Лизиса период

Вирусы бактерий называются бактериофагами, вирусы актиномицетов — актинофагами. Слово фаг в переводе с греческого означает пожирающий. Размножение фага возможно только внутри живой микробной клетки, на ранних стадиях ее роста. Сначала фаг адсорбируется на поверхности микробной клетки, затем проникает внутрь ее, где размножается, после чего происходит лизис клетки и освобождение активных фаговых частиц. Период взаимодействия фага с клеткой длится от нескольких минут до нескольких часов. Фаги широко распространены в природе. Они встречаются повсюду, где есть культуры микроорганизмов, которые они способны лизировать (в почве, водоемах, кишечнике человека и животных и т. д.). Некоторые фаги лизи-руют только один вид какого-либо микроорганизма, другие — несколько близких видов. [c.11]

Из уравнения (IX) следует, что главным фактором, определяющим закономерности начального периода роста, является количество внутриклеточного субстрата, приходящегося на одну клетку. Однако часто наблюдаемый факт так называемой пусковой гибели микробных клеток в лаг-фазе из данного уравнения не следует и он может быть описан только при учете обратного процесса ( з= =0), т. е. при учете еще одной стадии — отмирания и лизиса клеток. Изменение логарифмической скорости роста описывается следующей системой [c.322]

Анализы супернатанта и осадка из обломков клеток на содержание ДНК, РНК и протеинов после инкубации асцитных клеток в течение разного периода времени показали, что и РНК, и протеин с началом лизиса из клеток исчезали. Существенных изменений в содержании ДНК не наблюдалось. Данные этих измерений представлены на рис. 51. Условия, при которых проводились измерения, были следующими pH 7,4 температура 37° оптическая плотность измерялась при 260 ммк. Данные по РНК, [c.124]

Таким образом, латентный период — это время, которое проходит с момента заражения бактериальной культуры фагом до начала лизиса первых зараженных клеток, из которых потомство фага выходит в окружающую среду. Период лизиса — это промежуток времени, в течение которого лизируются все новые и новые зараженные клетки, пока все они в конце концов не подвергнутся лизису и не будет достигнут конечный инфекционный титр (плато на кривой) после этой стадии уже не происходит дальнейшего размножения фага, так как потомство фага и оставшиеся н( зараженными клетки не могут прийти в контакт из-за сильного разведения культуры, проведенного сразу же после заражения. Выход фага соответствует среднему числу образовавшихся частиц-потомков на одну зараженную бактерию в опыте, результаты которого представлены здесь, выход фага был равен примерно 100 фаговым частицам на зараженную клетку. [c.260]

После индукции профага в лизогенной клетке все происходит точно так же, как при вегетативном размножении фага в чувствительной бактерии, зараженной экзогенным фагом. Сначала имеет место скрытый период, в течение которого в клетке не удается обнаружить инфекционный фаг. В это время, однако, синтезируются вещества, из которых затем будет строиться потомство фага, т. е. генетический материал (ДНК) и структурные компоненты (белок). Позднее, приблизительно в середине скрытого периода, предшественники фага начинают соединяться в зрелые, инфекционные частицы. Эти частицы потомства, которые можно освободить из клетки и преждевременно — путем искусственного лизиса — появляются в культуральной среде в конце скрытого периода лосле спонтанного лизиса. [c.336]

Литическое развитие-это процесс, в котором фаговые функции выражаются в определенном порядке. Благодаря этому в соответствующий момент имеется нужное количество каждого компонента. Цикл литического развития можно разделить на две основные части, показанные на рис. 16.1. Ранняя инфекция включает период от момента проникновения ДНК в клетку до начала ее репликации. Поздняя инфекция включает период от начала репликации до конечной стадии лизиса бактериальной клетки с освобождением потомства фаговых частиц. При обычном порядке процесса ранняя фаза связана с образованием ферментов, участвующих в репродукции ДНК. Она включает в себя ферменты, связанные с синтезом ДНК, рекомбинацией и иногда модификацией. Благодаря этим ферментам в клетке накапливается пул фаговых геномов. В этом пуле геномы беспрерывно реплицируются и рекомбинируют таким образом, что события, происходящие даже в процессе одного литического цикла, имеют отношение к целой популяции фаговых геномов. [c.206]

Повреждения в некритических участках приводят к ненаследуемым эффектам (удлинение латентного периода одноступенчатого цикла размножения, периода лизиса) у бактериофагов, имеюш,их двухтяжевую ДНК или РНК. Эффект удлинения латентного периода носит кумулятивный характер, и для него, как и для обычного летального эффекта, характерно явление фотореактивации. Это означает, что ненаследственные повреждения в некритических участках ДНК, по-видимому, имеют димер- [c.281]

Период от момента инфицирования клетки бактериофагом и началом ее лизиса называется латентным. Продолжительность латентного периода у одних фагов исчисляется минутами, у других — часами. Количество корпускул, образую- [c.73]

Исследование окрашенных контрольных культур позволяет регистрировать неспецифические изменения окраски. Окрашенные культуры можно инкубировать в термостате 1—2 дня, пока не начнется лизис всего монослоя. В течение этого периода дважды в день подсчитывают количество бляшек, следят за появлением новых и изменением тех, вирусная природа которых при предыдущих просмотрах вызывала сомнения. [c.237]

Для клеточных популяций вьщеляют несколько фаз развития, включая период индукции (лаг-фаза), фазу экспоненциального роста, стационарную фазу и фазу лизиса. [c.685]

По химической природе энтеротоксин L perfringes является простым белком, продуцируется в период споруляции микроорганизма, спустя 3—5 часов с момента внесения вегетативных клеток в среду, содержащую мясной бульон и может быть извлечен после лизиса спо-рангиума. [c.363]

Дрожжи рода andida способны разрушать токсин. Например, С. lipoliti a обеспечивает разрушение 85% афлатоксина после 20-днев-ного культивирования на токсичной среде. Исходя из этого выдвинуто предположение, что разрушают афлатоксины только аспоро-генные дрожжи. Разрушение дрожжами имеет некоторые особенности. Наибольшую активность имеет дрожжевая культура, находящаяся в начальной фазе роста на токсичной среде и интенсивное разрушение афлатоксина В происходит не только в период интенсивного роста, как у бактерий, айв процессе лизиса. [c.390]

Опыт с одиночным циклом размножения четко продемонстрировал общую природу и общую кинетику размножения вирусов бактерий в клет-ках-хозяевах. В результате этого на первый план был выдвинут вопрос фундаментальной общебиологической важности что же происходит внутри зараженной клетки на протяжении латентного периода, во время которого родительская фаговая частица стократно воспроизводит саму себя При рассмотрении этого вопроса прежде всего следует остановиться на том, как именно происходит увеличение числа фаговых частиц внутри зараженной клетки с момента заражения и до момента лизиса. Это можно выяснить с помощью искусственного лизиса, т. е. разрушая зараженные клетки во время латентного периода и определяя инфекционность материала, освобождающегося в результате такого искусственного лизиса. Впервые подобный эксперимент был поставлен в 1948 г. Дёрманом. Результаты этого эксперимента представлены на фиг. 131. [c.261]

Как видно из этих данных, эксперимент Дёрмаиа привел к неожиданным результатам оказалось, что инфекционность, связанная с исходным родительским фагом, в начале процесса размножения утрачивается. Ни в одной из зараженных клеток, подвергнутых искусственному лизису в течение первых 10 мин после заражения, не было найдено инфекционных частиц фага Т4. Однако по истечении 10 мии начинает появляться все больше и больше инфекционных частиц, пока в конце концов число их не достигнет определенной конечной величины, которую можно получить при спонтанном лизисе всех зараженных клеток по окончании нормального латентного периода и периода лизиса. Промежуток времени между заражением и появлением внутри клетки первых инфекционных фаговых частиц представляет собойодну из стадий внутриклеточного размножения фага. Это так называемый скрытый период, в течение которого в зараженной клетке ие содержится ничего, что могло бы вызвать образование стерильных пятен. [c.262]

Итак, в момент заражения в клетку-хозяина поступает вся или почти вся ДНК и лишь очень небольшая часть белка родительского фага. Эти данные свидетельствуют о том, что носителем генетической непрерывности фага должна быть именно ДНК. Иначе говоря, ДНК является наследственным веществом внеклеточного фага (20—35% адсорбрирован-ного фагового отделяются от зараженных клеток при встряхивании в смесителе это количество представляет, по-видимому, ДНК той незначительной доли фаговых частиц, которой не удается заразить бактерии или надлежащим образом инъецировать в них свою ДНК). Отделение фаговой ДНК от белковой оболочки в момент заражения, очевидно, объясняет существование скрытого периода на ранних стадиях внутриклеточного развития фага. Именно в этот период, как установил Дёрман при помощи опыта с преждевременным лизисом, в зараженной клетке не удается обнаружить ни одной инфекционной фаговой частицы. Дело в том, что, будучи лишена органов, которые служат для прикрепления и инъекции, ДНК родительского фага, освободившаяся в результате искусственного лизиса клетки-хозяина, уже, конечно, неспособна более проникнуть в новые клетки. [c.265]

Отделение родительской нуклеиновой кислоты от родительского белка в самом начале инфекционного процесса отражает наиболее характерное свойство вирусов, отличающее их от клеточных форм жизни в своем жизненном цикле вирусы проходят стадию, на которой их наследственное вещество служит единственным материальным звеном, соединяющим два поколения. Поскольку полноценная фаговая частица воспроизводится при помощи одной фаговой ДНК, две основные функции ДНК, гетерока-талитическая и аутокаталитическая, проявляются в случае фагов болез четко, чем в случае бактерий введенная в клетку-хозяина, ДНК родительского фага, во-первых, контролирует, или индуцирует, образование нескольких сотен копий фагового белка, поставляя структурные компоненты головок и отростков для соматического вещества фагового потомства во-вторых, сама она должна реплицироваться и образовать несколько сотен копий, с тем чтобы все потомство фага получило генетический материал. Для изучения этих функций в 1950 г. были начаты следующие эксперименты. Бактерии, зараженные Т-четными фагами, подвергали искусственному лизису на разных стадиях латентного периода и исследовали наличие в лизате таких веществ, которые по своим свойствам могли быть отнесены к предшественникам, или строительным блокам, фагового потомства. [c.266]

В 1959 г. Д. Пратт сумел показать, что большинство, если не все бромурациловые ревертанты г+, образуемые мутантами гП (которые были индуцированы аналогами оснований), возникают в виде гетерозигот гП/г" , которые позднее расщепляются на гомозиготные ревертанты г" ". Чтобы продемонстрировать это, к бактериям, зараженным мутантным фагом Т4гП, непосредственно перед окончанием скрытого периода внутриклеточного развития фага добавляли бромурацил и первые инфекционные частицы, появившиеся в клетках непосредственно после окончания скрытого периода, высвобождали путем искусственного лизиса клеток. Такая методика постановки опыта гарантировала, что все ревертанты / +, возникшие и извлеченные из фонда предшественников фаговой ДНК во время короткого воздействия мутагена, образовались исключительно в самом последнем цикле репликации. Ошибка копирования, восстановившая у них в соответствующем участке ДНК генетическую информацию дикого типа г+, произошла настолько поздно, что больше и и одного цикла репликации произойти уже не могло (а это значит, что не могло произойти и расщепления на гомозиготные мутантные структуры). Такого рода опыты показали, что свыше 80% всех ревертантов г, возникших в результате кратковременного контакта с бромурацилом, действительно представляет собой мутационные гетерозиготы, несущие как исходный аллель г, так и ревертировавщий к дикому типу аллель г" . Следовательно, в полном соответствии с механизмом Уотсона и Крика и вопреки механизмам, предусматривающим консервативное распределе- [c.325]

Прозрачные колонии образованы PH К содсржащим бактериофагом R17, относящимся к семейству /2 этот фаг лизирует клетку-хозяи а после определенного латентного периода. Мутные колонии образованы ДНК-содержащим фагом М13 из семейства fl этот фаг ие лизирует бактериальную клетку. а постоянно выделяется из нее в среду по мере роста бактерии. Внутриклеточное размножение фага fl лишь снижает скорость роста зараженных бактерий. Следовательно, мутные зоны соответствуют области замедленного роста бактериального газона, а не лизису клеток. [c.467]

После адсорбции на Р-пилях клетки Е. соИ и внедрения в нее молекулы РНК начинается внутриклеточный рост родительской частицы фага f2. По истечении латентного периода продолжительностью примерно 50 мин происходит лизис первых зараженных клеток и освобождается от 1000 до 10 ООО инфекционных частиц потомства на клетку в зависимости от условий роста. Брюхимическое исследование процессов, происходящих в клетках Е. oli, зараженных фагом f2, показало, что в отличие от того, что наблюдается при заражении Т-четным фагом, в этом случае синтез ДНК, РНК и белка клетки-хозяина не подавляется почти до самого конца латентного периода. Эти данные в свою очередь привели к новому вопросу в какой степени продолжающиеся процессы синтеза в клетке-хозяине принимают участие в репродукции бактериофага f2 В частности, важно было выяснить, не осуществляется ли генетическая функция вирусной РНК путем обратной транскрипции ее генетической информации на внутриклеточную ДНК, которая затем обеспечивает синтез РНК и белка потомства фага согласно механизму гетерокаталитической функции ДНК. Эта возможность была, однако, вскоре опровергнута, так как было показано, что размножение фага f2 происходит более или менее нормально в бактериях, обработанных ингибиторами репликации ДНК и ее транскрипции в РНК. Таким образом, было продемонстрировано, что вирусная РНК представляет собой полностью автономный генетический материал, не" нуждающийся в участии ДНК-матрицы для осуществления своей двойной генетической функции. [c.470]

Таким образом, РП состоит из устойчивого к РНКазе ствола двуспиральной РНК и нескольких боковых хвостов одноцепочечных РНК, Эта структура, будучи намного тяжелее РФ, седиментирует гораздо быстрее ее, но после расщепления поддействием РНКазы одноцепочечных боковых хвостов РНК она превращается в форму, похожую на РФ. После завершения синтеза дочерней плюс -цепи и освобождения ее из состава РП она люжет быть использована либо в качестве матрицы для синтеза комплементарной минус -цепи с образованием повой РФ, либо для построения зрелой фаговой частицы потомства. В течение первых 15 мин после заражения в клетке реализуется первая из этих двух возможностей. За это время постепенно накапливаются РФ и РП, т. е. возрастает количество молекул, участвующих в синтезе молекул РНК фагового потомства. На поздних этапах латентного периода, когда внутриклеточное содержание субъединиц белка оболочки достигает достаточно высокого уровня, начинает осуществляться вторая из этих возможностей. Количество РФ и РП (и, следовательно, число минус -цепей) достигает к этому времени окончательного уровня, а число внутриклеточных частиц фагов-потомков постепенно нарастает, пока весь процесс репродукции не завершится лизисом клетки. [c.472]

В любой вирусной инфекции можно вычленить следующие периоды 1) скрытый, или латентный, период, в течение которого инфекционное начало либо совсем не обнаруживается в клетках хозяина, либо проявляется лишь в незначительной степени 2) период, когда содержание РНК и (или) ДНК увеличивается 3) период, когда возрастает содержание белка, причем постепенно начинают преобладать белки оболочки и, наконец, 4) период созревания вирусов. Однако существует и такой период, который у разных вирусов протекает по-разному. Это процесс выхода вируса из клетки. У одних вирусов выход из клетки происходит путем отпочковывания или выпячивания клеточной оболочки, у других — в результате лизиса и смерти клетки. Не исключено, однако, что вирусы в незрелой форме (а возможно, даже и голые нуклеиновые кислоты) тоже способны переходить в инфицированных тканях от клетки к клетке, используя для этого такие органеллы, как, например, плазмодесмы растений. Продолжительность перечисленных пяти фаз обычно зависит от конкретной системы вирус — хозяин. Однако в тех случаях, когда животная клетка инфицируется одной-единственной вирусной частицей, скрытый период может быть самым различным. [c.233]

Второй класс генов называют либо задержанно ранней, либо средней группой. Как вытекает из самого названия, выражение генов этой группы начинается в раннем периоде, обычно как только появляется регуляторный белок. В зависимости от природы контролирующей системы первоначальный ряд генов может либо продолжать свое выражение, либо выключаться на этой стадии (см. рис. 13.5). Часто выражение генов клетки-хозяина бывает ослаблено. Обе группы ранних генов совместно отвечают за все фаговые функции, кроме тех, которые необходимы для сборки белковой оболочки частицы и лизиса клетки. [c.207]

Ясно, что существенные для размножения фага Т4 события происходят в течение латентного периода (рис. 7.1, Л), предшествующего высвобождению потомства из инфицированных клеток. Количество фаговых частиц внутри клеток можно определить, искусственно лизируя инфицированные клетки в различные моменты латентного периода. Результаты такой процедуры представлены графически на рис. 7.1, Б. Обратите внимание на то, что в первые 10-11 мин после адсорбции родительских фагов на бактериальной клетке инфицирующих единиц в клетках не обнаруживается вовсе. Этот промежуток называется скрытым периодом. Даже родительские фаги в зараженных клетках утрачивают инфицирующую способность. По прошествии 11 мин в некоторых клетках начинают появляться фаговые частицы, способные заражать бактериальные клетки, и к 14-й мин в каждой клетке содержится в среднем по одной фаговой частице. Затем число таких фагов внутри клеток быстро растет в оставшееся до конца латентного периода время и достигает насыщения в период лизиса клеток. Этот эксперимент показывает, что фаги не просто делятся, как это делают бактерии механизм их размножения был раскрыт в эксперименте Херши—Чейза, описанном в гл. 4. [c.193]

Обычно для того, чтобы сделать грамположительные бактерии чувствительными к лизису под действием ДСН, клеточные стенки расщепляют лизоцимом, который добавляют к суспензии клеток в разведенном солевом буфере (1 5), как описано выше. Инкубационный период может составлять от иескольких минут до нескольких часов. Периодически отбирают пробы и проверяют клетки на лизис под действием ДСН. Перед добавлением ДСН к основной суспензии ионную силу буфера вновь увеличивают до исходного значения. Так же как в случае с грамотрицательными бактериями, лучше брать клетки в экспоненциальной фазе роста. Другие пути повышения способности грамположительных бактерий лизироваться под действием ДСН заключаются в добавлении пенициллина к активно растущим культурам или в выращивании культуры при высоких концентрациях глицина [60]. [c.114]

Заканчивая эту главу, отметим, что мы здесь подходили к проблеме противоопухолевой защиты только с точки зрения действия специфических иммунных сил. Из исследования моделей как будто бы следует, что против, спонтанных, слабоантигенных опухолей практически нет иммунной защиты. Однако сравнительно редкб наблюдаемое развитие неоплазмы указывает на то, что система надзора должна существовать. И действительно, в последние годы большие надежды в этом плане возлагаются на естественную резистентность , связанную с противоопухолевым действием так называемых натуральных киллеров (НК) [33]. Эти клетки, в отличие от специфически действующих Т-лимфоцитов, поражают раковые клетки всевозможной специфичности. Клетки НК пред-существуют в организме в больших количествах (I—2% всех лимфоцитов), поэтому лизис ими опухолевых клеток начинается сразу же, без латентного периода, тогда как для развития популяции Т-киллеров нужны дни и даже недели. К сожалению, возможность-этой системы защиты ограничена, она действует только против малых опухолей. При больших количествах опухолевых клеток начинается противоположная реакция — инактивация и даже лизис НК-клеток опухолевыми [34, 35]. Тем не менее, роль НК в организме значительна именно в смысле противоопухолевого надзора. Самое существенное при этом — способность НК узнавать опухолевые клетки независимо от их антигенности. По-видимому, в основе процесса узнавания клетки-мишени для НК лежит реакция на изменение свойств клеточной мембраны. В следующей главе мы как раз и будем обсуждать свойства мембран злокачественных клеток, отличающие их от нормальных. [c.138]

Опыт ОЦР дает данные о длительности отдельных периодов в развитии фага и о величине среднего урожаи — количестве фаговых частиц на одну иифицироващ-1ую клетку. Время внутриклеточного развития фага подразделяют на три периода эклипсный (скрытый), латентный, период лизиса (рис. 9.6). [c.185]

Скрытый период — это время от начала инфекции, определяемое про1П 1кновепием генома фага в бактерию, до появления в ней первой зрелой фаговой частицы. В точение этого времени осупгествляются все процессы внутриклеточного развития, необходимые для образования фага-потомства. Латентный период — время от начала инфекции до начала естественного лизиса бактерий с освобождением фага-потомства. Период лизиса — интервал времени от лизиса первой клетки до окончании лизиса боль- [c.185]

Длительность эклипсного и латентного периодов является обычно довольно устойчивым признаком того или иного фага. Следовательно, при условии стандартных опытов и соответствующих контролей, например сравнения с каким-то хорошо изученным фагом, активным в отношении данных бактерий, этот признак можно использовать в ходе предварительной идентификации фага на производстве. На длительности латентного периода обычно не сказывается эффективность функционирования морфогенетических генов. Другой признак, оцениваемый по результатам опыта ОЦР, — величина урожая не может быть использована в идентификации, кроме, разумеется, особых случаев, где он столь характерен, что полностью отличает данный фаг от других фагов. Время лизиса, как и величина урожая, не слишком надежный признак даже при первичной идентификации. На него могут влиять многие факторы внешней среды, возраст бактерий и т. д. [c.186]

II. Отторжение красителя. К прижизненным красителям, используемым для оценки целостности мембран, относят трипановый синий, эозин V, нафтоловый черный, нигрозин (зеленый), эритрозин В и зеленый прочный. Для оценки жизнеспособности более надежным способом является окрашивание клеточных суспензий, поскольку при окрашивании прикрепленных клеток они могут открепляться от субстрата и теряться. Главным недостатком этого метода является невозможность выявления клеток с нарушенной способностью к размножению. Так, было показано, что клетки, не способные к клонообразованию, характеризуются 100%-ной выживаемостью при тестировании на отторжение красителя [34]. Метод, однако, удалось обновить, и введенные в него технические усовершенствования позволили в какой-то степени разрешить присущие ему проблемы. В методе, предложенном Вейзенталем с сотрудниками [35], выбран 4-дневный период исследований, в течение которого клетки с нарушенной способностью к размножению теряют целостность мембран. Артефакты, связанные с размножением жизнеспособных клеток или лизисом погибших клеток, корректируются путем добавления в суспензию фиксированных утиных эритроцитов в качестве внутреннего стандарта. При сравнении трех методов анализа подсчет клеток, определение жизнеспособных клеток и определение отношения числа жизнеспособных клеток к числу эритроцитов — выявляется повышенная чувствительность последнего метода (рис. 8.5). Этот метод с равным успехом был применен к солидным опухолям, клеткам выпотов и злокачественным клеткам крови. [c.270]

В условиях нормальной родовой деятельности ГМК сильно укорачиваются и увеличивается их поперечник. Поверхность лейомиоцитов становится неровной, ядра складчатыми, а миофиламенты приобретают упорядоченное расположение. Отмечаются истончение, разрывы и лизис соединительнотканных чехликов , окружающих ГМК, что создает возможность для перемещения лейомиоцитов в миометрии. При сокращении матки происходи деполимеризация сократительных белков (актина и миозина), снижение содержания гликогена и накопление липидов усиливается активность ряда ферментов АТРазы, диафораз, кислой фосфатазы и ферментов пентозного цикла. Содержание серотонина, усиливающего сокращение ГМК при нормальной родовой деятельности в первом периоде родов, становится в 2 раза больше, чем при беременности 37—38 нед. [c.128]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология