Гомогенизация мембран

Рис. 22. Обрывки эластических волокон во всех слоях кожи и гомогенизация внутренней эластической мембраны артериального сосуда глубоких слоев кожи после многократной аппликации фосфамида в дозе 50 мг/кг.

Микросомы (термин, часто встречающийся в биохимической литературе) — это мелкие частицы диаметром 50—150 нм, которые представляют собой фрагменты в основном ЭР и частично плазматической мембраны. Микросомы образуются в процессе растирания или гомогенизации клеток. При центрифугировании разрушенных клеток сначала оседают ядра и другие крупные фрагменты, затем — митохондрии. При очень высоких скоростях (например, при 100 000 ) оседают микросомы (их масса составляет 10 —10 дальтон). На электронных микрофотографиях видно, что в микросомах фрагменты мембран замыкаются с образованием небольших мешочков, на наружной поверхности которых сохраняются рибосомы [c.33]

Изучение клеточной организации и попытки установить связь между структурой и функцией на различных иерархических уровнях — от простых молекул до макромолекул и таких агрегатов, как мембраны или частицы, до субклеточных единиц и, наконец, клеток — все это составляет одну из самых увлекательных и перспективных областей исследования в современной биологии. Для биохимика и цитолога выяснение химического значения различных сложных структурных элементов, обнаруженных в клетке, важно не только само по себе оно является необходимой ступенью любого исследования, направленного на то, чтобы понять, как происходит синтез, распад и взаимодействие этих элементов. Мы начинаем догадываться, что именно в этих сложных структурах скрыт секрет механизмов, с помощью которых осуществляется регуляция клеточных процессов как в пространстве, так и во времени. Этот секрет, возможно, заключается, по крайней мере отчасти, в том, что различные клеточные компоненты — главным образом ферменты, а также их субстраты и модификаторы (активаторы и ингибиторы) — находятся в разных отсеках клетки и потому не всегда доступны друг для друга. Из сказанного вытекает два вывода, подтвержденных в последнее время многочисленными экспериментальными данными 1) в клетке существует четкое распределение некоторых ключевых компонентов, особенно ферментов они локализуются в (или на) определенных клеточных структурах, представляющих собой микроскопические внутриклеточные органы, так называемых органеллах 2) эти структуры, а вместе с ними и соответствующие клеточные компоненты можно выделить с помощью подходящих мягких методов разрушения клеток (гомогенизация) и последующего фракционирования. [c.239]

После такой обработки поверхность матрицы покрывают поликристаллической смесью с льфидов серебра и меди. Эта смесь, нанесенная на серебряную подложку матрицы, выполняет роль мембраны, специфичной к ионам меди. С целью гомогенизации смеси сульфидов матрицы электроды нагревают до 400—420° С в атмосфере сероводорода. [c.451]

Приведем два примера. В клетках, фиксированных химически, мембраны эндоплазматической сети кажутся темными на светлом фоне. При лиофильной сушке получается совершенно обратная картина. Вероятно, при действии химических реактивов определенные компоненты плазмы, образующей фон, теряются. Второй пример. На лиофилизированных срезах вообще не видно никаких гранул. Из этого, однако, не следует делать вывод, что рибосомы, видимые на нормально фиксированных срезах,— артефакт. Рибосомы можно выделить и из лиофилизированного материала после гомогенизации и центрифугирования, и они оказываются вполне работоспособными следовательно, они там все же имеются, просто они не видны в электронный микроскоп. В остальном результаты, полученные различными методами фиксации, очень хорошо совпадают. И тем не менее ни в коем случае нельзя забывать, что электронный микроскоп дает только эквивалентные картины [c.216]

В. Для того чтобы при помощи этого основного экспериментального подхода определить, какие из белков эритроцитов пронизывают мембрану, необходимо приготовить вывернутые наизнанку пузырьки. Это можно сделать путем гомогенизации теней эритроцитов. В среде определенного ионного состава образовавшиеся мембранные фрагменты замыкаются. Если вывернутые пузырьки обработать проназой, то подвижность белков полосы 3 и гликофорина меняется. Эти результаты вместе с другими, приведенными выше, указывают на то, что белок полосы 3 и гликофорин выступают на поверхность мембраны эритроцитов с обеих ее сторон, внутренней и наружной, следовательно, они должны быть трансмембранными белками. [c.317]

Рибосомы вьщеляют путем дифференциального центрифугирования клеточного содержимого, получаемого после гомогенизации клеток. Известно, что этим путем удается разделить клеточное содержимое на ряд фракций (см. гл. I). Рибосомы связаны главным образом с мембранами эндоплазматической сети. Поэтому при фракционировании содержимого клетки они осаждаются вместе с обломками липопротеиновой мембраны—микросомами. [c.285]

Чтобы изучать функции и биохимию эндоплазматического ретикулума, необходимо сначала отделить его мембраны от других компонентов клетки. На первый взгляд эта задача кажется невыполнимой, поскольку ЭР как бы прослаивает все другие компоненты цитоплазмы (см. рис. 8-35). К счастью, когда ткани или клетки разрушают гомогенизацией, ЭР распадается на множество мелких ( 100 нм в диаметре) замкнутых пузырьков, называемых микросомами, которые относительно легко очистить. [c.41]

Многие исследования биохимии синаптической передачи выполнены с препаратами синапсов, которые получают из ткани головного или спинного мозга. При гомогенизации ткани нервные окончания отрываются, мембрана в месте разрыва смыкается и получаются замкнутые пузырьки — синаптосомы их отделяют от других компонентов гомогената методом дифференциального центрифугирования. Синаптосомы секретируют медиатор при воздействиях, изменяющих их трансмембранный потенциал в сторону положительного знака. [c.538]

Технология получения гетерогенных М. и. (имеют наиб, практич. значение) включает след, стадии кондиционирование, сушка и измельчение ионообменных полимеров (ионитов см. Ионообменные смолы. Анионообменные смолы, Катионообменные смолы) до тонины помола не более 50 мкм смешение порошков ионита и пленкообразующего полимера гомогенизация смеси при 150-180°С на вальцах или в экструдере формование заготовок мембран (листов) при 150-180 С на вальцах или каландре уплотнение и армирование мембраны на прессе при т-рах на 15-25 °С выше т-ры размягчения связующего. По др. методу получения осуществляют измельчение ионообменного полимера смешение полученного порошка с р-ром или расплавом связ5тоще-го нанесение полученной дисперсии на упрочняющую ткань, сушку и уплотнение мембраны. [c.31]

Способность к образованию замкнутых структур присуща, по-види-Мому, фрагментам любых мембран. Так, при гомогенизации нервных клеток из их синаптических окончаний образуются замкнутые структуры— синаптосомы. Правда, последние формируются из фрагментов плазматической мембраны, а не ЭР и часто содержат митохондрии. [c.33]

Мембрану наносят следующим образом. Ацетат целлюлозы растворяют в смеси, состоящей из 7 ч. хлористого этилена, 2 ч. метилэтилкетона и 1 ч. этанола (5% к весу растворителя). Смесь для гомогенизации оставляют на несколько часов. Осмотическую ячейку соединяют с капиллярной муфтой и опускают в приготовленный раствор ацетата целлюлозы на /а ниже поверхности жидкости. После этого ячейку с муфтой медленно вынимают из раствора и перевертывают. чтобы дать возможность раствору неравномерно стечь по ней. После того, как растворитель испарится, операцию повторяют снова, до получения нужной тол-Рис 121 Трубча- Щины мембраны. Для того чтобы через мембрану не -тый стеклянный проходили макромолекулы полимера с мол. весом осмометр Мока 15 000—20 ООО, достаточно описанную выше операцию 96] повторить два раза, [c.176]

Как видно из этих данных, мембраны анкалит А-7 обладают лучшими электрохимическими и механиче кими свойствами, чем мембраны МА-40. Это объясняется, с одной стороны, более высокой степенью гомогенизации массы и, с другой — использованием полиэтилена высокого давления. Для получения мембран МА-40 применяется гранулированный (но не раствор) полиэтилен низкого давления. [c.47]

Использование ультраструктурных срезов и специальных методов фиксации позволило установить, что эндоплазматическая сеть представляет собой полости, окруженные мембранами. Компоненты эндоплазматической сети заключены в элементарную пленку, которая во много раз тоньше плазмалеммы и зрелых мембран аппарата Гольджи. При гомогенизации клетки они, округляясь, превращаются в мельчайшие шарики, так называемые микросомы. Анализ этих образований показал, что их мембраны на 2/з состоят из белка и на 7з из липидов (Фрей-Висслинг, 1976). [c.34]

Результаты фракционирования зависят от способа разрушения, состава среды и типа клеток, так как эти факторы определяют характер разрыва мембран и, следовательно, размеры образующихся фрагментов. Так, при непродолжительной гомогенизации из плазматических мембран получаются довольно крупные фрагменты, осаждающиеся вместе с ядерной фракцией. В этом случае мик-росомальная фракция содержит небольшое количество везикул, образованных из клеточной мембраны. Если при гомогенизации получаются мелкие пузырьки, то отделить фрагменты наружной [c.65]

Мембраны саркоплазматического ретикулума — удобная модель для изучения механизма преобразования энергии при ак-тивнем транспорте ионов. Для исследования биохимических и структурных свойств саркоплазматического ретикулума используют преимущественно микросомальную фракцию, выделяемую из скелетных мышц кролика в результате гомогенизации ткани и последующего дифференциального центрифугирования. Под электронным микроскопом она выглядит как довольно гомогенная смесь замкнутых пузырьков диаметром от 50 до 200 нм. В мембранах такого препарата локализован высокомолекулярный белковый компонент — Са-АТФаза, на долю которого приходится от 70 до 90% всего белка. Благодаря исключительной простоте данной системы ионного транспорта она в настоящее время детально охарактеризована. [c.52]

Хлоропласты получают с помощью мягкой гомогенизации листьев в изотоническом растворе сахарозы или сорбитола при pH 8,0. Благодаря такому pH компенсируется закисление среды при разрушении вакуолей. После фильтрования через муслин гомогенат центрифугируют при небольших скоростях для отделения обломков клеток. Хлоропласты обычно осаждают центрифугированием при 1000—2000 g в течение 4 мин. Эта процедура позволяет получать хлоропласты с интактными внутренней и наружной мембранами (интактные хлоропласты). Такие хлоропласты способны с высокой скоростью фиксировать СОг, так как в них сохраняется содержимое стромы, однако они редко используются в биоэнергетических исследованиях, поскольку многие субстраты и ингибиторы не проникают через мембрану хлоропласта и не могут достичь мембраны тилакоидов. Исследования функций тилакоидов можно проводить на хлоропластах, полученных в 0,35 М Na l, Б них разрушены наружная и внутренняя мембраны, и они неспособны фиксировать СОг, но здесь тилакои-ды доступны для субстратов и ингибиторов (разрушенные хлоропласты). [c.16]

Плазматические мембраны выделяли из печени крыс. Гомогенизацию проводили в гомогенизаторе с тефлоновым пестиком, все гомогенаты фильтровали через четыре слоя ткани, центрифугировали при 61 ООО g в teчeниe 2 ч в растворе сахарозы с градиентом плотности 1,22, 1,18, 1,16. конечных промывания очищенных мембран производили водой. Наиболее чистыми оказались плазматические мембраны клеток печени, выделенные по методу Невиля наибольший выход мембран был получен при выделении по Рею. [c.327]

Есть мнение, что лизосомы нейронов формируются в области аппарата Гольджи, связанного с гладким ЭР. Наиболее широко используемым маркерным ферментом для идентификации ЭР служит глюкозо-6-фосфатаза (табл. 1). Часто в биохимической литературе встречается термин микросомы. Это мелкие частицы пузырькоподобной формы (30—180 нм), представляющие собой в основном фрагменты мембран ЭР, а также частично плазматической мембраны, аппарата Гольджи, лизосом, митохондриальных мембран. Образование везикулярных структур в результате гомогенизации присуще, по-видимому, всем мембранам. А большой разброс в величинах диаметров этих пузырьков затрудняет получение высокоочищенных препаратов в пер- [c.15]

В комплексе Гольджи имеется своего рода градиент , идущий от одного его конца к другому, вдоль которого наблюдаются изменения как в строении мембран, так и в синтезе и сборке различных веществ. При выделении комплекса Гольджи существуют определенные методические трудности. При гомогенизации гладкие липопротеидные мембраны Гольджи разрушаются и попадают в микросом-ную фракцию. [c.16]

Утолщение и гомогенизация базальной мембраны капилляра кожи. ЭГ. Х25 ООО. Обозначения те же, что и на рис. 57. Вверху справа — фиксация р-липопротеидов в стенке сосуда и по периферии его. Иммуно-люминесценция. Х200. [c.199]

Нпогпе типы клеток пмеют систему ограниченных мембраной каналов — эндоплазматическую сеть, которая может простираться от ядерной мембраны по всей цитоплазме. Мембраны, которые состоят в основном из липопротеидов, отделяют внутренний отсек (цистерну) от внешнего отсека (цитозоля). Конфигурация эндо-плазматической сети очень неустойчива, в основном она трубчатая или везикулярная. Различают два связанных между собой типа эпдоплазматической сети в зависимости от количества прикрепленных к ее мембранам частиц рибопуклеопротеида — рибосом (гл. 20). На поверхности гладкой эндоплазматической сети нет рибосом, поверхность шероховатой эндоплазматической сети усеяна ими. Эндоплазматическая сеть функционирует в ряде важных процессов, например в синтезе стероидов (гл. 18), образовании пероксисом. Эндоплазматическая сеть также выступает как предшественник других мембранных систем. Рибосомы, прикрепленные к эндоплазматической сети, участвуют в синтезе белка (гл. 26). В процессе гомогенизации клетки эндоплазматическая сеть разрушается с образованием пузырьков — макросом, которые можно-выделить посредством осаждения центрифугированием. Они являются артефактами этого препаративного метода. [c.381]

Хотя реакции свободного окисления идут и в цитозоле, и на мембранах различных субклеточных структур, средоточием их являются мембраны эндоплазматической сети клетки. Так как последние при гомогенизации клеток и фракционировании субклеточных частиц гомогената дают фракцию микросом, которая может быть получена в виде препарата, то сейчас активно изучаются организация и функции микросомальной дыхательной цепи. Ее первая особенность сводится к тому, что, несмотря на наличие ферментов цепи переноса электронов, ни в одном пункте этой цепи не происходит сопряжения с фосфорилированием АДФ. Вторая особенность заключается в своеобразии структуры и функциональной активности цитохромов 6 5 и Р-450), входящих в ее состав. В частности, цитохром Р-450 (Л/а 50000, гемопротеин, первичная структура более десятка его форм распшфрована) обладает множеством (сотни, а может быть, и тысячи) форм, возникающих в ответ на введение (или попадание) в организм того или иного класса ксенобиотиков, подобно тому, как антитела синтезируются в ответ на присутствие антигенов поэтому цитохром Р-450 считают своего рода мембранным иммуноглобулином . [c.417]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология