что антиген вируса полиомиелита в зараженной клетке обнаруживается Епервые в цитоплазме. Только на более поздних стадиях инфекции клетки антиген фиксируется в области ядра. [c.115]

Смотреть страницы где упоминается термин Антигены флуоресцирующие: [c.299] [c.217] [c.389] [c.217] [c.165] [c.165] [c.167] [c.224] [c.204] [c.121] [c.209] [c.163] [c.176] [c.178] [c.164] [c.300] [c.306] [c.94] [c.163] [c.170]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология