Антиген обнаружение

Гель-электрофорез. Электрофорез на геле и крахмале применяют для аналитических целей. Наиболее важным применением гель-электрофореза является иммуноэлектрофорез. Для этого вида анализа используют макропористые гели, в частности гели агара и агарозы. Метод иммуноэлектрофореза основан на том, что после разделения электрофорезом происходит диффузия разделенных веществ — антигенов — в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. Навстречу этим соединениям диффундируют антитела. При соединении антигенов и антител образуются характерные дуги осаждения. Метод иммуноэлектрофореза очень чувствителен при обнаружении антигенов, специфических для данных антител. В настоящее время применяют метод введения радиоактивной метки в антигены, благодаря чему радиоиммуноэлектрофорез является одним из самых чувствительных методов анализа биополимеров. [c.364]

На иммунизацию организм отвечает синтезом очень неоднородной популяции антител, молекулы к-рых могут сильно отличаться друг от друга по сродству к антигену. Такая неоднородность объясняется участием в иммунном ответе очень большой популяции В-лимфоцитов, каждый из к-рых синтезирует лишь одну разновидность молекул антител. С помощью техники гибридом (гибридные клетки, получаемые слиянием злокачественных и нормальных анти-телобразующих клеток лимфоцитов) удается получить в больших кол-вах однородные моноклональные антитела, к-рые широко используют в качестве высокоспецифич. реагентов для обнаружения, локализации и выделения разл. в-в, а также для диагностики и лечения нек-рых заболеваний. Гомог. И. накапливаются в больших кол-вах в крови и моче больных при ряде злокачеств. поражений лимфоцитов (т. наз. миеломные И.). [c.217]

Экспресс-диагностика. Экспресс-методы основаны на прямом обнаружении антигена в исследуемом материале от больного. Для этих целей используют РИФ, РНГА, ИФА и их модификации, которые дают возможность обнаружить и типировать вирусспецифический антиген в клетках. [c.291]

Групповые вещества крови. В строгом смысле слова групповыми веществами крови называют серологически различающиеся антигенные детерминанты поверхности эритроцитов человека. Главной системой групповых веществ крови человека является система АВО(Н). Впервые обнаруженные К. Ландштейнером в начале [c.503]

Видовую принадлежность аэробных бактерий определяют путем сравнения обнаруженных морфологических, культуральных, биохимических, антигенных и других свойств выделенной культуры со свойствами бактерий известных видов и вариантов. [c.35]

Серологическое исследование позволяет поставить диагноз в случае обнаружения специфических антител в сыворотке больных. Для серологических реакций используют парные сыворотки, которые берут в первые дни от начала заболевания и спустя 1 — 3 недели, но изучают одновременно. Диагностическое значение имеет нарастание титра антител в 4 раза и более. РТГА, PH, РСК, РТГадс, РИФ, РИА, ИФА ставят с антигенами (диагностикумами), приготовленными из эталонных штаммов соответствующих вирусов. [c.282]

Микроскопия. Для обнаружения антигенов с помощью РИФ препараты-соскобы фиксируют в холодном ацетоне в течение 10 — 15 мин и обрабатывают флюоресцирующими антителами. При люминесцентной микроскопии хламидии трахомы представляют собой флюоресцирующие включения в цитоплазме клеток конъюнктивы. [c.247]

Важным аспектом в проведении иммунологических исследований является подбор источников антигенов для выявления противовирусных антител. В доступных коммерческих тест-системах для обнаружения антител IgM vi IgG к вирусу 5-19 используются рекомбинантные антигены — аналоги белков вируса VPX и VP2. Следует отметить, что использование синтетических пептидов снижает чувствительность метода. [c.309]

На новую высшую ступень люминесцентная цитохимия была поднята Кунсом с сотрудниками [4], разработавшими метод люминесцентно-меченых антител. В основном он заключается в следующем. В результате иммунизации животного соответствующим антигеном получают специфическую сыворотку белковые их фракции, в которых преимущественно сосредоточены специфические антитела, обрабатывают флуорохромом и получают комплекс флуорохром — антитело, используемый для обнаружения соответствующего антигена. Наличие и локализация последнего в микроскопическом препарате выявляется в результате реакции антиген — антитело. Продукт этой реакции ярко люминесцирует и с помощью люминесцентного микроскопа может быть открыт даже в отдельных участках клеток [18, 14]. [c.317]

Поиск нейронспецифических белков, связанных с генетическими нервными заболеваниями, очень сложен, однако перспективен. Примером является белок Pel Duarte (специфический белок мозга), наличие которого связывают с заболеванием шизофренией [12]. Все возрастающее число специфических компонентов нервной системы открываютс помощью иммунологических методов. Так как их функция неизвестна, они обозначаются символами NS1, NS2, L1 и т. д. (NS — антиген нервной системы). Применение техники моноклональных антител ведет к открытию антигенов клеточной поверхности, специфичных для различных типов клеток нервной системы. Таким способом обнаружен фактор адгезии нейрональных клеток (N- AM), который, по-видимому, играет важную роль в развитии нервной системы [13]. Мы вернемся к этому в следующей главе. Установлено, что мозг экспрессирует 30 ООО генов, продукты которых все еще ждут исследования. [c.315]

Уже давно было найдено, что комплемент соединяется с комплексом антиген — антитело. Благодаря происходящему при этом гемолизу можно идентифицировать ничтожные количества комплемента. Эта проба является самым чувствительным методом из всех используемых для обнаружения соединения антигена с антителом. Эритроциты, подвергающиеся действию соответствующего агглютинина, соединяются сперва с С 1, С 2 и С 4, а затем уже с С З [127]. Количественное определение каждого из этих четырех компонентов представляет большие трудности вследствие того, что любой из них обнаруживается лишь в присутствии трех других компонентов, а также потому, что их концентрация в сыворотке очень низка. [c.348]

Выделение чистых И. проводится с помощью ионообменных смол с послед, гель-фильтрацией. Для мн. целей используют препараты миеломных И., особенно минорных классов. Антитела выделяют с помощью иммуносорбентов - фиксированных на нерастворимых носителях (напр, целлюлозе) антигенов. Обнаружение и количеств, определение И. разных классов проводят иммунологич. методами с помощью соответствующих антисывороток. Для определения кол-ва антител используют методы преципитации (иммунная р-ция осаждения антигена антителом), агглютинации (взаимод. антитела с двумя клетками), нейтрализации бактерий и вирусов и др. Широкое распространение получают радиоиммунные и ферментно-иммунные методы, обладающие исключительно высокой чувствительностью и позволяющие определять очень малые кол-ва антител (или антигенов) в смесях с др. в-вами. [c.217]

ПРЕДОТВРАЩЕНИЕ ОТТОРЖЕНИЯ ПЕРЕСАЖЕННЫХ ОРГАНОВ. Главная проблема трансплантации органов состоит в том, что иммунная система организма распознает новый орган как чужеродный и атакует его. Один из путей решения этой проблемы — по-тп>ггаться подавить иммунную систему пациента. Созданы антитела, которые очень эффективно предотвращают отторжение пересаженных почек. Такое антитело взаимодействует с антигеном, обнаруженным во всех Т-кпетках. Т-клетки — это разновидность лимфоцитов, которые в норме атакуют инфицированные вирусом или злокачественные клетки. Эти же кпетки участвуют в отторжении пересаженных органов (гл. 14). Моноклональные антитела более эффективны, чем обычные лекарства, используемые для подавления иммунной системы. Они подавляют только Т-клетки, а не всю иммунную систему, как это делают медикаменты и, таким образом, у больного сохраняется способность противостоять болезни. [c.73]

Две конфигурации устройств ППР показаны на рис. 7.8.-22. В ранних сообщениях по щгамененпо ППР для дегастирования связывания белков речь шла об исследованиях взаимодействий без метки, с участием, например, антител, иммобилизованных на металлических пленках [7.8-55,7.8-56]. Скоро стало ясно, что хотя можно детектировать связанный антиген, в некоторых аналитических средах часто не было возможности отличить этот сигнал от сигнала любого другого яеспецифического взаимодействия с поверхностью [7.8-57]. Показатель преломления в качестве метки и другие оптические метки помогут обойти эту проблему, и, поскольку ППР столь чувствителен, достижимы низкие пределы обнаружения. [c.561]

Стсреоизомер абеквозы -сахар коли таза обнаружен в поверхностных антигенах Е. соИ [c.392]

Если PLP является специфичным кофактором, предназначенным для реакций с аминогруппами субстратов, то не может ли пиридоксаминфосфат (РМР) функционировать в роли кофермента в реакциях превращения карбонильных соединений Первый пример подобной функции РМР был обнаружен в реакции образования 3,6-дидезокси-гексоз, необходимых для синтеза антигенов поверхности бактериальных клеток [46] (рис. 5-8). Глюкоза (в форме цитидиндифосфатглюкозы, или DP-глюкозы) сначала превращается в 4-кето-б-дезокси-СОР-глюкозу. Ее превращение в 3,6-дидезокси-СОР-глюкозу требует пиридоксаминфосфат наряду с восстанавливающим агентом (NADH или NADPH) [c.222]

Этот дисахарид - составная часть группоспецифического вещества крови, так называемого вещества Н, которое, как и вещества А и В, определяет специфичность группы крови. Так, смешивание крови разных групп приводит к специфической реакции антиген-антитело, в результате чего происходит агглютинация или растворение красных кровяных телец. Группоспецифические вещества крови представляют собой гликолипиды или гликопротеины, с помощью которых, например, липидная часть нековалентно закрепляется на внешней мембране эритроцита. К липидной части примыкает сердцевинная часть, состоящая из неспецифической олигосахаридной цепи, к которой примыкает детерминирующий олигосахаридный фрагмент (так называемый гаптен), содержащий группоспецифическое вещество крови [76]. Вещество Н, обнаруженное у обладателей группы крови О, содержит в качестве детерминант-ного трисахарид из г-фукозы, о-галактозы и N-aцeтил-D-глюкoзaминa (а-г-Гис-(1 2)-р-о-Са1-(1 3)-о-01с-ЫАс) [77]. [c.570]

Лектины. От 5 до 10 % массы белков, выделенных из листьев термокоагуляцией, связаны с моносахаридами (6 % у люцерны). Значительную часть определенной фракции этой массы составляют арабиногалактаны [30]. Известно о существовании в листьях белков-арабиногалактанов, которые реагируют с антигеном Ярива (1аг1у [118]) и называются (3-лектинами [12, 13]. Эти белки содержат гидроксипролин, который не был обнаружен в препаратах белков листьев, также как не упоминалось возможное антипитательное действие, отмечавшееся у других лектинов. [c.258]

На четвертом этапе выросшую на среде Китта — Тароцци культуру проверяют на чистоту и идентифицируют по морфологическим, культуральным, биохимическим, антигенным и другим свойствам (см. выше). Иногда для идентификации выделенных культур (или прямого обнаружения анаэробов в исследуемом материале) методом газожидкостной хроматографии определяют характерные метаболиты анаэробного дыхания — летучие жирные кислоты (рис. 1.9) [c.38]

Более чувствительны и чаще дают положительные результаты другие методы РНГА с эритроцитарными групповыми (А, В, С, Д Е) и монорецепторными диагностикумами, а также ИФА, которые ставят с парными сыворотками в динамике заболевания. Антитела к 0-антигенам выявляют начиная со второй недели болезни, а к к/ -антигенам — в более позднем периоде. Р7-антите-ла чаще обнаруживаются у бактерионосителей сальмонелл брюшного тифа (ввиду того что Иг -антиген способствует длительной персистенции возбудителя в организме). Для предварительного отбора лиц, подозрительных на носительство тифозных палочек, используют РНГА с эритроцитарным Г/ -диагностикумом (имеет значение не только обнаружение антител, но и их принадлежность к классу IgG). [c.150]

На основании морфологических, тинкториальных, культуральных и биологических данных, а также результатов индикации антигенов возбудителя делают заключение об обнаружении В. anthra is. [c.190]

Экспресс-методом диагностики хламидиозов можно считать обнаружение в клиническом материале (моча, отделяемое половых органов, материал соскобов) группового антигена возбудителя. Для выявления антигенов как элементарных, так и ретикулярных телец используют ИФА, но чаще — РИФ (прямой и непрямой варианты). На рис. 25 (цв. вклейка) представлены результаты прямой РИФ с исследуемым материалом. При использовании антител, меченных флюорохромом, свечение измеряют с помощью прибора — флюорометра. [c.246]

Встречный иммуноэлектрофорез. РВИЭФ в вирусологической диагностике широко применяется для обнаружения в сыворотках больных не антител, а поверхностных антигенов (например, HBsЛg у больных гепатитом В), а также для выявления других вирусных антигенов, имеющих отрицательный заряд. [c.278]

Экспресс-диагностика. Быстрое обнаружение вируса основано на прямом исследовании материала от больного и дает возможность установить ориентировочный диагноз заболевания, вызванного одним из вирусов оспенной группы. Для выявления вирионов используют электронную микроскопию, а антигенов вирусов — РИФ, РОПГА, РПГ, ИФА. [c.287]

Обнаружить в исследуемом материале вирусный антиген позволяет РОНГА с эритроцитарным антительньш диагностикумом. Эту реакцию используют для экспресс-диагностики крымской геморрагической лихорадки, лимфоцитарного хориоменингита. Обнаружение и типирование вирусспецифического антигена достигается также путем применения ИФА и РОНГА на твердой основе. Положительные результаты указывают на наличие соответствующих антигенов. [c.292]

Высокоспецифичным для диагностики ВИЧ-инфекции является метод иммунноблотинга (см. подразд. 1.4.5). При этом проводится электрофоретическое разделение вирусных белков с последующим перенесением их на мембрану из нитроцеллюлозы. Затем мембрана обрабатывается исследуемой сывороткой. Заключительный этап исследования состоит в выявлении антител к различным белкам ВИЧ. Для этого в систему добавляют антивидовые меченые сыворотки. Индикацию образующихся иммунных комплексов проводят с использованием ИФА или РИА. Результаты иммуноблотинга считают положительными при обнаружении антител к определенным вирусным антигенам р24, рЪ1, а также к gpЛ или к gp]20. [c.308]

Для определения сероконверсии рекомендуются повторные серологические исследования. Обычно диагноз инфекции В- 9 ставят при обнаружении IgM к вирусу 5-19 в сыворотке (приблизительно через 14 дней после начала инфекции). Специфические IgG выявляются в течение 4 мес и дольше. Обнаружение IgG к вирусу 5-19 свидетельствует о наличии протективного иммунитета. Использование иммуноблотинга позволяет оценить давность инфекции, поскольку антитела к антигену VP2 появляются раньше, чем антител к антигену VPI. Это имеет большое значение для установления сроков инфицирования беременных. [c.309]

Другие исследования. Весьма эффективными методами обнаружения ооцист возбудителя или его антигенов в материале является прямая РИФ и ИФА. Преимуш,еством этих методов является высокая специфичность, обусловленная взаимодействием диагностических антител с АГ возбудителя (специфичность ИФА достигает 100%). [c.357]

Серологическое исследование. Для серодиагностики амебиаза применяют РНГА (с антигеном из разрушенных ультразвуком Е. histolyti a), реакцию латексной агглютинации, РСК, РВИЭФ (как для обнаружения антител, так и для выявления специфического амебного антигена), ИФА и др. Наиболее эффективно применение серологических реакций для диагностики внекишечных форм амебиаза. При поражении печени исследуют ее пунктат, а также применяют рентгенологические и радиологические методы исследования. [c.368]

Большинство антигенов вызывает в организме образование целого набора антител, но каждый отдельно взятый лимфоцит продуцирует лишь одно из них. Миеломы — это злокачественные новообразования иммунной системы они развиваются в результате неконтролируемой пролиферации одной линии лимфоцитов. При этом в больших количествах синтезируется один тип белков-антител. Иными словами, миеломы являются природными продуцентами моноклональных антител. По методу Миль-штейна проводят слияние нормальных (неопухолевых) лимфоцитов и клеток миеломы. Вначале полученные гибриды синтезируют смесь антител, включающую два типа антител родительских клеток, а также гибридные их формы, образующиеся путем ассоциации тяжелых и легких цепей антител двух родительских форм. Впоследств ии в результате элиминации хромосом образуются клетки, способные к синтезу антител лишь одного типа. Это могут быть либо антитела, закодированные в геноме лимфоцита, либо антитела, характерные для клеток миеломы. Скрининг и обнаружение клона, синтезирующего искомое антитело, ведут при помощи биохимических и иммунохими-ческих методов. Схема этого метода дана на рис. 7.5. [c.313]

Инфекционность и автономность полового фактора доказывается высокой эффективностью его передачи. Переход F-фактора от F к F клеткам происходит через F-волоски, обнаруженные, например, у Е. соН К12. Их образование детерминируется F- и R-факторами. Диаметр F-волосков около 9,5 нм и длина 20 мкм. Эти волоски несут f -антиген и на них адсорбируются специфические мужские РНК-содер-жащие фаги. Предполагают, что в этой адсорбции принимают участие выпуклости дистальных концов F-волосков. Указанные выпуклости бывают чашеобразные, дисковидные и, наиболее часто, сферические. Полая структура F-волосков обеспечивает транспорт фаговых частиц в чувствительную бактериальную клетку. [c.86]

Обнаружение иммуноадъювантной активности у терполимеров ВП-КК-П-КАФ и иммуногенных свойств у комбинированных макромолекул, состоящих из макромолекулы полиэлектролита, к которой посредством ковалентной связи присоединен ган-тен или антиген [93], позволило синтезировать и исследовать кан-цероген-полимерные антигены. [c.183]

Другой метод, не связанный с присутствием в белке остатков триптофана, тирозина и фенилаланина, состоит во введении в белок флуоресцирующей метки, например, с помощью флуо-ресцеинизотиоцианата или 5-диметиламинонафталинсульфохло-рида (ДНС-хлорида). Метод применялся для введения флуоресцентной метки в антитела [81, 82], которые затем использовали для обнаружения антигенов. [c.459]

В настоящее время с помощью флуоресцентно-цитохимических методик можно специфически выявлять все основные компоненты клеток — белки, ДНК, РНК, липиды, отдельные классы мукополи-сахарпдов, а также основные структуры клеток — ядро, ядрышко, цитоплазму митохондрии, вакуоли и т. д. Хорошие обзоры по применению методов флуоресцентного анализа для обнаружения различных клеток, клеточных веществ и антигенов можно найти в работах Мейселя [24, 25]. [c.293]

Другие методы идентификации рекомбинантных плазмид основаны на экспрессии включенного в них гена. При этом идентифицируется белковый продукт, для чего используются иммунологические методы или методы определения его специфической активности. Для обнаружения антигенов в бактериях путем скрининга, на основе специфического их взаимодействия с антителами, часто используется метод, разработанный Брумом и Джилбертом. Для этого пластиковый диск покрывают слоем специфических радиоактивных антител и помещают его на предварительно лизированные колонии. Антигены из лизиро-ванных бактерий связываются с антителами на диске. Положение антигенов, адсорбированных на диске, определяют с помощью радиоавтографии. [c.316]

Определение непреципитирующих антител путем дробного высаливания сульфатом аммония комплекса антиген — антитело было разработано А. И. Николаевым для выявления антител к растворимым белковым антигенам, а позже совместно с И. Я. Усмановой использовано для обнаружения противопестицидных антител, т. е. антител к химическим промышленным аллергенам. [c.245]

Хотя в табл. 10 эритроциты группы крови О обозначены как не имеющие антигена, это не совсем так. Они обладают антигенами, относящимися к другим системам групп крови, которые будут обсуждаться ниже, а также имеют антиген, связанный с системой ABO. В плазме человека ангглютинин к этому антигену содержится не всегда иногда он встречается в плазме лиц, кровь которых принадлежит к подгруппе AjB, и в нормальной сыворотке некоторых животных. Этот агглютинин обнаружен в сыворотке некоторых угрей, чаще европейских, чем американских, а также может быть получен при иммунизации коз бациллой Шига. Все эти источники мало доступны, а полученные таким путем агглютинины всегда слабы и ненадежны. Поэтому важную роль в дальнейшей разработке методики определения крови сыграло открытие того, что солевые экстракты семян некоторых растений (например, Ulex europeas, дикорастущее растение из Западной и Южной Европы и Северной Африки) содержат агглютинин, специфически реагирующий с антигеном эритроцитов группы О [4,9]. Этот растительный агглютинин заменил в данном случае все другие реактивы. [c.69]

Другой пример практического использования лектинов продемонстрировали Левин и сотр. [22]. Используя анти-К-лектин Vi ia graminea, они показали, что лошадиные эритроциты содержат N-антиген — факт, который нельзя было выявить при помощи адсорбированной кроличьей сыворотки, так как в адсорбированной сыворотке остаются видоспецифические агглютинины. Доказательство наличия N-анти-гена в эритроцитах лошади побудило Левина и его сотрудников предпринять поиски истинного анти-М-агглютинина в сыворотке лошади. Обнаружение его означало бы, что лошадь может быть хорошим продуцентом иммунной сыворотки анти-М. Опыт подтвердил это предположение, и таким образом был открыт новый богатый источник получения иммунной сыворотки анти-М. [c.88]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология