АН-сефароза 4В и СН-сефароза

Сефароза Сефароза 4В Голубая сефароза 6В [c.300]

Сефароза с гексаметилендиамином Аминогексил-сефароза 4В Сефароза Сефароза 4В [c.303]

Конканавалин А—сефароза Сефароза 4В [c.337]

Конканавалин А — сефароза Сефароза 4В АН-сефароза 4В [c.350]

Марка сефарозы Концентрация агарозы, % Диаметр гранул, мкм Область фракционирования для глобулярных белков, тыс. Дальтон [c.119]

Активация сефарозы. Сефарозу 4В промывают на стеклянном фильтре (типа G-3) 10-кратным объемом 0,1 М На-фосфата (pH 11), затем бидистиллированной водой до нейтральных значений pH. Слегка подсушенную на фильтре током воздуха сефарозу взвешивают и заливают 1 М К3РО4 (pH И) 1 мл на 1 г сефарозы. К полученной суспензии, предварительно охлажденной до 4° С, добавляют при постоянном перемешивании раствор Br N в воде (5%) или в диоксане (20%) из расчета 5 мг Br N на 1 г сефарозы. После 7-минутной инкубации суспензию сефарозы переносят на стеклянный фильтр и быстро промывают сначала 20-кратным объемом охлажденной бидистиллированной воды, затем 20-кратным объемом 0,1 М На-фосфата, содержащего [c.297]

Ряд алкилагароз со структурой СНз(СН2)пМН—сефароза (где п принимает значения от О до 7), и-аминоалкилагароз со структурой ЫН2(СН2)п ЫН—сефароза (где п — от 2 до 8) характеризуется близким содержанием алкильных боковых цепей на гранулу геля [15, 49]. В одинаковых условиях (pH, ионная сила, состав буферного раствора и температура) способность СНз(СН2)пЫН—сефарозы удерживать фосфорилазу Ь зависит от длины углеводородных цепей. При хроматографии на производных сефарозы (я = 0 или 1) фосфорилаза Ь выходила из колонки с фронтом растворителя при п = 2 происходила задержка фермента, а при п = 3 фермент адсорбировался. Элюирование фосфорилазы Ь с модифицированной сефарозы (п = 3) возможно с помощью деформирующих буферных растворов, которые, как было показано, приводят к обратимым структурным изменениям фермента. На производном сефарозы с л = 5 связывание фосфорилазы было настолько сильным, что фермент не элюировался с колонки, даже когда pH деформирующего буферного раствора понижался до 5,8, хотя деформирующая способность такого буфера намного выше. Освободить фосфорилазу Ь из комплекса с этим производным можно только в неактивной форме после промывки колонки 0,2 М уксусной кислотой. Сама агароза содержит отрицательные заряды, а связывание алкил- или ариламинов на активированной бромцианом агарозе вводит в гель положительные заряды (разд. 8.2.4). В связи с этим йост и др. [28] обращали внимание на то, что на сефарозе с алкиламинами, прикрепленными после предварительной активации носителя бромцианом, связывание белков происходит большей частью при pH выше изоэлектрической точки выделяемых белков. Поэтому допускалось, что в этих случаях электростатические взаимодействия с положительно заряженной Ы-замещенной изомочевиной более существенны для связывания, чем гидрофобные взаимодействия с гидрофобной боковой цепью. Тем не менее гранулы агарозы не связывают фосфорилазу Ь, пока к ним не будут прикреплены алкильные боковые цепи некоторой минимальной длины. Кроме того, отмеченные выше заряды в равной мере присутствуют во всех членах гомологического ряда, и, следовательно, они не могут быть причиной различий в степени [c.152]

Содержание остатков сульфокислоты в сшитой сефарозе гораздо ниже, а связанная с ними ионная сорбция — значительно слабее, чем у обычной сефарозы, поскольку в процессе ее изготовления осуществляется специальное десульфированпе путем щелочного гидролиза в восстанавливающей среде. Sepliarose L поставляется в виде густой водной суспензии с добавкой 0,02% азида натрия. Сама по себе сшитая сефароза очень устойчива к атаке микроорганизмов, но во избежание их роста в жидкой среде хранить эту сефарозу следует также в присутствии NaNg. [c.120]

Пример 10, Выделение ДНК, кодирующей синтез РНК вируса миелобластоза птиц (AMV), из миелобластов цыпленка [Som, Nayak, 19781, В данном случае авторы решали обратную задачу. Очищенную из вируса и денатурированную РНК фиксировали на Br N-активированной сефарозе. Суммарную ДНК из миелобластов цыпленка денатурировали и одновременно освобождали от остатков РНК обработкой 0,3 М КОН (37 16 ч), дробили ультразвуком до фрагментов длиной около 300 нуклеотидов и сорбировали на РНК-сефарозе, 0,75 г сорбента, содержащего около 50 мкг вирусной РНК в 14 мл среды для гибридизации (50% формамида - -0,75 М Na I-f- [c.443]

В работе Лоу и др. [42] сопоставлены свойства сорбентов на основе целлюлозы и сефарозы, для чего использовались экспериментальные кривые титрования 6-аминогексил-МАО+—сефарозы, немодифицированной сефарозы, 6-аминогексаноил — сефарозы и соответствующих производных целлюлозы (рис. 8.1). Очевидно образование ионизирующих групп после активации бромцианом это было также показано в случае целлюлозы, когда для реакции присоединения использовали дициклогеисилкарбодиимид [38]. Отклонение, наблюдаемое для сефарозы, существенно меньше, [c.180]

Сефароза 4Е5 с триэтилеитетраамином и янтарным ангидридом Сефароза Сефароза 4В [c.317]

Считается, что сефароза устойчива в области pH 4—9 с ней не рекомендуется работать при температурах иже 0°С или выше 40 °С. Сефароза устойчива к действию концентрированных растворов солей или мочевины. Куатреказас [14] указывает,, что на частицы агарозы существенно не влияет продолжительное воздействие 6М раствора гуанидинхлорида или 7М раствора мочевины. Поэтому агарозные аффинные сорбенты можно отмывать от белков этими денатурирующими растворами. В течение 2—3 ч при комнатной температуре на агарозу не действуют 0,1М гидроксид натрия или 1М хлорная кислота. Ни 50%-ный (по объему) водный диметилформамид, ни 50%-ный (по объему) водный этиленгликоль не меняют структуру агарозы. Эти растворители полезны при аффинной хроматографии относительно плохо растворимых в воде соединений, например тироксина и стероидов. Аффинные сорбенты на основе сефарозы можно хранить при 4° С в виде водной суспензии с до бавкой антибактериального агента. Длительность хранения определяется лишь стабильностью связанного аффинного лиганда. Однако агарозные аффинные сорбенты полностью разрушаются при высушивании или замораживании. Согласно данным Аксена и Эрнбека )[3], эти сорбенты можно лиофилизовать, если добавить к ним декстран, глюкозу и сывороточный альбумин. Химическая стабильность биогеля А такая же, как у сефарозы. [c.16]

Рис. 2. Влияние длины колонки при постоянных концентрации и содержании лиганда на связывание двух ферментов с Ы -(6-аминогексил)-5 -АМР-сефарозой. Образец (100 мкл), содержащий фермент (5Е) и бычий сывороточный альбумин (1,5 мг), наносили на колонки (различных диаметров б, 9, 13 5 и 23 мм) с N -(6-aминoгeк ил)-5 -АМР-сефарозой (2,0 г влажного носителя, 1,5 мкмоль 5 -АМР/мл). Связывание оценивалось как концентрация K I (ммоль/л) в центре пика фермента при его элюировании линейным градиентом K I. Бычий сывороточный альбумин, который элюировали уравновешивающим буфером, дрожжевую алкогольдегндрогена-зу (/) и глицерокиназу (2) анализировали методами, указанными в работе [6].

Получение трипсин-сефарозы 4 Б. Ковалентное присоединение трипсина проводят по методу Шо-ве и Ашера ( hauvet, A her, 1972) к 50 мл сцеженной активированной сефарозы 4Б, суспендированной в 50 мл буфера А (общий объем 100 мл), одноактно прибавляют раствор 1 г трипсина в 16 мл того же буфера. Реакцию проводят при перемешивании при 4°С в течение 18 ч полученную трипсин-сефарозу 4Б промывают 2,5 л буфера А, содержащего 0,22 М Na l, а затем — 1 л 0,1 М буфера Б до исчезновения поглощения при 280 нм у промывных вод. Трипсин-сефарозу хранят в буфере Б прн 4 С. [c.199]

Несмотря на довольно убедительные данные [102] об эффективности применения вышеуказанных сорбентов для очистки ряда рестриктаз, они практически не получили распространения в этой области препаративной биохимии ферментов. Хроматографическое фракционирование на голубой сефарозе было включено как одна из стадий очистки рестриктаз Мга I [289] fl I, Gal i и Gee i [121] и при получении гомогенных препаратов Pal I [33] и Mva I [29]. Пиран сефароза нашла применение в ходе выделения функционально очищенных Nsp рестриктаз из Nosto РСС7524 [211]. [c.157]

В обычной аффинной хроматографии для иммобилизации субстратов в качестве носителей используются агароза и сшитая сефароза. В качестве сшивающего агента обычно выступает ВгСМ, а мостик образован а,о)-диамином. Эти полисахаридные носители подвержены биодеградации, и, следовательно, органические полимерные гели более удобны в качестве матрицы и допускают более широкий набор химических модификаций. Именно эти причины побудили Уайт-сайдса и сотр. разработать новый метод иммобилизации ферментов в сшитых органических полимерных гелях [126]. По своей простоте и универсальности этот метод превосходит ранее предложенные. Особенно ценен он при иммобилизации относительно лабильных ферментов для использования в ферментерах большого размера при проведении реакций органического синтеза, катализируемых ферментами. [c.257]

Как видно из нриведеппых данных, процентное содержание агарозы в гелях отражено в маркировке этих матриц. Диаметры здесь даны для набухших гранул. На рис. 62 представлены графики селективности матриц сефарозы. [c.119]

В отличпе от сефадексов и обычной сефарозы, пористость сшитой сефарозы практически не лсеняется при переходе от водных растворителей к органическим. При этом она устойчива к пх воздействию, что облегчает проведение разнообразных химических реакций замещения с целью получения аффинных сорбентов. Вместе с тем отметим, что активация сефарозы L бромистым цианом (для присоединения аффинных лигандов) происходит с вдвое более низкой эффективностью, чем в случае обычной сефарозы. Это объясняется тем, что сшивка идет по тем же самым гидроксилам, что и активация с помощью Br N. [c.120]

Биогели серии А. Американская фирма Bio-Rad выпускает агарозные матрицы для гель-фильтрации под торговым наименованием Bio-Gel А . Нет нужды останавливаться на свойствах этих матриц — они аналогичны тем, что были описаны для сефарозы. Ниже представлены параметры шести тппов этих матриц. [c.120]

Первые четыре типа производятся в виде сферических гранул трех дианазонов диаметров 150—300 мкм (50—100 МЕШ), 80— 150 мкм (100—200 МЕШ) и 40—80 мкм (200—400 МЕШ) два последних типа выпускаются в виде гранул только двух диапазонов 50 — 100 и 100—200 МЕШ. Отметим, что днаназон 200—400 МЕШ намного уже, чем диапазоны размеров гранул сефарозы, а это — немало- [c.120]

Уже упоминалось, что ввиду сжимаемости многих матриц для гель-фильтрацип перепад давлений, приходящийся на колонку, и максимальную скорость. элюцпи (эти величины взаимосвязаны) в ряде случаев следует ограничивать. Подчеркнем, что эти ограничения необходимы не только уже в ходе хроматографического процесса, но п во время заполнения колонки. Как будет показано ниже, наиболее мягкие матрицы не выдерживают даже гидравлического напора, обусловленного высотой самой колонкп. Разность уровней в этом случае надо уменьшать с помощью защитной петлп на ее выходе. Для сефадексов от 0-10 до 0-75, сефароз СЬ-6В и СЬ-4В, биогелей Р-2 — Р-10, А-0,5т и А-1,5т, а также всех сефакрилов эта проблема не возникает, поскольку они обладают достаточной [c.128]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология