Реконструированные системы

Сравнение числа оборотов сукцинатдегидрогеназы в реконструированной системе и в изолированном состоянии. [c.418]

Для изучения липид-белковых взаимодействий в таких реконструированных системах был применен метод спектроскопии ЭПР [35]. Цитохромоксидаза была очищена и отделена от ассоциированного с нею липида экстракцией растворителем. Путем обратного титрования липидом, содержащим спин-меченный зонд (см. разд. 25.3.5), показано существование слоя липида, прочно связанного с белком (рис. 25.3.9). Кроме того продемонстрировано, что для проявления ферментной активности необходимо существование такого пограничного слоя, состоящего из 50 липидных молекул на молекулу цитохромоксидазы. [c.124]

При пуске и во время эксплуатации реконструированной системы обнаружили ряд недостатков [c.155]

Работа АТФ-аз изучается обычно на изолированных мембранных системах, в случае Са — АТФ-азы — на пузырьках саркоплазматического ретикулума, которые выделяют из гомогенатов мышечной ткани. В отдельных случаях работу фермента изучают и на реконструированной системе очищенной Са — АТФ-азе, встроенной в фосфолипидные везикулы (липосомы). [c.130]

Соединения, модифицирующие канал, который локализован в интактных пузырьках саркоплазматического ретикулума, оказались эффективными и в реконструированной системе. Кальций, добавленный в концентрации от 2 до 950 мкмоль/л с одной стороны мембраны, увеличивает вероятность открытия каналов, но не влияет на время их существования в открытом состоянии. АТФ также увеличивает вероятность нахождения канала в открытом состоянии, но при этом продлевает время его жизни. Наиболее вероятно, что АТФ оказывает активирующее действие, взаимодействуя с закрытым каналом в участке, отличном от Са-активируемого центра. Важно, что для полной активации каналов требуется присутствие обоих этих агентов В результате совместного действия Са + и АТФ канал может находиться в открытом состоянии длительное время. Предполагают, что каналу свойственны по крайней мере по шесть закрытых и открытых состояний, активируемых лигандами. [c.91]

Индукция в реконструированной системе хлоропластов [c.205]

Рис. 9.7. Задержка в выделении кислорода реконструированной системой хлоропластов при использовании в качестве субстрата ФБФ [43]. См. объяснение на рис. 9.8.

Основной эффект по замене водяных насосов высокого давления в реконструированных системах гидроудаления получен вследствие повышения цроизводитвльности установки за счет сокращения цикла подготовки камер к коксованию, приводящего к увеличению их оборачиваемости. [c.150]

Использование ленточных конвейеров подреакторного бункера и грохота позволило повысить выход крупнокусковых фракций кокса, снизить влажность кокса (с 20-24 до 12-14%), улучшить качество рассева. Однако реконструированная система также имеет ряд серьезных недостатков, не позволящих стабилизировать работу установки [c.16]

Ясно, что если учесть еще присутствие двух подвижных переносчиков, KoQ и цитохрома с (они почти полностью отделяются при выделении комплексов), то этого достаточно, для того чтобы полностью описать все окислительно-восстановительные реакции митохондриальной системы переноса электронов. Так, объединение комплекса I с комплексом 1TI позволяет получить митохондриальную НАД-Н цитохром с — оксидоредуктазу. Комплексы II и III в сочетании дают митохондриальную сукцинат цитохром с — оксидоредуктазу, а комплексы I + III + IV — митохондриальную НАД Н-оксидазу, комплексы II + П1 -j- IV — митохондриальную сукцин-оксидазу и, наконец, совокупность комплексов I, II, III и IV — всю цепь переноса электронов, т. е. НАД-Н- и сукциноксидазу вместе (XV. 18). Для того чтобы такая реконструированная цепь эффективно работала, необходимо все эти комплексы смешать друг с другом в стехиометрических соотношениях, взяв их в довольно высокой концентрации вместе с цитохромом с и коферментом Q. Последние два компонента представляют собой подвижные, жирорастворимые переносчики, способные связывать между собой различные процессы как в реконструированных системах, так и в целых электронпереносящих частицах (ЭПЧ) или митохондриях. Кофермент Q благодаря своей длинной алифатической боковой цепи хорошо растворим в. липидах, а цитохром с, который представляет собой водорастворимый белок, становится жирорастворимым, соединяясь с митохондриальными фосфолипидами. Наиболее убедительные доказательства того, что реконструированная из четырех комплексов цепь переноса электронов точно воспроизводит цепь интактной митохондрии, были получены в опытах с использованием ингибиторов. [c.390]

С реконструированной системой импуль сной очистки 7,1 900 0,12 0,01 0,0) 0,56 79 [c.119]

При работе с отделенными друг от друга фракциями хлоропластов осуществлять полностью процесс фотосинтеза могут только такие, куда добавленк недостающие компоненты - ферментные системы, кофакторы и др. JTO было подтверждено опытами с реконструированными системами, составленными из осажденных ламеллярных структур (граны, тилакоиды, квантосомы) и добавленной к ним во-дорчстворимой фракции, экстрагированной из тех же хлоропластов. [c.119]

Работу Са2 -АТФазы изучают на фрагментах саркоплазматическото ретикулума, выделяемых из мышечной ткани, а также на мембранных пузырьках, которые образуются в определенных условиях в смеси очиш енного препарата Са -АТФазы с фосфолипидами (реконструированная система — протеолипосомы см. 2 гл. XV). [c.157]

Однако раскрытие механизмов регуляции репликации затрудняется сложным, многоэтапным характером этого процесса и его легкой повреждаемостью, препятствующей воспроизведению in vitro в полностью реконструированной системе. До сих пор большая часть работ по изучению репликации ДНК осуществляется в модельных фаговых системах (фаги G4, М13, ФХ174 Т-фаги и др.). Значительные успехи достигнуты также при использовании термочувствительных мутантов бактерий, у которых процесс репликации ш.)вреждается при температурах выше оптимальной (ls-мутанты). [c.31]

В ТО-е гг. первым исследованием упаковки липидов вблизи мембранного белка в небольпаих временных интервалах (< 10 с) было определение подвижности спин-меченной жирной кислоты в реконструированной системе цитохромоксидаза — эндогенные митохондриальные фосфолипиды методом ЭПР. В дальнейшем подобные эксперименты проводились с использованием цито-хромоксидазы и цитохрома и липидных бислоев, содержаш их грамицидин А, а также мембраны микросом печени крысы, эритроцитов, вирусов Синдбис и везикулярного стоматита. Было показано, что значительная часть липидов в этих мембранах иммобилизована за счет белок-липидных взаимодействий. Количество иммобилизованных липидов при температурах 20—40 °С составляет примерно 0,2 мг на 1 мг белка (47 молекул фосфолипидов на белковый комплекс) цитохромоксидазы, что соответствует приблизительно одному слою липидов вокруг белковой глобулы. Примерно такое же количество (45—90) молекул иммобилизуется за счет взаимодействия с Са -АТФазой саркоплазматического ре-тикулума. Понижение температуры может приводить к возрастанию количества иммобилизованных липидов в 2—3 раза. [c.59]

Н-АТФаза была реконструирована Я. Кагавой и Э. Ракером в протеолипосомы. Механизм генерации Д лН+ и синтез АТФ в этих протеолипосомах были подробно изучены. Было показано, что комплекс Po+Pi может синтезировать АТФ в реконструированной системе при генерации на мембране A iH+. При этом эффективность синтеза не зависит от природы первичного генератора Д 1Н+. В моделях по реконструкции мембранных белков была выявлена возможность сборки молекулярных машин из элементарных деталей, принадлежащих представителям разных животных царств. Так, например, в одной из работ Э. Ракер и В. Стокениус реконструировали протеолипосомы, способные эффективно осуществлять фосфорилирование, где в качестве A iH+ генератора использовались бактериородопсин, Н-АТФ-синтетаза из митохон дрий сердца быка и фосфолипиды соевых бобов. [c.131]

В течение последнего десятилетия метод проникающих ионов был применен для обнаружения Д р во многих работах на митохон-риях, бактериях, хроматофорах, тилакоидах и их частицах, а также других природных и реконструированных системах. Такая универсальность не удивительна, так как основное требование к объекту исследования сводится к наличию участков фосфолипидного бислоя в исследуемой мембране. Это требование всегда выполняется в случае как природных, так и модельных мембранных образований. [c.38]

Комплекс b i включает один цитохром Ь, содержащий два гема низкопотенциальный Ь/ (синоним — >566, по а-максимуму спектра поглощения) и высокопотенциальный bh (или os6o) один негемовый железосерный центр (FeS) один цитохром i и несколько бесцветных белковых субъединиц разной молекулярной массы, не имеющих простетических групп. K0QH2 и цитохром Сг служат, соответственно, восстановителем и окислителем комплекса Ьси Цитохром С2 — водорастворимый цитохром, подобный цитохрому с митохондрий (см. разд. 3.4.5). В реконструированных системах митохондриальный цитохром с успешно заменяет цитохром Сг. Редокс-потенциалы компонентов комплекса представлены на рис. 18. [c.60]

Опыты на клетках яичника китайского хомячка (СНО) привели к предположению о компартментации двух популяций белка NS, различающихся на 10% по степени фосфорилирования, причем с РНП ассоциирована популяция с меньшим уровнем фосфорилирования [6]. Вместе с тем в клетках ВПК такой компартментации не наблюдали. Для разделения молекул NS использовали ионообменную хроматографию. Оказалось, что транскрипция in vitro идет только в присутствии более фосфорилированных молекул. Белок NS, выделенный из растворимой цитоплазматической фракции, по своей подвижности в геле отличается от вирионной формы малой степенью фосфорилирования и неспособностью поддерживать транскрипцию в реконструированных системах. Хотя высокий уровень фосфорилирования коррелирует со способностью поддерживать транскрипцию, неясно, существенны ли все или некоторые из фосфорилированных остатков для активности белка NS, или же эта корреляция случайна, [c.435]

Рис. 7.27. Выделение кислорода реконструированной системой хлоропластов в присутствии ФГК- Состав реакционной смеси каталитические количества ADP и NADP+, а также Mg Ia, ферредоксин, разрушенные хлоропласты и экстракт стромы. А. Снятие возрастаюш ими концентрациями ФГК подавления под действием ADP. Стрелками показано добавление ADP до конечной концентрации 1 мМ. Задержка под действием ADP значительно сокращается при более высоких концентрациях ФГК (верхняя кривая). Б. Снятие при помощи АТР подавления под действием ADP. Стрелками обозначено добавление АТР до конечной концентрации 5 мМ (верхняя кривая) и внесение ADP до концентрации 1 мМ (обе кривые). Индукционный период сокращается в присутствии АТР. Цифры около кривых показывают скорость выделения кислорода [в мкмоль-(мгХл)- Ч ].

Рис. 7.33. Фиксация СОг в реконструированной системе хлоропластов. Как видно из рисунка, субстраты вносили рез 2 мии после включения света, В случае Ру5Ф значительная фиксация происходит уже в первую минуту, в то время как для ФБФ и ФГК наблюдается четкий индукционный период (Уокер, неопубликованные данные).

Присутствие бикарбоната, ионов магния и дитиотрейтола в реконструированной системе хлоропластов при щелочных значениях pH должно обеспечивать полную активность все.ч участвующих в фотосинтезе ферментов. Таким образом, задержки, которые наблюдаются в фиксации СОа, по-видимому, обусловлены необходимостью накопления соответствующих количеств промежуточных продуктов. Хотя в результате разбавления эти количества в реконструированных хлоропластах гораздо ниже, чем в интактных, такие задержки позволяют прийти к выводу о необходимости накопления соответствующих концентраций триозофосфата и гексозомонофосфата. [c.206]

Рис. 8.23. Реакция интактных хлсропластов шпината (слева) и реконструированной системы хлоропластов шпината (справа) на добавление ADP. ADP медленно проникает через мембрану интактных хлоропластов (слева), что снижает его ингибирующий эффект, который ярко выражен, когда мембраны нет (справа) (Walker, 1976).

Эти две стадии составляют вместе легко обратимую окисли-тельно-восстаиовительиую реакцию, которая отличается от реакции гликолиза лишь тем, что коферментом в ней служит NADP+, а не (NAD+. При гликолизе окислеиие представляет собой сопряженное с субстратом фосфорилирование, на которое в целом затрачивается 8,2 ккал, причем 7 ккал из них сохраняется в виде АТР. При фотосинтезе восстановление ФГК до триозофосфата становится энергетически возможным благодаря использованию АТР. Тем ие меиее термодинамически невыгодное-пололсение равновесия первой стадии приводит к тому, что реакция легко идет в обратную сторону в присутствии ADP. Как показали опыты с реконструированной системой хлоропластов, ФГК-зависимое выделение кислорода быстро подавляется в результате добавления небольшого количества ADP (рис, 8.17), Реконструированная система хлоропластов состоит из хлоропластов, подвергнутых осмотическому шоку, к которым после этой обработки добавляют коферменты и белки стромы. Хлоропласты в такой системе лишены интактных оболочек, и поэтому ничто не препятствует свободному поступлению соединеиий внутрь хлоропластов и выходу из них. Во многих отношениях такую систему молено рассматривать как один большой хлоропласт, ограниченный стенками реакционного сосуда. Как мы уже. отмечали, реконструированная система с ФГК в качестве субстрата будет выделять кислород до тех пор, пока к ней не добавят ADP. Однако фотофосфорилирование (мы пока, еш.е не знаем, является ли оно циклическим, псевдоциклическим или к тем и другим) продолжается и после того, как прекращается, выделение кислорода. По мере превращеиия ADP в АТР временное ингибирование снимается. Аналогичное подавление могут вызывать Р5Ф и другие соединения использующие энергию АТР [c.275]

Смотреть страницы где упоминается термин Реконструированные системы: [c.410] [c.142] [c.299] [c.295] [c.274] [c.120] [c.118] [c.189] [c.66] [c.56] [c.18] [c.26] [c.116] [c.427] [c.197] [c.206] [c.207] [c.209] [c.229] [c.263] [c.267] [c.267] [c.287] [c.288] [c.127]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология