Ген gag, вирусные антигены

Рис. 11.9. Встраивание в ДНК ВКО гена, белковый продукт которого (обычно вирусный антиген) индуцирует иммунный ответ. А. Плазмида, несущая ген антигенного белка, способный экспрессироваться. Б. Двойной кроссинговер, приводящий к встраиванию этого гена в ДНК ВКО.

Высокой чувствительностью обладает ИФА, позволяющая выявить вирусный антиген в экстракте фекалий с помощью специфической сыворотки и конъюгированной антисыворотки. [c.303]

Вирус выявляют в препаратах мозга с помощью электронной микроскопии. Вирусный антиген в мозговой ткани, отпечатках под- [c.306]

I каким-то образом участвуют в представлении вирусных антигенов, связанных с клеточной поверхностью, цитотоксическим Т-клеткам. [c.61]

Гипотеза совместного узнавания МНС объясняет, почему столь многие Т-клетки отвечают на чужеродные молекулы МНС и тем самым вызывают отторжение трансплантата Т-клетки могут так сильно реагировать с чужеродными гликопротеинами МНС потому, что эти молекулы (либо сами по себе, либо в виде комплекса с другими молекулами на поверхности чужеродной клетки) похожи на различные комбинации собственных молекул МНС с чужеродными пептидами. Так, папример, некоторые клоны Т-клеток, реагирующие с вирусным антигеном, ассоциированным с собственной молекулой МНС класса 1, реагируют также и с чужеродной молекулой МНС класса Г в отсутствие вирусного антигена. [c.281]

В непрямом методе антитела не сочетаются с флуорохромом. Вместо этого после взаимодействия антител с антигенами в фиксированных препаратах клеток к ним добавляются анти-гамма-глобулиновые антитела, конъюгированные с флуорохромом. Этот метод более чувствителен и позволяет избежать конъюгации каждого индивидуального антитела с флуоресцентным красителем. Так, одни и те же флуоресцентные антитела к антителам кролика (полученные у овец против кроличьих гамма-глобулинов) могут быть использованы для окраски любых антител, образующихся у кроликов и взаимодействующих с вирусными антигенами в продуктивно зараженных или трансформированных клетках. [c.208]

Исключительно важен иммуноферментный анализ при производстве препаратов медицинского назначения, в том числе из животного сырья и донорской крови. Примеси сопутствующих веществ или вирусных антигенов могут оказаться исключительно вредными для организма. Так, например, актуальной является проблема обнаружения в донорской кр.ови, используемой для переливания или получения медицинских препаратов, вируса гепатита В. Наличие белковых примесей в препаратах инсулина, который, как известно, длительно вводится в организм, приводит к выработке антител, в результате чего эффективность его действия резко снижается. Именно поэтому необходим эффективный контроль за наличием примесей, которые не должны превышать 10 %. Иммуноферментный анализ позволяет обеспечить соответствующий контроль качества препаратов инсулина. [c.122]

Иммунофлюоресцентный метод. Обнаружение бактериальных и вирусных антигенов в инфицированных материалах, тканях животных и культурах клеток при помощи флюоресцирующих антител (сывороток) получило широкое применение в диагностической практике. Иммунофлюоресцентный метод относится к экспресс-диагностике, не уступая другим серологическим реакциям по чувствительности и специфичности (рис. 55). [c.114]

Чашки инкубируют при 37°С до тех пор, пока в 30—50% клеток методом иммунофлуоресценции не будет обнаруживаться вирусный антиген. [c.79]

Для выявления вирусного антигена в зараженных клетках используют флуоресцирующие антитела. В каждую лунку планшета Терасаки вносят по 5 мкл конъюгированных с флуоресцеином антител против одного из вирусных антигенов (например, против нуклеокапсидного белка) и инкубируют планшет 30—60 мин при 37 °С во влажной камере. Следует убедиться в том, что на стенках лунок отсутствуют пузырьки воздуха. Альтернативный, непрямой метод идентификации вирусных антигенов предполагает использование моноклональных противовирусных антител мыши и конъюгированных с флуоресцеином антител против иммуноглобулинов мыши. [c.121]

Иммунофлуоресцентное окрашивание с помощью поликлональной антисыворотки представляет собой удобный и точный метод подсчета зараженных клеток и выявления места размножения вируса при анализе фиксированных срезов зараженных тканей. Используя моноклональные антитела против индивидуальных вирусных полипептидов, иммунофлуоресцентным методом можно изучать и внутриклеточную локализацию вирусных антигенов. [c.139]

Локализация и количественное определение вирусных антигенов по связыванию стафилококков [c.149]

Подсчет числа связавшихся с клетками стафилококков дает возможность количественно исследовать экспрессию вирусных антигенов на клеточной мембране при условии постановки соответствующих контролей [24]. [c.150]

Известны три группы интерферонов а-интерфероны (а-И), образующиеся при воздействии вирусов на лейкоциты 3-интер-фероны (Р-И), появляющиеся при воздействии вирусов на фибро-бласты у-интерферойы, продуцируемые Т-лимфоцитами в ответ на воздействие бактериальными и вирусными антигенами или антисыворотками против поверхностных детерминант лимфоцитов. [c.140]

Выявление с помощыо прямой РИФ. Как и при ИЭМ, в данном случае происходит взаимодействие вирусных антигенов с АТ диагностической иммунной сыворотки или моноклональными антителами (см. подразд. 1.4.5). С помощью РИФ также удается обнаружить специфический вирусный антиген в культурах клеток, инфицированных вирусом. [c.267]

Встречный иммуноэлектрофорез. РВИЭФ в вирусологической диагностике широко применяется для обнаружения в сыворотках больных не антител, а поверхностных антигенов (например, HBsЛg у больных гепатитом В), а также для выявления других вирусных антигенов, имеющих отрицательный заряд. [c.278]

Обнаружить в исследуемом материале вирусный антиген позволяет РОНГА с эритроцитарным антительньш диагностикумом. Эту реакцию используют для экспресс-диагностики крымской геморрагической лихорадки, лимфоцитарного хориоменингита. Обнаружение и типирование вирусспецифического антигена достигается также путем применения ИФА и РОНГА на твердой основе. Положительные результаты указывают на наличие соответствующих антигенов. [c.292]

Выделение и идентификация вируса. Вирус выделяют путем заражения чувствительных животных (шимпанзе и обезьян-мармо-зеток), а также культуры человеческих лимфоцитов, стимулированных фитогемагглютинином, фильтратом фекалий. Вирусный антиген в цитоплазме гепатоцитов определяют с помощью РИФ, скопления вируса позволяет выявить также электронная микроскопия. [c.303]

Высокоспецифичным для диагностики ВИЧ-инфекции является метод иммунноблотинга (см. подразд. 1.4.5). При этом проводится электрофоретическое разделение вирусных белков с последующим перенесением их на мембрану из нитроцеллюлозы. Затем мембрана обрабатывается исследуемой сывороткой. Заключительный этап исследования состоит в выявлении антител к различным белкам ВИЧ. Для этого в систему добавляют антивидовые меченые сыворотки. Индикацию образующихся иммунных комплексов проводят с использованием ИФА или РИА. Результаты иммуноблотинга считают положительными при обнаружении антител к определенным вирусным антигенам р24, рЪ1, а также к gpЛ или к gp]20. [c.308]

Цитотокснческие Т-клетки защищают нас от определенных вирусных заболеваний реагируя с чужеродными вирусными антигенами, экспрессируемы- [c.52]

Учитывая, что иммунная система эволюционировала как механизм, предотвращающий микробную инфекцию, можно отметить два очевидных преимущества ассоциативного узнавания МНС. Во-первых, оно фокусирует внимание Т-лимфоцитов на клеточных поверхностях. Например, связывание цитотоксическими Т-клетками свободного вируса (нли раство жмых вирусных антигенов) было бы неэффективно, так как рецепторы оказались бы занятыми и не могли бы разрушать инфицированные вирусом клетки. Во-вторых, оно может обеспечивать то, чтобы каждая категория антигенов вызывала иммунный ответ надлежащего типа например, цитотокснческие Т-клетки не могут обезвреживать чужеродные растворимые макромолекулы (бактериальные токсины и т.п.) и убивать бактерии или другие микроорганизмы, поэтому способность узнавать соответствующие антигены была бы для них совершенно ненужной. [c.62]

Другими примерами использования интактных клеток с неизмененным геномом для производства лекарственных препаратов могут быть синтез интерферона культивируемыми клетками лимфобластомы (процесс Well ome Foundation, см. разд. 8.3.2) и вирусных антигенов для выработки вакцин при выращивании клеточных культур на инертных микроносителях. [c.328]

В книге американских авторов изложены основы и носледние достижения новой биологической дисциплины - иммуногенетики. Книга удачно сочетает черты учебника и монографии, что делает ее полезной как для начинающих исследователей, так и для специалистов. Па русском языке выходит в 2-х томах. В т. 1 обсуждаются общие подходы и принципы, иммупогепетика иммунитета и гистосовместимости. Т. 2 посвящен иммуногенетике опухолей и вирусных антигенов, а также компонентов крови (маркеры поверхности эритроцитов) и сыворотки (система комплемепта). [c.544]

Три удивительных свойства молекул МНС в течение многих лет ставили иммунологов в тупик. Во-первых, эти молекулы занимают совершенно особое место среди антигенов-мишеней по своему значению при Т-клеточных трансплантационных реакциях. Во-вторых, узнавать чужеродные молекулы МНС может необычно большая доля Т-лимфоцитов если иа типичный вирусный антиген отвечает менее 0,001% Т-клеток организма, то на одиночный чужеродный МНС-антиген реагирует уже более 0,1% Т-клеток. В-третьих, многие из локусов, кодирующих молекулы МНС. более полиморфны, чем какие-либо другие > высших позвоночных. Это означает, что в пределах данного вида каждый локус представлен необычно большим числом аллелей (альтернативных форм одного и того же гена)-их может быть более 100, и каждый аллель встречается в популяции с относительио высокой частотой. По этой причиие, а также потому, что каждый индивидуум имеет семь или больше локусов, кодирующих молекулы МНС (см. ниже , очень редко можно встретить два организма, имеющих идентичный набор гликопротеипов МНС. Это делает весьма трудным подбор доноров и реципиеитов при трансплантации органов людям (за исключением генетически идентичных близнецов). [c.265]

Постоянный контроль состояния клеточной культуры и статистическая оценка вероятности возникновения зеркального ЦПЭ исключают наличие артефакта. Описанное явление дистантной связи наблюдалось более чем в 12 ООО пар камер. Вероятность появления положительного зеркального эффекта 65—85% (для 95% доверительной вероятности). Закономерность проявления зеркального ЦПЭ и его универсальность подчеркиваются статистическим определением по критерию Пирсона эффективности действия трех вирусов, сулемы и УФ-радиации она оказалась одинакова, вероятность же проявления зеркального эффекта при управлении митотическим циклом ниже, чем при действии летальных экстремальных агентов (57 5,3%), а по критерию можно утверяедать, что суш ествуют различия в дистантной передаче цитопатического эффекта и управления митотическим циклом. При предварительном облучении клеток детектора малой дозой УФ-радиации (15 с) наблюдалось достоверное повышение эффективности дистантных межклеточных взаимодействий, в результате чего зеркальный ЦПЭ развивается в 99—100% камер-детекторов, облученных ультрафиолетом в течение 15 с перед стыковкой с камерой-индуктором, в которой развивается ЦПЭ при действии вируса или сулемы. В том случае, когда зеркальный ЦПЭ развивался в результате контакта с клетками ткани, пораженными одпим из вирусов, в культуральной лшдкости и в клетках зеркальных камер вирус не обнаруживался даже при трехкратном пассировании. Иммунологические тесты на выявление вирусных антигенов в зеркальной ткани были отрицательными. Таким образом, дистантные взаимодействия, выявленные нри использовании вирусов, обусловлены индуцированными особенностями метаболизма зеркальных клеток, приводящими их к гибели по законам, свойственным метаболическим нарушениям, сопровождающими, по всей видимости, вирусную инфекцию. При этом в зеркальной культуре вирус отсутствует. С одной стороны, это свидетельствует [c.100]

Известно, что Т-лимфоциты при стимуляции антигеном начинают интенсивно делиться и превращаться в активные клетки-эффекторы. В зависимости от выделяемых ими на клеточной поверхности антител они могут быть разделены по крайней мере на три группы [267]. Первую группу составляют цитотоксические клетки, которые, реагируя с чужеродными вирусными антигенами, убивают зараженные клетки до начала репликации вируса. Молекулярный механизм, обусловливающий гибель клетки-мишени, пока не выяснен. Тем не менее известно, что для этого необходим непосредственный контакт между цитотокси-ческим Т-лимфоцитом - клеткой-киллером и инфицированной клеткой -клеткой-мишенью [268]. Во вторую группу активированных Т-лимфоцитов входят так называемые Т-хелперы, клетки-помощники, необходимые как В-клеткам, так и Т-клеткам для создания соответственно гуморального и клеточного иммунного ответов, а также активации макрофагов [269, 270]. Наконец, третью группу образуют Т-супрессоры, способные подавлять ответы В-клеток или других Т-клеток на антигены. Замечено, что Т-супрессоры, как и большинство Т- и В-лимфоцитов, функционируют только в том случае, если их непрерывно побуждают к этому Т-хелперы, которые, активируя Т-клетки супрессора, сами ингибируются. Такая обратная связь в сложной сети взаимодействий лимфоцитов обеспечивает саморегуляцию активности клеток обоих типов [271]. [c.68]

В прямом методе антитела, полученные к вирусным антигенам, сочетаются с флуорохромом и используются для окраски зараженных клеток. Положительная реакция (желто-зеленый цвет в люминесцентном микроскопе) указывает на присутствие в клетках вирусных антигенов. Этот метод, следовательно, может быть использован для выявления клеточной трансформации, когда антитела вырабатываются, например, против ранних антигенов вируса SV40, или для выявления образования зрелых вирусов, когда получаются антитела против капсидных белков. [c.208]

Серодиагностика. Проводится в реакции нейтрализации, РСК и РТГА со стандартными вирусными антигенами и парными сыворотками больного, взятыми в начале болезни и через 5—7 нед. Постановка реакции требует соблюдения мер безопасности вследствие возможного присутствия вируса в исследуемых пробах крови больного в острый период за левания. Оценка результатов серологических реакций производится с учетом анамнестических данных (ревакцинация, введение противоэнце-фалитного иммуноглобулина). [c.244]

Мышей с определенной характеристикой по локусу К или D иммунизировали одним из вирусов (условно вирусом А). От примированных животных получали Т-клетки, которые использовали в цитотоксическом тесте с клетками-мишенями, зараженными вирусом и относящимися по характеру локуса К (или D) либо к донору Т-клеток, либо к его аллельному варианту. Цитотоксическую реакцию оценивали по интенсивности выделения Сг из клеток-мишеней. Примированные Т-киллеры гаплотипа не дают реакции с генетически идентичными, интактными клетками-мишенями (1). Нет реакции и при заражении клеток-мишеней вирусом, отличающимся от вируса использованного при иммунизации (2). Цитотоксическая реакция положительная, если генетически идентичные Т-кил-лерам клетки-мишени заражают гомологичным вирусом (3). В то же время при использовании клеток-мишеней, отличающихся по локусу К от Т-киллеров, цитотоксическая реакция не развивается даже при наличии гомологичного вируса у клеток-мишеней (К" против К или К против К — 4,5). Аналогичные отношения выяапены для локуса D. В то же время генетические ограничения не проявляются по генам, контролирующим молекулы П класса. Из этих опытов следует, что Т-киллеры распознают как собственные молекулы I класса, так и чужеродный вирусный антиген [c.171]

Рис. 8.4. Методы ИФА типа ELISA для определения вирусных антигенов (а) н антител против вирусов (6).

Внелабораторные анализы. Ощущается необходимость разработки и создания специальных приборов для каждой сферы применения флуоресценции с временным разрешением. Должны выпускаться автоматические флуориметры двух типов. Приборы первого типа должны быть простыми, надежными, способными работать иа сухих элементах питания. В будущем приборы этого типа, как и соответствующие реагенты, должны использоваться и в больницах, и на дому. Такой прибор позволит осуществить довольно сложные клиничеосие анализы, например, непосредственно в операционной или на дому, ще он даст возможность самим больным контролировать ход лечения. Приборы второго типа должны обеспечивать оценку профилей опрвделяе ых веществ (например, бактерий или вирусных антигенов) на соответствующих стрипах микропланшетов или дисках. [c.163]

Получив вирусный антиген, необходимо уничтожить путем йкигания все трупы животных, бумажные полотенца, перчатки инструменты одноразового пользования. Остальные инстру-Нйнты и клетки для животных стерилизуют, а ламинарный бокс тщательно дезинфицируют. [c.73]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология