Взаимодействие ТР с комплексом (антиген МНС)

Рис. 2. Разделение на колонке с сефадексом Г-200 смеси яичного альбумина (3), иммунного гамма-глобулина (2), являющегося в данном случае антителом к альбумину, и продукта их взаимодействия— комплекса антиген — антитело ) (по Тархановой, 1966).

При анализе содержания в образце антител определенной специфичности можно использовать так называемый белок А из стафилококка, который обладает специфическим сродством к константной части антител в комплексе с их антигенами или гаптенами. Образование комплекса антиген — антитело регистрируется после удаления избытка антитела по взаимодействию конъюгата белка А с детектируемой меткой, например пероксидазой. [c.258]

Тимус-зависимые антигены требуют присутствия Т-хелперов. В результате взаимодействия В-клетки с антигеном образуется комплекс антиген—рецептор. Далее происходит интернализация этого комплекса в цитоплазму клетки, где антиген гидролизуется на отдельные фрагменты. Эти фрагменты взаимодействуют с белками МНС класса II, которые синтезирует В-клетка (рис. 30.6). Фрагмент антигена соединяется с МНС-П и перемещается на клеточную мембрану, где он узнается хелперными клетками, предварительно контактирующими с данным антигеном. Клетки синтезируют и переводят на цитоплазматическую мембрану рецептор, комплементарный структуре комплекса МНС-антиген. Происходит взаимодействие В- и Т-хелперной клеток, причем последняя начинает продуцировать интерлейкин-2, белковый фактор, стимулирующий размножение В-клеток. В результате образуются зрелые клоны плазматических клеток, способных синтезировать и секретировать антитела к данному антигену (рис. 30.7). [c.483]

Комплемент представляет собой сложный комплекс белков, состоящий из 20 взаимодействующих компонентов, обозначаемых С1, С2, СЗ и т. д. до С9, фактор В, фактор О и ряд регуляторных белков. Все они являются водорастворимыми белками с молекулярными массами от 24 000 до 400 000 (табл. 9), циркулирующими в крови и внеклеточной жидкости. Большинство этих белков являются неактивными вплоть до запуска системы в момент образования комплекса антиген — антитело. После активации комплемента его действие носит каскадный характер и представляет собой серию протеолитических реакций. Образно говоря, отношения между антителами и комплементом напоминают собой отношения между ключом зажигания и мотором взаимодействие антитела с антигеном включает мотор. [c.220]

Высокая специфичность антител по отношению к антигену делает их гибким и действенным инструментом, который можно использовать для выявления, количественного определения и локализации множества разнообразных веществ, представляющих интерес для биолога. Но как можно обнаружить или измерить взаимодействие антитела с антигеном Начальная реакция связывания антигена с антителом-так называемая первичная реакция-может быть измерена многими различными способами. При радиоиммунном анализе, позволяющем определять даже ничтожные количества материала, известное количество радиоактивного антигена вместе со стандартным количеством антител добавляют к образцу, содержащему неизвестное количество того же антигена в нерадиоактивной форме. Немеченый антиген конкурирует с меченым за связывающие участки антител, и чем больше данного антигена в образце, тем меньше радиоактивного антигена будет связано с антителом. Свободный радиоактивный антиген можно отделить от связанного, а затем измерить количество того и другого с помощью ряда методов, использующих различия в свойствах свободных и связанных молекул один нз общих подходов состоит в осаждении (преципитации) комплексов антиген-антитело антителами к иммуноглобулинам (рнс. 17-28). [c.27]

Взаимодействие с комплексом антиген антитело на lq [c.263]

Реакцию взаимодействия антиген — антитело можно рассматривать как частный случай связывания лигандов с макромолеку-лярными рецепторами. В основе- первичного взаимодействия лежат общие принципы любой бимолекулярной реакции. Однако, так как в данном случае продуктом бимолекулярной реакции является комплекс антиген— антитело, иммунная реакция является обратимой и описывается теми же кинетическими и термодинамическими параметрами, что и любой процесс комплексообразования. В данной главе будут рассмотрены теоретические вопросы связывания антигенов с антителами и некоторые экспериментальные подходы, позволяющие следить за ходом взаимодействия и рассчитывать его количественные характеристики. [c.33]

Время проведения. Длительность ИФА при наличии готовых реагентов и методики складывается из времени, затрачиваемого на реакцию антиген — антитело, промывку и дозировку компонентов, а также времени проведения и регистрации ферментативной реакции. При осуществлении твердофазного ИФА лимитирующей по времени стадией является доведение реакции антиген — антитело до равновесного состояния. Так как взаимодействие антитела с антигеном формально представляет обратимую реакцию второго порядка, то время приближения к равновесию возрастает с уменьшением концентрации определяемого антигена. Фактором, определяющим время достижения равновесия, является константа скорости образования комплекса антиген—антитело. [c.226]

Проанализируем некоторые закономерности конкурентного анализа, исходя из следующих допущений 1) образование комплекса антиген — антитело происходит в соотношении 1 1 2) все молекулы антител обладают одинаковым сродством к антигену 3) меченный ферментом и определяемый антиген взаимодействуют с антителами с разными константами связывания 4) измерение ферментативной активности проводится после установления в системе равновесия. [c.226]

Вторая иммунохимическая стадия анализа включает взаимодействие меченых антивидовых антител со специфическим комплексом антиген — антитело, сформированном на носителе. Основные требования к этой реакции аналогичны рассмотренной ранее второй стадии сэндвич -метода анализа. Очевидно, что оптимальными являются условия, обеспечивающие линейную пропорциональность между концентрациями специфических антител в комплексе (которая изменяется от нуля до значения концентрации иммобилизованного антигена) и связавшихся с ними меченых антивидовых антител при минимальном фоновом сигнале. [c.254]

Реакция нейтрализации (PH). Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микроорганизмов или их токсинов на чувствительные клетки ткани. Это связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией. При постановке реакции смесь антиген — антитело, полученную in vitro, вводят животным или вносят в культуру клеток. При отсутствии повреждающего действия микроорганизмов или их антигенов и токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, специфичности взаимодействия комплекса антиген — антитело. [c.179]

Ввиду поливалентности белковых антигенов, бивалентности антител и присутствия в иммунной сыворотке популяции антител, специфичных к разным антигенным детерминантам, реакция взаимодействия между антигеном и антителом создает комплекс, образование решетки которого зависит от соотношения количеств антигена и антител. На рисунке 4.2 Л показаны три экстремальные ситуации. Эта характерная особенность реакции антигена и антитела очень важна для принципов нескольких иммунохимических методов. [c.95]

Т-лимфоциты защищают организм от клеточных инфекций, в частности от внутриклеточных паразитов (микробных клеток, живущих внутри кле-ток-хозяев). Т-лимфоциты могут узнавать инфицированную клетку, если соответствующий антиген расположен на ее поверхности. Контакт с антигеном является ключевым моментом активации Т-клеток и их клонального отбора. Взаимодействие с антигеном возможно только в комплексе с поверхностными маркерами, которыми являются группы белков гистосовместимости МНС (от англ. Major histo ompatibility omplex). Идентифицированы гены, кодирующие три класса белков МНС, при этом во взаимодействии с антигеном принимают участие белки только классов 1 и 2. [c.477]

Возвращаясь к полиэлектролитам, необходимо отметить, что введение животным только полиэлектролитов (без антигена) приводит к поликлональной активации лимфоцитов [92], что, вероятно, обусловлено неспецифическим взаимодействием макромолекул с самыми разными клетками. Однако совместное введение полиэлектролита и антигена приводит к усилению антигенспецифичес-кого иммунного ответа. Причина этого явления состоит в том, что неспецифический полимерный адъювант в ходе случайных перестроек в конечном счете может способствовать самосборке высокоспецифичных комплексов антиген-полиэлектролит-лимфоцит. В этом случае антиген должен фокусировать действие полиэлектролита на соответствующем клоне лимфоцитов, а полиэлектролит, взаимодействуя с клеточной мембраной, обеспечить стимуляцию лимфоцита. [c.183]

B для аффинной хроматографии антител типа IgG и антигенов. Белок А (мол. масса 42 ООО, выделен из Staphylo o us aureus) иммобилизован на поперечносшитом агарозном геле (см. разд. 30) бромциановым методом. Белок специфически взаимодействует с молекулами иммуноглобулинов IgG некоторых подтипов. Так как взаимодействие белка А с IgG не затрагивает у последних той части молекулы, посредством которой связываются антитела, возникает возможность выделения и очистки антигенов на БСС с адсорбированным IgG соответствующего типа. Элюирование комплекса антиген антитело выполняют с помощью 3 М раствора изотиоцианата калия. [c.227]

Ограниченные запасы витаминов и гормонов в- животных привели к развитию механизмов адсорбции, транспорта и консервации этих веществ в следовых количествах. В таких процессах важную роль играют специфические транспортные или связывающие белки, предотвращающие быстрое выведение витаминов и гормонов с мочой, которое происходило бы, если витамины и гормоны не были бы связаны в плазме в соответствующих комплексах. Связывающие белки присутствуют в очень низких концентрациях. Например, белки, прочно связывающие витамин В12, траноко баламины I и И, находятся в плазме крови человека в концентрациях соответственно 80 и 20 мг на 1000 л. Однако они обычно имеют высокое сродство к комплементарным витаминам и гормонам. Константы диссоциации этих комплексов находятся в интервале от 10 до 10 моль/л [35]. Из-за низких концентраций эти белки нельзя выделить классическими методами очистки наличие специфических взаимодействий с высоким сродством позволяет использовать аффинную хроматографию, которая допускает работу с большими объемами исходного материала. Как и для взаимодействий антитело — антиген, трудности заключаются в последующем выделении белка из комплекса с аффинными сорбентами. [c.124]

Рис. 17-29. Схема метода Ухтер-лони, с помощью которого выявляют взаимодействие антигена с антителом. Антитела и антигены помещают в отдельные лунки в агаровом геле, и их молекулы диффундируют навстречу друг другу. Когда антиген н комплементарные ему антитела встречаются в оптимальных соотношениях, крупные комплексы антиген-антитело прецнпитируют (выпадают в осадок) и могут быть обнаружены по рассеянию света.

Однако многие методы анализа основаны на торичнмх реакциях, т. е. ка-, ких-то последствиях первичного взаимодействия антитела с антигеном К этим вторичным реакциям относятся преципитация, агглютинация клеток и связывание комплемента. Последнюю реакцию можно использовать пото му, что компоненты системы комплемента связываются только с антителоц находящимся в комплексе с антигеном при этом исчезновение компоненто комплемента может служить мерой количества образующегося комплекса антиген-антитело. Однако чаще всего применяют реакцию преципитации антигена с антителом в жидкостях или гелях. Например, в методе Ухтермни антиген и антитело помещают в отдельные лункн, вырезанные в агаровом геле, Реагенты диффундируют из лунок до тех пор, пока не встречаются друг с другом в оптимальных соотношениях для образования преципитата, который становится видимым как непрозрачная полоса, рассеивающая свет (рис. 17-29). [c.28]

Наиболее важным и изученным свойством комплемента является участие его в реакции гемолиза эритроцитов (антигена) соответствующей гемолитической сывороткой (антителом). Эритроциты, обработанные такой сывороткой, гемолизируются только при наличии свободного комплемента. Другим важным свойством комплемента является то, что он способен фиксироваться (связываться) в процессе многих реакций антиген—-антитело. Таким образом, гемолизирующие свойства сыворотки можно подавить большинством антител, взаимодействующих с антигенами, или ранее образованным осадком антитела с антигеном. Фиксация комплел1ента связана с включением белка в комплекс антиген—антитело, и, вероятно, этот белок и является тем субстратом, который обладает комплементарными свойствами. [c.688]

Образующиеся аяттпела вступают во взаимодействие с антигеном с образованием комплекса АГ — АТ, который запускает в действие неспмщфические механизмы защитной реакции. Эти комплексы активируют систему комплемента. Взаимодействие комплекса АГ — АТ с тучными клетками приводит к дегрануляции и выделению медиаторов воспаления — гистамина и серотонина. [c.52]

Если иммуноглобулины распознают антигенную детерминанту непосредственно, без участия каких-либо дополнительных структур, то Т-клеточный антигенраспознающий рецептор (ТКР) взаимодействует с комплексом антигенный пептвд молекулы I или П классов МНС того организма, в котором развивается иммунный ответ. Этот своео азный механизм распознавания измененного своего , т.е. распознавания собственных молекул МНС, ком-плексированных с чужеродным пептидом, был открыт в самом конце 70-х годов и наиболее активно разрабатывался в 80-е годы (гл.3). [c.26]

Величина эпитопа, с которым взаимодействует антитело или иммуноглобулиновый рецептор В-клеток, как правило, должна соответствовать размеру антигенраспознающего участка. Методами рентгенострукгурного анализа комплексов антиген антитело (лизоцим куриных яиц и нейраминццаза гриппа) выявлено, что в контактную область включены 15-22 поверхностных аминокислот белю)вого антигена. Однако не совсем ясно, все ли эти аминокислоты определяют эпитоп, взаимодействующий с антигенсвязыва-ющим участком антител, или часть из них находится в пограничной с эпитопом области. Обычное число аминокислот или сахаров, составляющих эпитоп, равно 6-8 мономерам. [c.42]

Мембранные и секреторные активаторы В-клеток. Зрелые хелперные D4 Т-клетки, распознавшие комплекс антигенного пептида с молекулами II класса МНС, активируют В-клетки к пролиферации и дифференцировке в зрелые антителопродуценты — плазмоциты. Хелперные Т-клетки после взаимодействия с В-лим-фоцитами начинают экспрессировать мембраносвязанные и секреторные формы молекулярных активаторов (рис. 9.19). Наиболее важными эффекторными молекулами хелперных Т-клеток на ранней стадии активации В-клеток является лигацц D40, относя-246 [c.246]

Результат многолетней работы по выяснению механизмов генетического контроля силы иммунного ответа привели к достаточно конкретному заключению сила иммунного ответа зависит от работы одного, аутосомного, доминантного гена фенотипическим продуктом такого гена являются молекулы II класса МНС, клеточным типом, экспрессирующим этот ген, — антигенпрезентирующие клетки. В тех случаях, когда конформационные особенности антигенраспознающего участка молекуп II класса соответствуют структуре антигена (точнее антигенным эпитопам), образуется иммуногенный комплекс, экспрессирующийся на поверхности антигенпрезентирующих клеток, что и обеспечивает развитие иммунного ответа. Напротив, неспособность молекул II класса особей определенного генотипа взаимодействовать с антигенными пептидами будет причиной иммунной ареактивности. [c.291]

В качестве примера можно взять реакцию на пыльцу растений (сенную лихорадку). Первая встреча с аллергеном не приводит к проявлению каких-либо признаков повышенной чувствительности. Однако проникшая через дыхательные пути пыльца сенсибилизирует организм через активацию как В-, так и Т-клеток. Продукция антител класса IgE начинается после распознавания аллергена В-клетками и их взаимодействия с хелперными Т-клетками (Тн2), секретирующими интерлейкин-4. Как уже отмечалось ранее, этот цитокин обеспечивает переключение внутриклеточного синтеза иммуноглобулинов В-клетками на продукцию IgE. Образовавшийся IgE взаимодействует с соответствующим рецептором (F R) на поверхности тучных клеток. На этой стадии завершается сенсибилизация организма после первичной встречи с аллергеном. Когда пыльца растения того же вида вновь попадает в дыхательные пути, белки такой пыльцы проникают через эпителий в подслойку, где они взаимодействуют с предсуществующим на поверхности тучных клеток IgE. Факт образования комплекса антиген-антитело на мембране тучных клеток является сигналом к активному выбросу медиаторов этими клетками, что вызывает быстрое развитие симптома, получившего название аллергический ринит, или сенная лихорадка. [c.357]

Антитела, образуемые в ответ на введение в организм антигенов, специфически взаимодействуют с этими антигенами. Образование специфического комплекса антиген — антитело обеспечивается гидрофобными, ионными и ва 1-дер-ваальсовыми взаимодействиями, а также водородными связями. Наиболее существенную роль играют силы гидрофобного взаимодействия. Неполярное (гидрофобное) связывание возникает в результате стремления гидрофобных групп в водном растворе к ассоциации друг с другом, что сопро- [c.33]

Процесс образования комплекса антиген — антитело состава 1 1, в котором реализуются поливалентные взаимодействия, также является обратимым и может быть охарактеризован константой комплексообразования. С энергетической точки зрения образование поливалентного комплекса намного выгоднее, чем моновалентного. Например, было показано, что 1дО-антитела с внутренней аффинностью к 2,4-динитрофенольному (ДНФ) гаптену 10 л/моль имеют функциональную аффинность по отношению к комплексу ДНФ — фаг 4-174—л/моль, т. е. бивалентные взаимодействия являются в 1000 раз более прочными, чем моновалентные. [c.38]

Концентрацию конъюгата определяли с помощью люциферазы бактерий. Однако использование этого метода для установления Эз-16а-Г в моче встретило ряд ограничений, связанных, прежде всего, с влиянием других компЪнентов мочи на биолюминесцентную систему. Включение в схему анализа стадии взаимодействия с иммобилизованными антителами с последующей отмывкой комплекса антиген — антитело от несвязавшихся компонентов образца и введение агентов, расщепляющих комплекс антиген — антитело для перевода восстановленного кофактора в раствор, существенно улучшили чувствительность метода. [c.128]

Рис. 27. Взаимодействие меченных ПХ антител с комплексом антиген-поликлональные антитела, предварительно адсорбированные в различных концентрациях Ат на полистирольных планшетах для ИФА на носителе и в конъюгате против HBs — антигена (/) и инсулина (2), 0,01 М фосфатный буфер, содержащий 0,1 М Na l и 0,1% тритона Х-100, pH 7,4

Однако в большинстве случаев интересуются не общим количеством связанных антител, а антителами, сохранившими способность к взаимодействию с антигеном после иммобилизации. Часть молекул антител Может утратить эту способность в результате присоединения к носителю антиген-связывающими центрами, стерического экранирования или других причин. Абсолютное число активных антител можно определить методом титрования активных центров антител антигеном. Существующие подходы позволяют проводить исследование с использованием как высоких, так и низких концентраций антигена и иммуносорбента. В первом случае иммуносорбент инкубируют с избытком антигена, затем диссоциируют специфический комплекс при pH 2—2,2 или раствором с высокой концентрацией солей (2—5 М) и определяют количество выделившегося антигена. Этот подход требует больших количеств сорбента и допускает возможность значительных ошибок вследствие смывания антител с носителя при эк пepимeнтaJJь-ных значениях pH или ионной силы. [c.218]

Реализация иммуноглобулинами, продуктами их про-теолпза илн комплексами антиген-антитело биологических функций выражается в том пли ином эффекте, феномене, реакции. Вот почему биологические функции иммуноглобулинов, складывающиеся часто из нескольких более простых реакций, целесообразно обозначать как эффекторные, подразумевая под ними наиболее простые реакции. Что касается взаимодействия антител с антигеном (гаптеном), то если исключить биологические последствия этого взаимодействия, эту функцию иммуноглобулинов южно назвать афферентной. [c.123]

Связывание IgE тучными клетками — основное условие возникновения каскада биологических реакций, обозначаемых термином — реакции гиперчувствительно-сти немедленного типа. Эти реакции возникают после взаимодействия поливалентного антигена аллергена) с фиксированными на клетках IgE-антителами. В этом разделе мы рассмотрим лишь проблему связывания ци-готропинов клетками. Процесс высвобождения субстанций анафилаксии под влиянием комплекса антиген-цито-тропины мы обсудим ниже. [c.126]

Биологические реакции, возникающие в результате взаимодействия антител с антигеном как в биологических жидкостях, так и на поверхности клеток, лежат в основе многих явлений, которые наблюдаются при инфекционных и аллергических заболеваниях, осложнениях, возникающих при вакцинации, а также при аутоиммунном процессе. Их возникновение обусловлено реализацией антигенсвязывающих и эффекторных функций иммуноглобулинов. Рассмотрим основные эффекторные функции, характерные для комплекса антиген-антитело. [c.140]

Большая скорость десорбции антител (иммунных комплексов), установленная в опытах in vitro, возможно, связана с их расщеплением протеиназами, находящимися в лимфоидных клетках. Этому благоприятствуют условия культивирования клеток, а именно, низкая концентрация сыворотки в среде, поскольку при этом низка концентрация содержащихся в сыворотке ингибиторов протеиназ. Действительно, инкубация при 37° С клеток селезенки иммунизированных мышей в цельной изологичной плазме крови резко замедляет процесс десорбции с поверхности клеток антител (иммунных комплексов). Значит, в организме антитела или их комплексы с антигеном могут продолжительное время оставаться сорбированными на поверхности лимфоцитов. Такие клетки способны взаимодействовать с антигеном, не будучи прекоммити-рованными к синтезу антител и рецепторов к этому антигену. [c.150]

Взаимодействуя с комплексом антиген-антитело, компоненты системы комплемента способны изменять физикохимические свойства этого комплекса и, таким образом, влиять на его судьбу в организме. Способность к )мпле-мента увеличивать степень дисперсности (уменьшать степень агрегации) иммунных комплексов была впервые продемонстрирована Г. Миллером и В. Нюссеицвейгом [c.182]

II. Низкие значения pH. Такая элюция широко применяется при очистке антител [3—5, 23] используют 0,1 М H l-глицино-вый буфер, pH 2,2, 0,1 М цитратный буфер, pH 2,2, 0,5 М раствор пропионовой кислоты, pH 3. Пропионовая кислота обладает тем преимуществом, что, вызывая диссоциацию комплекса антиген— антитело благодаря снижению pH, она, кроме того, ослабляет гидрофобные взаимодействия. При низком pH можно использовать неионные детергенты, но не соли желчных кислот. [c.178]

В обоих приведенных случаях поверхностные свойства, определяемые величиной иеспецифических вандерваальсовых взаимодействий, в которых участвуют клеточные п оверхностн и комплексы антиген — антитело, в достаточной степени позволяют объяснить происходящие физические процессы. Одна из задач дальнейшего исследования поверхностных явлений в иммунологических реакциях —это проведение границы между яв- [c.124]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология