Иммуноэлектрофорез ИЭФ применение

Гель-электрофорез. Электрофорез на геле и крахмале применяют для аналитических целей. Наиболее важным применением гель-электрофореза является иммуноэлектрофорез. Для этого вида анализа используют макропористые гели, в частности гели агара и агарозы. Метод иммуноэлектрофореза основан на том, что после разделения электрофорезом происходит диффузия разделенных веществ — антигенов — в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. Навстречу этим соединениям диффундируют антитела. При соединении антигенов и антител образуются характерные дуги осаждения. Метод иммуноэлектрофореза очень чувствителен при обнаружении антигенов, специфических для данных антител. В настоящее время применяют метод введения радиоактивной метки в антигены, благодаря чему радиоиммуноэлектрофорез является одним из самых чувствительных методов анализа биополимеров. [c.364]

Область применения. Предварительное определение зоны эквивалентности необходимо для постановки количественной реакции преципитации (см. стр. 125) и иммуноэлектрофореза (см. стр. 137). [c.123]

Иммунодиффузию можно сочетать с электрофорезом не только на бумаге, но и на ацетат-целлюлозных мембранах, в крахмальном геле и т. д. Этот метод нашел широкое применение при исследовании белков благодаря высокой специфичности реакции преципитации и очень хорошей разрешаюш,ей способности. Пример разделения приведен на рис. 18. Подробно иммуноэлектрофорез описан в обзорах [33, 52]. [c.100]

Была разработана методика [932] с применением меченого антигена (рис. 95), напоминающая ракетно-линейный иммуноэлектрофорез [719]. При исследовании а-фетопротеина нижний предел чувствительности составлял 20 нг/мл. Меченый антиген наносили на узкую полоску геля на его катодном конце, остальной гель содержал антитела. Лунки для образцов вырезали на границе этих двух участков геля. [c.265]

В классическом методе иммуноэлектрофореза в агаровом геле сочетание электрофореза с иммунодиффузией дает большое увеличение числа различаемых компонентов, хотя степень разрешения электрофореза при этом не повышается. В сыворотке человека таким путем можно обнаружить 20—30 компонентов в зависимости от качества применяемой антисыворотки. Линии преципитации соответствуют индивидуальным белкам, а не группам белков с одинаковой подвижностью. Обычно иммуноэлектрофорез рассматривают как источник качественной информации о белковом составе сыворотки. И действительно, он служит наиболее эффективным способом обнаружения недостаточности того или иного белка и изучения свойств моноклональных иммуноглобулинов. Описан также полуколичественный метод определения белкового состава сыворотки с применением иммуноэлектрофореза [8, 80]. Более удачным решением пробле- [c.335]

В гл. 2 описано применение таких сывороток для иммунологического анализа результатов обычного электрофореза и ИЭФ. Следующие три главы целиком посвящены разбору различных вариантов и возможностей собственно иммуноэлектрофореза, проводимого главным образом в гелях агарозы. [c.81]

Явление неисчерпаемой наследственной гетерогенности (которому еще предстоит гигантское расширение в результате применения новейших методов электрофореза и иммуноэлектрофореза в гелях к [c.189]

Анализ белков сыворотки осуществляется разнообразными им-мунохимическими методами, но здесь мы коснемся лишь двух методов двойной иммунодиффузии и иммуноэлектрофореза. Оба метода нашли широкое и многостороннее применение. Их используют для исследования нефракционированной сыворотки и для анализа отдельных белковых фракций. С появлением этих методов уда- [c.19]

Область применения. С помощью иммуноэлектрофореза производится идентификация компонентов белковых смесей, прежде всего сыворотки крови. Он весьма полезен при диагностике парапротеинемий и иммунодефицитных диспротеинемий. Этим методом осуществляется контроль чистоты белковых препаратов (определение примесей), а также анализ белков из тканей и жидкостей организма. [c.137]

Высокоэффективным методом разделения является сочетание электрофореза на бумаге с обычной хроматографией. При этом сначала через влажную бумагу, на которую нанесена смесь, пропускают ток высокого напряжения, а затем смесь хроматографируют с помощью подходящего растворителя в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. В результате достигается разделение первоначальной смеси в двух измерениях. Применение такого метода к продуктам ферментативного расщепления белков позволяет получить двухмерную картину, которую называют пептидной картой. Каждый белок дает характерную для него при каждом конкретном способе расщепления картину. Локализацию отдельных компонентов во многих случаях определяют с помощью специфических красителей. При определении аминокислот и пептидов в качестве такого красителя используют, например, нингидрин. Если производится элюция адсорбированных компонентов, то удобнее всего устанавливать их присутствие в элюате спектрофотометрически. Вероятно, наиболее тонким методом разделения белков следует считать иммуноэлектрофорез, при котором эффект достигается за счет использования различий в двух свойствах электрофоретической подвижности и иммунологической специфичности. [c.220]

Носителями в данном случае чаще всего служат ацетат целлюлозы [26] и гели агарозы [4]. Разрешающая способность таких систем очень низка из-за чрезмерного диффузионного размывания зон. Применение в качестве носителя крахмального или полиакриламидного геля значительно повышает разрешающую способность прежде всего благодаря молекулярно-ситовому эффекту. Иммуноэлектрофорез [56] является одной из разновидностей зонного электрофореза при постоянном значении pH после разделения белки диффундируют навстречу специфическим антителам и их взаимодействие приводит к образованию дуг иммунопреципитации. Полуколичественную оценку каждого антигенного компонента можно выполнить методом электроиммунодиффузии [57]. После разделения методом зонного электрофореза антигенные белки электрофоретически мигрируют в направлении, перпендикулярном прежнему пути, в гель, содержащий равномерно распределенные антитела. Высота образующихся пиков преципитации является мерой относительной концентрации белков в смеси. [c.120]

Реакция преципитации механизм, варианты постановки (кольцепреци-питаиия, преципитация в геле, иммуноэлектрофорез) и их диагностическое применение. [c.112]

В 1955 г. Шейдеггер [1126] впервые предложил микровариант иммуноэлектрофореза. Благодаря этому простому, быстрому и сравнительно дешевому методу иммуноэлектрофорез нашел широкое применение в повседневной практике. Для формирования геля используют предметные стекла (25X75 мм). Антигены, подвергаемые электрофорезу, помещают в небольшие лунки, а антитела — в продольные канавки. Следующую за электрофорезом иммунодиффузию проводят таким же способом, как и в макрометоде. Количество вносимой в канавку антисыворотки составляет 50—70 мкл. [c.237]

Как уже отмечалось, картина преципитации, получаемая при иммуноэлектрофорезе, сильно зависит от свойств иммунной сыворотки. Для каждого компонента смеси антигенов существует определенный диапазон концентраций, в котором получаются хорошо сформированные четкие линии преципитации (зона эквивалентности). В многокомпонентных смесях концентрация отдельных антигенов может различаться в широких пределах. Концентрация (титр) антител в применяемой иммунной сыворотке также может варьировать в значительной степени. Таким образом, вполне возможна ситуация, при которой зоны эквивалентности для разных компонентов смеси не будут перекрываться. В связи с этим иммуноэлектрофорез многокомпонентных смесей рекомендуется проводить при нескольких относительных концентрациях антиген-антитело, так как при использовании только одной такой концентрации можно не обнаружить какие-то компоненты. Предложен, в частности, метод иммуноэлектрофореза с применением последовательных разведений сыворотки человека [618, 619]. Этот метод иммуноэлектрофоретического титрования полезен для полуколичественного определения от- [c.239]

ПЕРЕКРЕСТНЫЙ ИММУНОЭЛЕКТРОФОРЕЗ И ПЕРЕКРЕСТНОЕ ИММУНОИЗОЭЛЕКТРОФОКУСИРОВАНИЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ РАЗНЫХ СРЕД В ПЕРВОМ И ВТОРОМ НАПРАВЛЕНИЯХ [c.260]

При механической желтухе в плазме больных обнаруживается особый липопротеид (Lp-X), который по своей плотности принадлежит к ЛНП и обладает характерным липидным и белковым составом. Выявление Lp-X на электрофореграмме основано на его миграции к катоду при обычных условиях электрофореза в агаровом геле. Для увеличения катодной подвижности Lp-X пластины агарового геля необходимо выдерживать перед электрофорезом не менее 6 ч [990, 1166]. Надежная локализация этого белка стала возможной благодаря применению специфических антисывороток [1164]. Петек и др. [990] сравнили три различных способа проведения иммунопреципитации. При первом способе антисыворотку помещают в канавки, подобно тому как это делается при иммуноэлектрофорезе по методу Шайдеггера. Во втором способе после электрофореза в геле вырезают круглые лунки для антител на расстоянии 4 мм от лунок для антигена. В обоих случаях время, необходимое для диффузии, составляет 12—16 ч. Второй способ является более экономным с точки зрения расходования антисыворотки. При использовании третьего способа (иммунофиксация) антисыворотку прямо наносят на поверхность геля на расстоянии [c.355]

Ракетный иммуноэлектрофорез Электрофоретическая миграция АГ в содержащем АТ геле с образованием линий преципитации, имеющих форму ракеты Поликлональные, моно-специфические, преципи-тирующие <5 мкг/мл АГ Возможность быстрой оценки А Г в области средней чувствительности. Применение ограничено АГ, мигрирующими к аноду, требует моноспецифических ЛТ. Необ.ходнмы пнтиген-ные стандарты [c.24]

Движение жидкости осуществляется за счет эндосмоса в пленке ацетилцеллюлозы, неожиданные особенности которого были обнаружены и использованы в этой работе. Самое замечательное здесь то, что равенство скоростей движения жидкости и миграции зон устанавливается автоматически. Экспериментатору не приходится заботиться об остановке картины распределения — она останавливается сама в результате игры сил, создаваемых электрическим полем. Для анализа распределения белков авторы использовали тонкие методы иммунодиффузии и иммуноэлектрофореза и потому назвали свой метод противоточным иммуноизотахофорезом , но, если этого достаточно, можно ограничиться применением обычных методов окрашивания или авторадиографии, описанных выше для ИЭФ. [c.79]

Электрофорез используется для разделения молекул, несущих суммарный заряд. Низковольтный электрофорез на бумаге нашел широкое применение для разделения аминокислот, пептидов, белков, нуклеотидов, нуклеиновых кислот и заряженных производных углеводов. Однако при низковольтном электрофорезе на бумаге имеет место значительная диффузия малых молекул, поэтому для их разделения применяют, как правило, высоковольтный электрофорез, при котором время разделения сводится до минимума и вследствие этого уменьшается диффузия. Вместо бумаги в качестве носителя зачастую используют ацетат целлюлозы, высокая чистота которого обусловливает уменьшение адсорбции образца, а следовательно, и лучшее разделение его компонентов. Одним из преимуществ ацетата целлюлозы является также его слабое фоновое окрашивание, что облегчает выявление соединений после рааделе-ния. Электрофорез на ацетате целлюлозы нашел широкое применение в клинике для разделения белков сыворотки крови (включая гликопротеиды и липопротеиды) и гемоглобинов он применяется также при иммуноэлектрофорезе. Высоковольтный электрофорез, как бумажный, так и тонкослойный, используется для разделения аминокислот, концентрация которых в плазме крови и моче при различных нарушениях обмена может быть довольно высокой. Особенно велика ценность тонкослойного электрофореза при разделении малых молекул, таких, как аминокислоты и нуклеотиды, поскольку [c.136]

В последние годы широкое применение получил метод серологической преципитации в геле. Большие преимущества этого метода, выполняемого на стеклах, состоят в следующем. Он позволяет разделять смесь молекул антигена и соответствующих антител благодаря различной скорости диффузии в геле, различной подвижности в электрическом поле (метод иммуноэлектрофореза) или же используя оба эти свойства. С помощью этого метода можно непосредственно сравнить два антигена, поместив их в соседние луикж на одной пластинке. Быть может, этот метод не столь чувствителен, как метод преципитации в пробирках, в смысле выявляемых концентраций вируса [1940]. Однако для постановки реакции этим способом, безусловно, требуются гораздо меньшие объемы реагентов. [c.366]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология