Зонды получение из продуктов ПЦР

В иммуноферментном анализе используются поли- и моноклональные антитела как по отдельности, так и вместе. Относительная легкость получения поликлональных антител из антисывороток иммунизированных животных в ряде случаев дает возможность пренебречь их гетерогенностью. Однако разработка метода получения моноклональных антител — продуктов гибридных клеток — дала им огромные преимущества в иммунохимическом анализе в связи с уникальными свойствами, выгодно отличающими их от антисывороток. Использование моноклональных антител в иммуноферментном анализе дает возможность работать с практически неограниченным источником антител, однородных по молекулярным и иммунологическим свойствам. С их появлением открылись новые возможности для структурного изучения антигенов. Это связано с тем, что моноклональные антитела, продуцируемые гибридомами, связываются со специфическим участком на поверхности белковой молекулы — антигенной детерминантой и могут быть использованы в качестве селективных зондов на определенные структурные участки. [c.306]

Молекулярная диагностика — это быстро развивающееся направление. Хотя его основные принципы уже сформировались, технические детали отдельных тестов могут различаться. Для получения в достаточном количестве ДНК-мишени сейчас успешно применяют ПЦР. Использование ПЦР и специфических зондов существенно повышает чувствительность тестов и позволяет применять нерадиоактивные хромогенные, хемилюминесцентные и флуоресцентные системы регистрации. Во многих случаях для выявления мутации или экзогенной ДНК инфекционного агента в исследуемом образце достаточно провести ПЦР с последующим электрофоретическим разделением продуктов. Не вызывает сомнения, что с помощью ДНК-диагностики можно будет выявлять большинство, а возможно и все наиболее распространенные ге- [c.201]

Практическое применение водорода довольно многообразно им обычно заполняют шары-зонды, в химической промышленности он служит сырьем для получения многих весьма важных продуктов (аммиака и др.), в пищевой — для выработки из растительных масел твердых жиров и т. д. Высокая температура (до 2600 °С), получающаяся при горении водорода в кислороде, используется для плавления тугоплавких металлов, кварца и т. п. Ежегодное мировое потребление водорода превышает 1 млн. т. 23 [c.119]

Начиная с 1980 г. в Патентные ведомства всего мира было подано более 5000 заявок на полноразмерные гены, примерно на 1500 из них были выданы патенты. Наиболее значимым патентом, выданным на способ получения продукта с использованием гена человека, можно считать патент на способ получения рекомбинантного эритропоэтина, который принес заявителю за один только 1996 г. доход более 1 млрд. долларов. Эритропоэтин стимулирует образование эритроцитов и используется для предупреждения анемии у больных с почечной недостаточностью, которые подвергаются диализу. Множество других запатентованных нуклеотидных последовательностей используются в качестве диагностических зондов (биомаркеров). [c.537]

Когда в 1966 году американское космическое ведомство запустило лунный зонд Сарвейор , имевший на своем борту атомную энергетическую установку с 7,5 г кюрия, то лишь посвященные знали, как трудно было получить такое количество кюрия. Пришлось в течение четырех месяцев в мощном реакторе бомбардировать нейтронами 77 г америция-241 стоимостью в 20 ООО долларов, а затем перерабатывать полученные продукты. [c.199]

Для быстрого охлаждения плазмы 5-Ы-Р использовался тот же закалочный зонд. Единственным продуктом, содеожавшкм связанный азот и наблюдавшимся в потоке газов после закалки, был МРд. Зависимость его выхода от расхода реагента, приведенная на рис. IX. 18, подобна полученной в работах с подачей в плазму Ср4-В системе 5—N—Р суммарная концентрация фторидов азота оказалась примерно равной концентрации, полученной в системе С—N—Р, и составляла около 1 мол. %. Остальными компонентами были азот и шестифтористая сера в приблизительно том же соотношении, в котором они вводились в реактор. На внешней поверхности закалочного зонда происходило образование некоторых сульфидов металлов. Зависимость выхода продукта от отношения Р/М для системы с серой, показанная на рис, IX. 18, также аналогична соответствующей зависимости для системы с углеродом. [c.211]

Оптимальными, на наш взгляд, являются РНК-зонды и соответственно исследуемые на однонуклеотидные замены участки ДНК длиной от 100 до 1000 нуклеотидов. В этом случае и сам зонд, и продукты его расщепления легко выявляются при помощи денатурирующего гель-электрофореза в полиакриламидном геле, аналогичном используемому при секвенировании ДНК. При этом отношение сигнала к фону достаточно высоко для получения четких результатов. Совсем нетрудно наработать меченые одноцепочечные РНК-зонды гораздо большей длины, но результаты обработки таких длинных цепей РНКазой неоднозначны. Еще одна проблема, которая возникает при использовании зондов с длиной цепи более 1000 п. н., заключается в том, что под действием РНКазы наряду с расщеплением РНК—ДНК-дуплексов по неспаренным участкам может происходить (хотя и редко) расщепление цепи РНК по комплементарно спаренным участкам дуплекса. Кроме того, анализ продуктов расщепления длинных РНК-зондов (>-1000 п.н.) требует проведения денатурирующе- [c.127]

Благодаря физиологической инертности и легкой стерилизуе-мости силоксановые вулканизаты нашли разнообразное применение в фармацевтической, пищевой и медицинской промышленности. Из них изготавливают различные пробки, уплотняющие прокладки, пленки и другие изделия, находящиеся в контакте с пищевыми продуктами, лекарствами, питьевой водой детские соски и другие предметы санитарии и гигиены, зонды, катетеры, прозрачные трубки для переливания крови и т. д. Силоксановые композиции холодного отверждения используют в пластической хирургии, а также для получения оттисков при протезировании зубов. Легкая вживляемость силоксановых резин в организм позволяет изготовлять из них сердечные клапаны, искусственные сосуды, дренажные трубки и т. д. [c.498]

Практическое применение водорода многообразно им обычно заполняют шары-зонды, в химической промышленности он служит сырьем для получения многих весьма важных продуктов (аммиака и др.), в пищевой — для выработки из растительных масел твердых жиров и т. д. Высокая температура (до 2600 °С), получающаяся при горении водорода в кислороде, используется для плавления тугоплавких металлов, кварца и т. п. Жидкий водород является одним из нар[более эффективных реактивных топлив. Ежегодное мировое потребление водорода превышает 1 млн. т. технически водород получают, главным образом, взаимодействием природного метана с кислородом и водяным паром (по суммарной схеме 2СН4 + О2 + 2НгО = 2С0г + 6Н2 + 37 ккал) или выделяя его из коксового газа путем сильного охлаждения последнего. Иногда пользуются также разложением воды электрическим током. Транспортируют водород в стальных баллонах, где он заключен под большим давлением.2 . [c.117]

Метод Рудлоффа [24] с использованием перйодата и перманганата нашел применение с теми или иными изменениями для определения положения двойных связей в молекуле путем окислительного расщепления по двойным связям и последующего ГХ-анализа образующихся продуктов. Продукты представляют собой карбоновые кислоты их обычно определяют в форме соответствующих метиловых эфиров. Для количественного выделения эфиров моно-и дикарбоновых кислот от С4 и выше Кюммель [25] проводил непрерывную экстракцию этих кислот, омылял их в процессе удаления растворителя и разделял метиловые эфиры, образовавшиеся из соответствующих солей (без концентрирования), методом ГХ с программированием температуры. Утверждалось, что такой метод позволяет преодолеть трудности, связанные с выделением короткоцепочечных кислот, для которых характерна высокая летучесть и значительная растворимость в воде. Имеется и несколько других аналогичных методов, которые обеспечивают количественное выделение всех образующихся кислот, за исключением короткоцепочечных [26, 27]. В еще одной модификации метода Рудлоффа [28 в водный раствор кислот добавляют гидроокись тетраметиламмония. Порцию полученного раствора помещают в специальный зонд, высушивают при температуре 100 °С и вводят в газовый хроматограф метиловые эфиры образуются в этом анализе при нагреве в результате контакта зонда с образцом с горячей поверхностью (выше 250 °С) входного устройства хроматографа. [c.222]

Чтобы обеспечить адекватность диагностического теста, гибридизационные ДНК- и РНК-зонды должны быть высокоспецифичными. Другими словами, необходимо, чтобы зонд гиб-ридизовался только с искомой нуклеотидной последовательностью. Если есть вероятность получения ложноположительного (наличие гибридизационного сигнала в отсутствие последова-тельности-мишени) или ложноотрицательного (отсутствие сигнала при наличии последователь-ности-мишени) результата, то целесообразность применения теста значительно снижается. Специфичность зондов может проявляться на разных уровнях они могут различать два и более вида, отдельные штаммы в пределах одного вида или разные гены. В зависимости от ситуации зонды могут быть представлены молекулами ДНК или РНК они могут быть длинными (более 100 нуклеотидов) или короткими (менее 50 нуклеотидов), представлять собой продукт химического синтеза, клонированные интактные гены или их фрагменты. [c.188]

МИ, проводят гибридизацию in situ с комплементарными им зондами, и если обнаруживается, что эти последовательности встречаются в геноме один раз, то синтезируют пару комплементарных им праймеров и проводят амплификацию СА-повтора. Далее, используя эту пару праймеров, проводят ПЦР-тестирование ДНК, полученной от большого числа индивидуумов. ПЦР-продукты, длина которых для удобства электрофоретического разделения выбирается примерно 200 п. н., разделяют в полиакриламидном геле. Если длина амплифицированного таким образом сегмента ДНК одинакова для всех образцов ДНК, значит, повтор не полиморфен (рис. 20.14, А), и наоборот, если образуются [c.455]

В процессе отжига ферритные зоны частично претерпевали превращения и на стыках зерен аустенита появлялись образоваиия. Межкристаллитный разрыв на аустенитных участках произошел за счет скалывания в ферритных зонах, которые на микрофрактографии легко опознаются по ручейка>м , которые они образуют. Далее, межкристаллитные карбиды и продукт превращения феррита переходят в пробу. Согласно данным микроанализатора с электронным зондом, для последнего отношение весовых концентраций [Сг] [Ре] составляет 2,2 (около 10%)., что может соответствовать карбиду хрома. Рентгеноструктурный анализ полученных ранее остатков подтвердил этот результат и показал, что образуется карбид. [c.274]

Результаты описанных выше экспериментов позволяют получить информацию о процессе смешения струй плазмы и нереагирующего газа в гидродинамическом смысле, т. е. о процессе выравнивания радиальных профилей температуры. Однако из полученных данных не следует, что перемешивание завершилось на молекулярном уровне [6]. В то же время именно такое перемешивание является необходимым (и при определенной температуре достаточным) условием реализации химической реакции, поскольку химическая реакция иредставляет собой взаимодействие на уровне молекул. Измерение поля температур в условиях реального технологического процесса (при введении в плазму паров эфиратов) затруднено вследствие образования в зоне реакции твердой фазы целевого продукта и забивки приемного отверстия зонда. Однако результаты анализа проб, отобранных из зоны реактора на расстоянии L/d 4—4,5 и из рукавного фильтра, установленного на расстоянии L/d>4,5, показали, что содержание С в конечном продукте в обоих случаях практически одно и то же. Это позволяет предположить, что в условиях проведенных экспериментов полученная ве- [c.127]

Технологический процесс получения алкидных смол заключается в непосредственном нагревании компонентов реакции до температуры 190—230°. Смолу сливают из аппарата в противни тонким слоем для охлаждения, если в котле не готовят непосредственно лак. Для производства можно применять открытые котлы с зондом для возвращения возгоняющейся фталевой кислоты, которая чаще всего применяется. Для получения немо-дифицированного глифталя на 29,2 вес. ч. 94%-ного глицерина вводят 70,8% фталевого ангидрида. Процесс получения плавкой смолы с температурой плавления ПО—115° длится от 60 до 120—150 минут, в зависимости от режима нагрева. Слитая смола бесцветна, прозрачна и растворима в ацетоне. При нагревании при 230—240° она в несколько минут переходит в неплавкое и нерастворимое состояние. При 150° этот процесс длится много часов. Промежуточные продукты, аналогично фенолальдегидным смолам в стадии резитола, неплавки и нерастворимы, но несколько размягчаются при нагревании и набухают в ацетоне. Кислотное число алкидных смол меняется в широких пределах, в зависимости от соотношения компонентов и условий реакции. Нужно иметь в виду различие в значениях кислотного числа алкидных смол и полимеризованных масел. В алкидной смоле свободная кислота не мономолекулярна, а такой же полимер, как и нейтральная часть смолы, и кислотное число, например 5, это — очень незначительная кислотность, которая оттитровывается только сильными кислотами, но не взаимодействует с пигментами. [c.104]

Следовательно, по данным измерений методом парамагнитного зонда окислительное и окислительно-деструктивное воздействие кислорода в процессе пленкообразования имеет решающее значение в изменении микроструктуры полимерных пленок МЭА и сравнительно мало сказывается на микроструктуре пленок МТПА и МПА. В пленках МЭА доля связей —О—О— составляет 0,44 против 0,15 для МПА. Кроме того, в пленках МЭА, полученных на воздухе, накапливается значительное количество (до 40%) не вошедшего в сетку полимера, лишенного двойных связей, и продуктов окислительной деструкции, которые могут оказывать пластифицирующее действие. [c.101]

Результаты авторов работы [5] свидетельствуют о том, что при использовании зонда среднего диаметра (из применявшихся) содержание ацетилена в продуктах повышается от 15 до 25% с увеличением отношения С/Н от 1,0 до 3,0. При использовании же закалочного зонда большего или меньшего диаметра содержание ацетилена в продуктах было меньшим, чем в предыдущем случае, однако тенденция изменения выхода ацетилена с изменением отношения С/Н оставалась той же. Эти результаты согласуются с расчетными, приведенными на рис. УП1.5, которые также выявляют подобную тенденцию, но величины выходов С2Н2, полученные экспериментально, [c.165]

РНК-зонды обладают всеми преимуществами одноцепочечных ДНК-зондов это отсутствие конкурентной гибридизации молекул зонда друг с другом, высокая удельная радиоактивность по сравнению с продуктом ник-трансляции и не представляющее трудностей определение длины молекул. Дополнительное преимущество этих зондов по сравнению с одноцепочечной ДНК — большая простота их получения. Транскрипты можно отделить от матрицы путем ее ДНКазного расщепления и фенольной экстракции, тогда как получение одноцепочечных ДНК-зондов требует более трудоемкой процедуры выделения их из геля. В то же время РНК-зонды в большей степени подвержены деградации, чем соответствующие им ДНК-зонды, и об этом нельзя забывать. Самая распространенная проблема, встающая при использовании РНК-зондов, — неоднозначность интерпретации в случае получения отрицательного результата. [c.13]

Возможность экспрессии клонированных эукариотических генов в клетках Е. соИ способствовала углубленному изучению множества белков, представляющих интерес для фундаментальных научных исследований и медицины. В тех случаях, когда нативный негибридный белок экспрессируется недостаточно эффективно, часто экспрессия белков или их фрагментов в виде гибридов с полипептидами Е.соИ, такими, как -галактозидаза, оказывалась более успешной. К тому же гибридные белки можно легко очищать с помощью хроматографических методов, разработанных для -галактозидазы. Эукариотические белки, экспрессируемые в составе гибридных продуктов, были с успехом использованы при изучении иммунологически важных участков поверхностных антигенов [1], функций рекомбинантных полипептидов [2], при получении иммунологических зондов, необходимых для исследования ранее не изученных антигенов [3—6], для экспрессии вариантных форм белковых субъединиц и для выделения и исследования клонов ДНК из экспрессирующихся библиотек генов [8—10]. Технология работы с экспрессирующими векторами достигла столь высокого уровня развития, что стало возможным осуществлять в клетках Е. соН достаточно эффективную экспрессию практически любой кодирующей последовательности с образованием гибридного продукта, который можно выделить с помощью разнообразных биохимических методов и использовать его либо в различных функциональных исследованиях либо в качестве иммуногена. Синтез чужеродного полипептида в виде гибридного белка с -галактозидазой, по всей вероятности, значительно увеличивает стабильность этого полипептида в клетках Е. соИ. По-видимому, стабильность белка, а не сила промотора — наиболее важный фактор для успешной экспрессии рекомбинантных белков в бактериях. [c.138]

В 3 случаях при наличии клинически выраженной МД не было выявлено экспансии при гибридизации продуктов ПЦР с олигонуклеотидным зондом. Все эти больные являются спорадическими и, при проведении исследования ДНК из образцов крови, полученных от этих пациентов, с использованием денатурирующего электрофореза было выявлено наличие двух аллелей нормальной длины. Иногда отсутствие удлиненного аллеля при наличии клинических симптомов, характерных для МД, может быть связано с поражением другого локуса DM-2, картированного на 3-й хромосоме, и приводящего к развитию сходного заболевания, названного позднее проксимальная миотоническая миопатия (ПММ) (Ranum et al., 1998 Nestor et al., [c.320]

Смотреть страницы где упоминается термин Зонды получение из продуктов ПЦР: [c.477] [c.143] [c.477] [c.220] [c.398] [c.193] [c.480] [c.222] [c.105] [c.166] [c.194] [c.333] [c.18] [c.43] [c.43] [c.127] [c.127] [c.73] [c.228] [c.319] [c.181] [c.302] [c.333] [c.92]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология