Лизис быстрый

К осадку прибавляют дистиллированную воду из расчета 2 мл на 1 мл клеток, добавляют 1 каплю раствора детергента тритон 100 и смесь тщательно перемешивают стеклянной палочкой. Наступает быстрый лизис эритро- [c.7]

Строение индивидуального локуса было исследовано в серии опытов с генами гП фага Т4, участвующими в лизисе бактериальной клетки. Мутации в этих генах вызывают быстрый лизис. Были подобраны такие условия опыта, когда при совместном инфицировании бактерий двумя г//-мутантами фага потомство образуется лишь при условии, что в результате рекомбинации мутантных фагов появится фаг дикого типа. Частота рекомбинации при этом также зависела от расстояния между мутациями, как и в случае эукариотической хромосомы. [c.17]

При лизисе клеток Е. соИ высвобождаются нити в виде петель, прикрепленных к остаткам клеточной оболочки. Как видно на рис. 28.5, ДНК этих петель находится не в виде свободно вытянутого дуплекса, а скручена в более компактные образования благодаря ее связи с белками. Быстро седиментирующий комплекс может состоять из таких петель, находящихся в компактном виде. [c.347]

БЫСТРО ЛИЗИРУЮЩИЕ (г) МУТАНТЫ. Мутанты Т-четных фагов, обусловливающие изменение зоны лизиса Е. соИ в конце инфекции. [c.520]

Инъекция генома фага в клетку облегчается действием специфических литических ферментов, которые имеются в составе частицы некоторых фагов. Действие этих ферментов может быть столь эффективным, что при высоких множественностях инфекции клетка разрушается очень быстро ( лизис извне ) и при этом фага-потомства не образует. [c.175]

Ион кальция является регулятором проницаемости мембран. Еще 30 лет назад было установлено, что Са + оказывает влияние на лизис эритроцитов, вызванный механическим или осмотическим воздействием. При помещении эритроцитов в растворы неэлектролитов, например декстрозы или лактозы, они быстро теряют калий и подвергаются гемолизу. Натрий лишь частично предотвращает гемолиз, при этом кальций обладает значительно более выраженным защитным действием. В настоящее время установлено, что кальций модифицирует также и проницаемость поверхностных мембран возбудимых клеток. [c.39]

Поведение полимерных производных белков в организме изучено пока что слабо. Неясно еще окончательно, каковы должны быть эффективные размеры молекул конъюгатов, чтобы замедлить фильтрацию их через почки и в то же время избежать быстрого поглощения клетками печени. Очевидно, что на эти размеры влияют общий и поверхностный заряд конъюгата, а также жесткость полимерной оболочки, поскольку последняя не только экранирует белковую глобулу, защищая ее в ряде случаев от макромолекулярных ингибиторов и иммунологического узнавания , но и препятствует взаимодействию с макро-молекулярными субстратами. Необходимо какое-то оптимальное решение, которое позволило бы получать частично защищенные конъюгаты с заметной активностью, например, в отношении лизиса тромбов и других крупных субстратов. Изучение фармакокинетики полимерных конъюгатов с помощью радионуклидов, технически возможное уже в настоящее время, должно помочь в решении этих задач. [c.167]

После проникновения в клетку фаги размножаются очень быстро. Уже через 10 мин после инфицирования в каждой клетке культуры бакте1 й можно найти 2—3 фага, а через 20 мин — уже 100. После лизиса бактериальной клетки фаги выделяются из нее и переходят в зрелую форму. Клеточные фаги могут находиться и в форме профагов. В этом случае они, находясь в скрытом состоянии, не уничтожают клетку, а при помощи своей ДНК, связанной с ДНК клетки, синхронно репродуцируются вместе с клеткой. Если клетки бактерий, содержащие профаги, попадают в неблагоприятные условия (воздействие ультрафиолетовых лучей или ядовитых соединений), профаги могут перейти в вегетативную форму, размножиться и лизировать клетку. Такие культуры бактерий, содержащие профаги, называют либо [c.60]

Если чувствительные к вибриону бактерии поместить в жидкую среду вместе с бделловибрио, то через несколько секунд хищник их атакует, наносит удар в стенку бактериальной клетки, и после этого быстро вращается вокруг своей продольной оси прн помощи жгутика в результате этого сверлящего вращения проникает внутрь клетки и вызывает лизис ее содержимого. Внутри клеток пораженных бактерий вибрионы размножаются и после их литнческого распада выходят в среду и начинают новую атаку при наличии клеток хозяина. Вибрион-хищник может быть отделен от клеток бактерии-хозяина путем фильтрации [c.61]

К настоящему времени многочисленные исследования показали повсеместное распространение вибриона-паразита в пресных и соленых водоемах, в почве, и особенно в сточных водах он оказался интегральным компонентом природной микрофлоры ряда европейских стран, Южной и Средней Америки, Африки, Австралии, Японии, Индии и Цейлона. Если заражение бактериальной культуры вести большим числом клеток вибриона-па-разита, эквивалентным числу клеток хозяина, то лизис наступает быстро — через несколько часов он может быть завершен. Учитывая, что Bdellovibrio консервируется лиофилизацией и поддается адаптивной изменчивости, можно предполагать возможность использования этого агента при микробной очистке промышленных сточных вод в качестве средства освобождения от бактериальных клеток производственной культуры путем их лизиса. Это лишь возможный перспективный путь исследований для практического использования хищника, паразита бактерий. [c.62]

Вирусы ПОЛИОМЫ и 8У40 ( Обезьяний вирус 40 ) относятся к группе паповавирусов. Они содержат двухцепочечные кольцевые молекулы ДНК. В эксперименте вирус можно перенести для размножения в клетки тканевой культуры. Размножаясь в некоторых (так называемых пер-миссивных) клетках, вирус вызывает их лизис, и по мере его размножения клетки гибнут. В других (непермиссивных) клетках вирус ведет себя иначе. В этом случае размножение вируса подавляется, и примерно в одной из 10 клеток вирусная ДНК интегрируется в клеточную ДНК. Такое включение вирусной ДНК в геном клетки-хозяина может приводить к опухолевой трансформации. В трансформированной клетке образуется белок (Т-антиген), который запускает репликацию клеточной ДНК, и в результате начинается размножение клеток. Инъекция такого рода трансформированных клеток животным приводит к быстрому образованию опухолей. [c.153]

Вопрос о механизме реакции антител с антигенами еще не получил полного разрешения. Несомненна, однако, существенная роль в этом процессе ионных, водородных и ван-дер-ваальсовых связей. Реакция эта, по крайней мере, двухстадийна. Первая стадия протекает очень быстро и не сопровождается видимыми изменениями. Она характеризуется довольно существенным тепловым эффектом ДЯ от 2 до 40 ккал/моль. Вторая стадия взаимодействия антигена с антителом длится часами. В различных системах она может протекать по-разному, сопровождаясь преципитацией (выпадением образовавшегося комплекса в осадок), агглютинацией (слипанием антигенных частичек), лизисом (растворением клеток), нейтрализацией токсинов и вирусов и т. п. [c.112]

Микроскопическое изучение действия сульфата аммония на клетки водоросли показало, что буквально через несколько минут экспозиции в растворе с летальной для этого организма дозой сульфата аммония клетки Prymnesium parvum начинали быстро набухать, постепенно приобретая сферические формы. Движение их прекращалось, и наступал лизис. [c.131]

Таким образом, РП состоит из устойчивого к РНКазе ствола двуспиральной РНК и нескольких боковых хвостов одноцепочечных РНК, Эта структура, будучи намного тяжелее РФ, седиментирует гораздо быстрее ее, но после расщепления поддействием РНКазы одноцепочечных боковых хвостов РНК она превращается в форму, похожую на РФ. После завершения синтеза дочерней плюс -цепи и освобождения ее из состава РП она люжет быть использована либо в качестве матрицы для синтеза комплементарной минус -цепи с образованием повой РФ, либо для построения зрелой фаговой частицы потомства. В течение первых 15 мин после заражения в клетке реализуется первая из этих двух возможностей. За это время постепенно накапливаются РФ и РП, т. е. возрастает количество молекул, участвующих в синтезе молекул РНК фагового потомства. На поздних этапах латентного периода, когда внутриклеточное содержание субъединиц белка оболочки достигает достаточно высокого уровня, начинает осуществляться вторая из этих возможностей. Количество РФ и РП (и, следовательно, число минус -цепей) достигает к этому времени окончательного уровня, а число внутриклеточных частиц фагов-потомков постепенно нарастает, пока весь процесс репродукции не завершится лизисом клетки. [c.472]

Ясно, что существенные для размножения фага Т4 события происходят в течение латентного периода (рис. 7.1, Л), предшествующего высвобождению потомства из инфицированных клеток. Количество фаговых частиц внутри клеток можно определить, искусственно лизируя инфицированные клетки в различные моменты латентного периода. Результаты такой процедуры представлены графически на рис. 7.1, Б. Обратите внимание на то, что в первые 10-11 мин после адсорбции родительских фагов на бактериальной клетке инфицирующих единиц в клетках не обнаруживается вовсе. Этот промежуток называется скрытым периодом. Даже родительские фаги в зараженных клетках утрачивают инфицирующую способность. По прошествии 11 мин в некоторых клетках начинают появляться фаговые частицы, способные заражать бактериальные клетки, и к 14-й мин в каждой клетке содержится в среднем по одной фаговой частице. Затем число таких фагов внутри клеток быстро растет в оставшееся до конца латентного периода время и достигает насыщения в период лизиса клеток. Этот эксперимент показывает, что фаги не просто делятся, как это делают бактерии механизм их размножения был раскрыт в эксперименте Херши—Чейза, описанном в гл. 4. [c.193]

При разрушении клеток силами сдвига некоторые цитоплазматические мембраны сильно дробятся (вероятно, до небольших, открытых мембранных фрагментов) и их нельзя уже осаждать ультрацентрифугированием. Поэтому первую надосадочную цитоплазматическую фракцию (надосадочная жидкость I на рис. 5.1) инкубируют при 21 °С. При температуре выше температуры фазового перехода мембранных липидов крошечные фрагменты агрегируют, т. е. сливаются в мембранные фрагменты больших размеров, которые можно затем осадить [6]. В некоторых случаях неосаждаемая фракция мембран может составлять до 20—30% цитоплазматических мембран. Она образуется при разрушении клеток не только с помощью пресса Френча, но и при обработке их ультразвуком или даже при быстром лизисе протопластов или сферопластов. [c.159]

Когда используют нелизогенный реципиент, множественность заражения обычно составляет 1 или немного меньше при этом клетки, зарал енные частицами трансдуцирующего фага Р1, уже не заражаются другими частицами того же фага и поэтому не теряются вследствие лизиса. Поскольку адсорбция фага Р1 протекает не очень быстро (при 37 °С за 20—30 мин, прошедшие после введения, к клеткам прикрепляется только 30—50% фага), исходное количество фаговых частиц берут из расчета 2—3 на одну бактерию тогда множественность эффективного заражения будет равна 1. В случае использования лизогенного реципиента при повторном заражении клеток фагом выход трансдуктантов не снижается, так как лизогенные клетки иммунны к суперинфицированию фагом Р1 L4. Чтобы убедиться в этом, можно добавить Р1 Ь4-лизат родителя-донора к нелизогенному и лизогенному штаммам из расчета 0,5, 2,5 и 12,5 фаговых частиц на одну бактерию. Последней, наибольшей, множественности заражения достичь довольно трудно, если лизат имеет титр 10 ° ПОЕ/мл. Трансдукцию в этих случаях осуществляют следующим образом. [c.97]

Обработка смесью лизоцим — ЭДТА также является прекрасным способом быстрого и мягкого лизиса грам- [c.380]

Клетки из культуры, находящейся в поздней экспоненциальной или ранней стационарной фазе роста, центрифугируют и ресуспендируют их в солевом буфере с ЭДТА (0,15 М Na l, 0,01 М Na-ЭДТА, pH 8,0) в объеме, составляющем от Vio до V40 объема исходной культуры. Добавляют додецилсульфат натрия (ДСН) в виде 20%-ного (вес/объем) раствора до конечной концентрации 1%. Для ускорения лизиса колбу помещают в водяную баню при 50—60 °С и встряхивают. О начале лизиса свидетельствует быстрое увеличение вязкости и появляющаяся опалесценция. [c.113]

Численность вирусов в море составляет от до 10 частиц в 1 мл воды и коррелирует с плотностью микробного населения. Морфологически они разнообразны. Частицы вирусов не представляют устойчивого компонента и после выхода в открытую воду теряются из нее за относительно короткое время, причем численность частиц резко варьирует. Они могут исчезать при фильтрации зоопланктоном. Вирусы рассматриваются как факторы, контролирующие численность фитопланктона. Оценочная величина лизиса бактериопланктона, обусловленного фагами, составляет 10% в сутки. Syne ho o us лизируется на 1-30% в сутки. Вирусы определенно играют роль ограничивающего фактора при цветении, поскольку цветение вызывается генетически однородной популяцией организмов, например Emiliania huxlei. Вместе с тем цианобактерии быстро создают устойчивые к фаголизису популяции . [c.189]

Известно, что водородным бактериям часто сопутствуют ми-ксобактерии, выделяющие лизирующие экзоферменты. Наиболее часто инфицируются медленно растущие штаммы. На быстро растущей проточной культуре А. eutrophus лизис миксобактериями не наблюдался. То же самое можно сказать и по поводу фаголизиса. Хотя выделены фаги Н-16 и Н-20, специфичные для бактерий вида А. eutrophus [Хавина и др., 1968], при длительном культивировании этого штамма на протоке фактов фаголизиса не наблюдалось, так же как и признаков патогенности для человека. [c.12]

НОЙ воды и остатки разрушенных клеток удаляют с помощью высокоскоростного центрифугирования. Описанная методика приготовления растворов гемоглобина для электрофореза довольно проста и позволяет получать гемолизаты, свободные от лейкоцитов и тромбоцитов. Однако массовые обследования требуют максимально простых и быстрых методов. Для этой цели была предложена упрощенная методика с использованием центрифугирования в смеси сахарозы и детергента [1158]. Она дает хорошие результаты, но не позволяет получать гемоглобин Н (П. Кингстон, личное сообщение, цитируемое Хунцманом [598]). Некоторые авторы используют образцы цельной крови для электрофореза гемоглобинов на ацетате целлюлозы. Лизис клеток осуществляют, включая лизирующий агент либо в образец крови, либо в буфер, которым пропитывают пленку ацетата целлюлозы [343, 437]. Образцы крови можно также высушивать на фильтровальной бумаге и помещать эти бумажные полоски на ацетат целлюлозы [532]. Шнейдер и др. [1143] применяли лизирующий реагент (содержавший в 1 л 2,5 г ЭДТА и 50 кг K N) для лизиса неотмытых эритроцитов. Гемоглобин, подвергаемый электрофорезу, может использоваться в виде оксигемоглобина, карбоксигемоглобина (полученного путем насыщения раствора оксигемоглобина оксидом углерода СО) или цианметгемоглобина (полученного из оксигемоглобина путем его обработки феррицианидом, а зате.ч цианидом) [1141]. Все сравниваемые образцы следует наносить в какой-либо одной форме. [c.321]

Возможные проблемы, возникающие при выделении ДНК из клеток с помощью метода, в котором используется СТАВ, детально описаны в- разд. 4.2.3. Раствор ЗХСТАВ-буфера очень вязок, и если его ие добавлять к суспензия протопластов быстро и не перемешивать тщательно, то" возможно образование комков вместо лизиса протопластов. Комки протопластов легко заметить, тогда как полностью лизированный препараг [c.211]

Разрушение (лизис) клеточных стенок с применением детергентов и ферментов проводят обычно с небольшими порциями биомассы, причем эти методы дают более стандартную обработку для каждой клетки в суспензии, так как концентрации детергентов и ферментов практически одинаковы в любой порции пробы. Как правило, время лизиса не превышает 15—30 мин Рассмотрим этот метод на примере Es heri hia oil. Для лизирования клетки суспендируют в ТЕ-буфете (50 мМ трис-НО.. pH 8,0 и 10 мМ. ЭДТА) из расчета 3 мл буфера на 1 г сырой биомассы и нагревают до 37°. Добавляют 1 мл раствора лизоцима (свежеприготовленный раствор в ТЕ-буфере, 10 мг/мл) на каждые 5 мл суспензии ил эквивалентное количество сухого лизоцима и инкубируют 10— 20 мин при 37° с легким покачиванием. Быстрее клетки лизируются при повышении действующей концентрации лицозима до 10 мг/мл. В таких условиях удовлетворительного лизиса можно достичь в течение 5 мин даже при 4°. [c.137]

Указанных недостатков лишен иммуноанализ на основе цитолизина (рис. 9-4), в котором используют липосомы с одной полостью, образующиеся при удалении детергента диализом. Новый метод не требует ни присоединения лекарственного препарата к липосомам, ни использования комплемента и обеспечивает быстрый лизис везикул. Липосомы, применяемые для анализа по этому методу, при хранении в замороженном виде в атмосфере аргона устойчивы в течение одного года (т. е. непроницаемы для заключенной в них щелочной фосфатазы), нО теряют устойчивость при удалении из их состава холестерола. Как показала электронная микроскопия с негативным окрашиванием, средний размер везикул составляет примерно 0,2 мкм. Добавление к везикулам конъюгата [уабаин—мелиттин (20 нмоль/л) сразу же вызывает полный лизис, но лизиса не происходит в случае предварительной инкубации конъюгата с избытком антител против дигоксина (рис, 9-5). Проводя такую инкубацию в присутствии известных количеств дигоксина, можно построить калибровочную кривую (рис, 9-6). [c.127]

Смотреть страницы где упоминается термин Лизис быстрый: [c.202] [c.272] [c.54] [c.224] [c.367] [c.289] [c.289] [c.316] [c.336] [c.337] [c.161] [c.289] [c.113] [c.20] [c.164] [c.67] [c.375] [c.396] [c.128] [c.140] [c.27] [c.334] [c.238]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология