Тирозин нингидринная реакция

Наиболее общим методом определения концентрации пептидов является колориметрия продуктов реакции с нингидрином [2]. Это один из наиболее чувствительных колориметрических методов. Для обнаружения аминокислот и пептидов разработаны как обычный, так и полностью автоматизированный варианты, причем нингидриновый реагент не вызывает коррозии и его можно подавать обычным микронасосом. Реакция идет по свободным аминогруппам, но в некоторых случаях хромофор образуется с низким выходом. Данные по окрашиванию дипептидов можно найти в работе [3]. У всех дипептидов, содержащих в качестве Ы-концевой аминокислоты аргинин, треонин, серин, глутаминовую кислоту, глицин, фенилаланин, метионин, лейцин и тирозин, интенсивность окраски составляет 1,6-10 у лейцина эта величина составляет 1,7-10 . У дипептидов с М-концевым лизином и аспарагиновой кислотой интенсивность окраски несколько выше (на 20 и 29% соответственно), а дипептиды с Ы-концевым гистидином и триптофаном проявляются несколько слабее (42 и 67% соответственно от средней интенсивности). Дипептиды с М-концевым пролином, валином и изолейцином окрашиваются очень слабо [2,7 6,4 и 8,5% от средней (1,6- 10 ) интенсивности]. [c.391]

Известно, что реактивом на а-аминокислоты служит нингидрин, который с тирозином дает окрашенный продукт. Реакция на аминокислоты выполняется в различных вариантах [6, 7, 8, 9]. [c.218]

Нингидрин дает с белками голубую окраску. Ксантопротеиновая реакция позволяет обнаружить в белках ароматические аминокислоты — тирозин, триптофан, а реакция Миллона — фенольную группу тирозина. [c.293]

Способность аминокислот вступать в химические реакции зависит от ре-акционноспособности соответствующих группировок. Моноаминомонокар-боновые аминокислоты вступают в реакции, характерные для их аминных и карбоксильных групп. Другие аминокислоты, например цистеин, кроме того, вступают в реакции, характерные для сульфгидрильньк групп (—8Н), тирозин — в реакции фенольной группы и т. д. Одной из наиболее характерных реакций аминогруппы является ее взаимодействие с нингидрином [c.20]

В их состав часто входит малое количество фосфора в виде Н3РО4 (протеиды), галоидов, металлов. Белки обладают свободными карбоксильными и (или) аминогруппами, в результате чего они амфотерны (обычно с преобладанием кислотного или основного характера, в зависимости от преобладания групп СООН или МНг в молекуле). Поэтому белки растворимы также в кислотах и щелочах. Постепенно был открыт ряд цветных реакций на белки, исторически сыгравших большую роль. Некоторые из этих реакций были общими для всех белков (или пептидов), например биуретовая реакция (фиолетовое окрашивание с щелочным раствором двухвалентной меди), нингидринная реакция (свойспюнная аминокислотам и заключающаяся в возникновении фиолетовой окраски при обработке смеси, содержащей а-аминокислоты, нингидрином — гидратом трикетогидриндена). Другие цветные реакции характерны для отдельных аминокислот, входящих в состав белка (например, ксантопротеиновая реакция — появление желтой окраски при нитровании азотной кислотой тирозина и т. д.). [c.690]

Наносят на бумагу, как описано выше, капли растворов аланина, метионина, цистина, тирозина и лролина (двойное количество) высушивают бумагу п слегка опрыскивают водным раствором, содержащим 1 % пер.манганата калия и карбоната натрия. На розовом фоне сразу же появляются желтые пятна. Их очерчивают карандашом, и бумагу немедленно отбеливают сернистым ангидридом, помещая ее на короткое время под часовое стекло -над стаканом, в котором проходит реакция бисульфита патрия с соляно кислотой. После удаления избытка ЗОг бумагу опрыскивают раствором нингидрина с коллидином и высушивают. Перманганат окисляет атомы серы метионина и цистина, а также фенольную группу тирозина, но реакция восстановления ЗОг указывает на то, что исходные ами нокиелоты все же остаются. Природа желтого п 11 г м 6 Н та неизвестна. [c.170]

Реакция Паули. Соединения, содержащие имидазольное кольцо (гистидин, метилгистидин, гистамин, карнозин), а также тирозин, дают красно-оранжевое окрашивание после обработки диазореактивом (с. 192), Хроматограмму из пульверизатора слегка опрыскивают сначала диазореактивом, а затем 10%-ным раствором ЫагСОз. Окраска устойчива. Перечисленные реакции можно применять после проявления хроматограммы нингидрином. [c.131]

Дженкинсон и Тинслей [19] идентифицировали с помощью хроматографии на бумаге состав аминокислот, гидролизат которых был получен в ходе изучения аминокислот растительного происхождения, выделенных из компоста. Десять мл гидролизата, содержавшего приблизительно 1 мг связанного азота, запаривали досуха при пониженном давлении, растворяли в 5 мл воды и снова упаривали досуха. Остаток растворяли в 1,5 мл воды и центрифугировали. Осветвленную жидкость в количестве 0,04 мл наносили на бумагу Ватман № 1. Разделение проводили элюентом, предложенным Вольфом [20]. Хроматограмму проявляли, окуная лист в 0,2%-ный раствор нингидрина в ацетоне. Были идентифицированы следующие аминокислоты цистеиновая, аспарагиновая, глутаминовая, лизин, аргинин, глицин, гистидин, серии, аланин, тирозин, пролин, валин, треонин, изолейцин, лейцин и фенилаланин. Метионин не поддавался определению, поскольку его трудно было отделить от глицина в описанных системах растворителей. Метио-нин-5-оксид тоже не отделялся от валина. Хроматограммы опускали в 0,1%-ный раствор изатина в ацетоне для обнаружения про-лина и подтверждения отсутствия оксипролина. Детектирование и определение содержания пептида с остатком лизина в середине цепи проводили с помощью 2,4-динитрофторбензола [21]. Эта реакция протекает, поскольку е-аминогруппа, в отличие от а-амино-группы лизина, свободна и может вступать в реакцию. [c.306]

После опробования ряда методов было решено проверить пригодность реакции Миллона-Бернгарта к определению малых количеств тирозина и исследовать возможность применения колориметрического метода для определения тирозина с нингидрином. [c.217]

О больших возможностях применения автоанализаторов в хроматографическом лабораторном анализе свидетельствует также сообщение фирмы Техникон [49], описывающее автоанализатор, который может применяться для определения 1) общего азота, по Кьельдалю 2) общего белка с помощью биуретовой реакции 3) общего белка, по Фолину (Лоури) 4) аминогрупп с нингидрином 5) тирозина, по Фолину 6) гистидина, по Паули [c.179]

Янари [117] измерил скорости реакций взаимодействия двух дипептидов Ь-лейцин-Ь-тирозина и О-лейцин-Ь-тиро-зина с нингидрином при 25°. Он нашел, что варьируя условия реакции, относительные константы скорости можно изменять в 2,5 раза. [c.200]

З-йодтирозин-J содержит 79 мккюри, или 1,6% исходной активности, а 3, 5-дийодтирозин-Лр1 содержит 355 мккюри, или 11,6% исходного количества йода-J " (примечание 6). Опрыскивая бумагу растворо.м нингидрина,. можно показать, что исходный тирозин полностью реагирует, так как тирозина нельзя обнаружить. Поскольку удельная активность применяемого в реакции йода известна (3050 мккюри16,13 мкэкв, или 498 мккюри мкэкв), то. [c.70]

Постоянную скорость элюирования задают с помощью перистальтического насоса. Элюат, собираемый на фракционном коллекторе, анализируют в потоке или выборочно по фракциям на содержание белка, для чего обычно регистрируют изменение оптической плотности при 280 нм. Другие методы детектирования используют при отсутствии в белке хромофоров (остатков триптофана и тирозина), при работе иа микроуровне или при слишком высоком поглощении при 280 нм, например благодаря присутствию кофактора. В этих случаях можно определять оптическую плотность при 220 им, интенсивность флуоресценции или радиоактивность (при работе с мечеными белками) [14, 161] наконец, при анализе белковых фракций можно использовать химическую модификацию (разд. 1.4.5.1). Например, определенные объемы (аликвотные части) отдельных фракций можно подвергнуть щелочному гидролизу и последующему анализу по реакции с нингидрином. Для обнаружения белков можно использовать реакцию Лоури или реакцию связывания кра-снтеля. Последний метод вполне можно рекомендовать как наиболее простой и чувствительный, причем этому определению не мешает присутствие химических реагентов. Кроме того, состав фракций можно определять с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. [c.23]

Реакция с нингидрином [105]. К 1 мл испытуемой нейтральной жидкости приливают 1—2 капли раствора нТ1нгидрина (100 мг нингидрина в 100 мл воды) и нагревают до кипения. В зависимости от природы кислоты появляется иногда красноватая, пурпурнокрасная, но в большинстве случаев синяя окраска. Эту реакцию дают только те аминокислоты, в которых помимо свободной карбоксильной группы имеется и свободная аминогруппа соответственно с пирролидинкарбоновой кислотой и дикетопиперазином эта реакция не идет. Пролин и гидроксипролин дают л(елтую окраску. Чувствительность реакции очень велика, например для глицина 1 10000, для тирозина 1 5000. [c.168]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология