Нанесение образцов

После нанесения образцов белка в трубочки наслаивают электродный буфер, затем заливают буфер в верхний резервуар. При использовании щелочных буферных растворов в них добавляют раствор бромфенолового синего из расчета 0,5—1 мл красителя на 500 мл раствора, а в случае кислых буферов — метиленовый зеленый. Краситель маркирует движущийся пограничный слой во время электрофореза. [c.96]

Нанесение образца. Пробы анализируемых веществ (от 0,1 до 50 мкг) наносят на пластинку в неполярном летучем растворителе. Растворитель должен быть неполярным для того, чтобы уменьшить размывание пятна в точке нанесения образца. Он также должен быть низкокипящим, поскольку до начала проявления растворитель необходимо быстро испарить. Растворитель должен быть таким, чтобы растворенное вещество не выкристаллизовывалось из раствора до нанесения его на адсорбент. [c.134]

Рис. 16. Форма бумажной полосы, обеспечивающая лучшее разделение аминокислот (размеры даны в миллиметрах а—точки нанесения образца)

Нанесение образца и разделение нуклеотидов. На расстоянии 1,5- [c.186]

Рис. 27.4. Нанесение образца на пленку-подложку, расположенную на металлической сетке.

На пластинке с адсорбентом на расстоянии 1,5—2 см от ее края натянутой ниткой или проволокой проводят поперечную линию (линия старта) параллельно нижнему краю пластинки. На нее капилляром наносят капли растворов исследуемых веществ на расстоянии 1,5—2 см друг от друга. В одну точку можно наносить до 50 мкг вещества После нанесения образца на сорбент растворителю дают испариться и пластинку устанавливают в наклонном положении в кювете, на дно которой налит элюент слоем 1—1,5 см. Угол наклона может быть не более 20—30°, иначе сорбент осыпается с пластинки (рис. 22). Элюент должен касаться пластинки ниже [c.51]

Нанесение образца и проявление хроматограммы [c.367]

Рис. 428. Решетка для нанесения образцов на хроматограммы.

Рис. 435. Нанесение образцов на нисходящую хроматограмму.

Перед нанесением образца сначала отсасывают избыток буферного раствора через верх, остатку буферного раствора дают впитаться так, чтобы поверхность ионита оставалась влажной. Раствор образца приливают осторожно по стенке колонки. При нанесении образца используют насад- [c.553]

Чистота меченого соединения доказывается обнаружением только одного максимума в различных хроматографических системах. Величина площади, ограничиваемой кривой графика, соответствует величине активности соответствующих веществ. Непосредственно из графика можно определить соотношение активностей отдельных компонентов. Если известна общая активность нанесенного образца или применен стандарт, то можно определить и абсолютную активность отдельных компонентов. [c.675]

При полевой десорбции (или десорбции полем, ДП) раствор образца помещают на вольфрамовую проволоку диаметром 10 мкм (эмиттер), которую перед нанесением образца активируют для образования на ее поверхности микроигл. Эмиттер помещают в сильное электрическое поле, при этом происходит локальное усиление напряженности поля на кончиках игл (обычно до 10 В/м). [c.271]

А-восходящая хроматография Б-нисходящая хроматография (вид сбоку) В-хроматограмма с разделенными и окращенными веществами 1-фронт растворителя, 2-разделенные вещества, 3-место нанесения образца. [c.28]

Рекомендуется до нанесения образца предварительно промывать пластинки путем проявления растворителя, чтобы уменьшить загрязнения, которые могут быть затем выделены вместе с интересующим компонентом в процессе ступенчатого элюирования. Пластинки с силикагелем обычно предварительно промывают смесью хлороформ—метанол (1 1 по объему) или этиловым эфиром, содержащим 1 % аммиака или уксусной кислоты в зависимости от того, будет последующая подвижная фаза кислой или щелочной. Для этого предварительного проявления пластинки могут быть оставлены в баке на ночь. Затем пластинки сушат в печи или в вакуумном эксикаторе. [c.135]

Введение (нанесение) образца. Система Хроматографическое разделение [c.31]

Благодаря тому, что большинство операций в системе для тонкослойной хроматографии выполняется вне зависимости от продолжительности перерывов между операциями, удается универсально планировать сроки выполнения различных работ (таких, как нанесение образца, подготовка слоя сорбента, элюирование и обнаружение). [c.33]

В камеру для хроматографирования (рис. 65) наливают элюент (5 мл), помещают полоску фильтровальной бумаги размером 55x90 мм так, чтобы она прилегала к стенкам камеры, смачивают бумагу элюентом. В подготовленную таким образом камеру помещают хроматографическую пластинку с нанесенными образцами, как показано на рис. 65. Уровень элюента должен находиться на 4—5 мм ниже линии старта. Закрывают камеру крышкой. Как только фронт смачивания элюента достигнет верхней части пластинки, ее вынимают, высушивают на воздухе или в сушильном размеры пятен, значения Rj и ства пробы при нанесении. [c.63]

Рис. 48, Нанесение образца на пленку-подлож-ку, укрепленную на сетке-держателе

После нанесения образца колонку соединяют с верхним резервуаром, устанавливают необходимую скорость протекания элюирующего раствора путем изменения рабочего давления и начинают сбор фракций с помощью коллектора. Собирать фракции элюата необходимо с момента нанесения образца на колонку. Фракции можно собирать в пробирку по объему (с помощью сифоноу), по определенному количеству капель или через определенные прамежутки времени. [c.104]

Вытекающий из колонки буферный раствор собирают в пробирки порциями по 1—3 мл. Регистрацию объема элюата, прошедшего через колонку, начинают с момента нанесения образца на колонку. Содержание белка во фракциях определяют спектрофотометрически при 280 нм. Оптическую плотность растворов, содержащих рибонуклеазу, определяют при 230 нм, голубой декстран — при 650 нм, цитохром с — при 412 нм. После окончания анализа колонку промывают несколькими объемами буферного раствора. Строят профиль элюирования отдельных белковых фракций. Для этого вычерчивают график, на горизонтальной оси которого откладывают номера пробирок (фракций) или объем прошедшей через колонку жидкости, а на вертикальной оси — величины оптической плотности фракций. [c.108]

Образцы наносят на бумагу капилляром или микропипеткой, все время подсушивая зону нанесения. После нанесения образцов бумагу, начиная с краев, увлажняют буферным раствором. При этом следят за тем, чтобы бумага увлажнялась равномерно, а фронты буферного раствора, пропитывающего бумагу слева и справа от линии старта, сошлись бы точно на линии старта. Избыток буфера удаляют фильтровальной бумагой. Избыточное увлажнение бумаги ухудшает разделение Бумагу помещают в специальный полиэтиленовый пакет и кладут на охлажденную плиту прибора для электрофореза. Контакты электрофореграммы с электродными отсеками обеспечиваются с помощью бумажных фитилей, смоченных в буферном растворе. Сверху на электрофореграмму нai/лaдывaют подушку из поролона, которая специальной крышкой прижимает бумагу к охлаждающей плите и обеспечивает эффективное отведение тепла, выделяющегося при электрофорезе. Прибор закрывают крышкой из пластмассы и подключают к источнику тока. Электрофорез проводят в течение 1,5—2,5 ч при на- [c.138]

Сухую бумагу размечают так, что линия старта находится на расстоянии одной трети (20 см) от катода. Гидролизат, растворенный в смеси ацетон — 1 н. НС1 или в 50%-ном растворе пиридина, наносят на сухую бумагу в минимальном объеме (10—20 мкл). С обеих сторон от образца-гидролизата на расстоянии 2—3 см наносят образцы отдельных ДНС-аминокислот- свидетелей , а также 2 стандартные смеси ДНС-аминокислот. Смесь А состоит из ДНС-производных аспарагиновой кислоты, пролина, треонина, валина, фенилаланина, бис-ДНС-лизина, а-ДНС-лизина, в-ДНС-лизина и ДНС-ЫНг. Смесь Б состоит из ДНС-производных цистеиновой кислоты, глицина, глутаминовой кислоты, серина, аланина, лейцина, изолейцина, гистидина, аргинина, а-ДНС-тирозина, о- и б с-ДНС-тирозина. На бумагу необходимо наносить не менее 1—5 нмоль каждой из ДНС-аминокислот. После нанесения образцов бумагу увлажняют буфером (с. 138), помещают в прибор для средневольтного электрофореза с источником пи- [c.150]

Помещая пористый треугольник прессованного КВг, фирменное название которого уик-стик ( 1ск-511ск), в маленький стеклянный пузырек, закрытый таким образом, что испарение происходит только в середине пузырька, можно осуществить фильтрацию сорбента и нанесение образца на КВг в один прием. Сорбент, содержащий требуемый образец, соскребают с пластинки для тонкослойной хроматографии и переносят в стеклянный пузырек, содержащий уик-стик, с помощью воронки с тонким носиком, для того чтобы сорбент не садил- -ся на верхнюю половину прессованного [c.235]

Тоскольку емкость тонкого слоя адсорбента больше, чем емкость бумаги, в одну точку можно наносить до 1 мг образца. Нанесение образца можно также осуществить смывая вещество с кончика шпателя каплей растворителя. При нанесении слишком больших количеств вещества при проявлении могут образоваться хвосты . Для предотвращения этого явления достаточно размыть нанесенный в одну точку образец каплей растворителя. [c.367]

После нанесения образца растворителю дают испариться и переносят пластинку в камеру для проявления. В качестве таковой удобнее всего Использовать стеклянные аквариумы с пришлифованной верхней крышкой. Растворитель, применяемый для проявления хроматограммы, наливают на дно камеры. Пластинки с закрепленным слоем можно проявлять в слегка наклонном или вертикальном положении. В случае пластинок с незакреп- ленным слоем угол наклона не должен превышать 20°. Для более полного насыщения камеры парами растворителя сначала помещают пластинку в слегка наклоненную камеру так, чтобы растворитель не смачивал стартовую Полосу. Затем через несколько минут камеру возвращают в вертикальное положение и начинают проявление. Для равномерного и быстрого проявления помещаемых вертикально пластинок Шталь рекомендовал Использовать пересыщенные камеры. В таких камерах на боковые стенки Помещают полоски фильтровальной бумаги, которые быстро пропитываются Растворителями и насыщают ими пространство внутри камеры. [c.367]

Например, при определении 1% радиоактивных загрязнений при фоне 33 имп/мин на старт необходимо нанести смесь такой активности, чтобы измерительное устройство отметило 10 ООО имп/мин, если за предел чувствительности принять трехкратную величину фона. Если величина фона в 2 раза больше, то и активность нанесенного образца необходимо увеличить в 2 раза. Из этого видно, насколько важно предохранять измерительную аппаратуру от радиоактивного загрязнения и от искажаюш,его влияния источников с большой активностью. [c.673]

РИС. 2-34. Двумерная тонкослойная хроматография (в силикагеле) смесн флавинов, образовавшихся при облучении витамина рибофлавина. Появление светлых пятен на снимке обусловлено флуоресценцией соединений в ультрафиолетовом свете. Какое-то количество рибофлавина сохраняется в первоначальном виде (пятно, обозначенное RF). Стрелки указывают место нанесения образца. Для разделения в первом направлении использована смесь уксусная кислота/2-бутанон/метанол/бензол, во втором — смесь н-бутанол/уксусиая кислота/вода [147]. [c.160]

Образцы обычно наносятся в виде узкой полосы 3—5 мм шириной вдоль пластинки на расстоянии 2,5 см от ниж1него края. Нанесение образца в виде полосы удобно для нанесения больших количеств образца на слой, к тому же и разрешение при нанесении полос обычно превосходит разрешение, получаемое при нанесении пятен. Образец объемом до 10 мл можно нанести вручную, используя шприц или простую пипетку и линейку с нескошенным краем в качестве направляющей. [c.135]

Полоса должна быть как можно более прямой и узкой, должна отстоять по крайней мере на 1—3 см от каждого края пластинки во избежание краевых эффектов , из-за которых растворитель двигается быстрее или медленнее (обычно быстрее) по краям, чем в центре (14—18 см для пластинки 20X20 см). Для получения однородной полосы образца необходим тщательный контроль скорости движения и потока из пипетки. Часто для нанесения требуемого количества раствора операцию повторяют несколько раз. При этом, прежде чем нанести полосу следующий раз, очень важно полностью удалить растворитель. Если растворитель образца не полностью удален, то будут образовываться широкие полосы, неоднородные по концентрации в вертикальном направлении [15]. По этой же причине используемый метод нанесения полос не должен давать царапин или разрушать слой адсорбента. Царапины будут мешать правильному регулярному движению носителя, затрудняя последующее выделение компонента [15, 16]. Если при нанесении образца полоса становится чрезвычайно широкой (высокой), ее можно сделать более узкой с помощью предварительного проявления на расстоянии 1—2 см очень полярным растворителем. После этого растворитель тщательно выпаривают и проявление осуществляют с помощью подходящей хроматографической подвижной фазы [17]. Хонеггер [9] наносил образцы в У-образную канавку шириной 1—2 мм, высотой в половину слоя. В этом методе следует позаботиться, чтобы не удалить весь адсорбент, вплоть до стеклянной пластинки, поскольку это могло бы помешать движению подвижной фазы. Наносят также небольшие круглые пятна плотно друг к другу вдоль пластинки, для того чтобы получить полосу, однако эта операция трудоемка, занимает много времени и может приводить к неоднородности, которая будет вредить разделению компонентов с близкими значениями [c.136]

Описаны конструкции ряда аппликаторов для ПТСХ [18, 20], и можно купить пипетки и более или менее автоматизированные устройства для нанесения образца. На рис. 2.1 показан прибор фирмы Сата , с помощью которого можно наносить путем распрыскивания до 495 мкл образца из предварительно заряженного шприца емкостью 500 мкл в виде полосы 1—3 мм шириной и до 199 мм длиной. Движение поршня цилиндра и пластинки, а также поток газа—азота регулируется автоматически, что позволяет наносить предварительно заданный объем образца на полосу заданной длины. В аналитической ТСХ 2— [c.137]

Разделение продуктов гидролиза проводят хроматографически на бумаге [25]. Для того чтобы доказать селективность метода, бумагу пропитывают раствором кислого фосфорнокислого натрия. С этой целью готовят раствор 15,6 г (0,1 моля) NaH2P04 2H20 в 1 л воды. В мелкую чашку наливают 100 мл этого раствора и медленно пропитывают им бумагу (для каждого куска бумаги нужно брать по 100 мл свежего раствора, так как раствор быстро впитывается). Листы бумаги развешивают в линию для сушки на воздухе. Сухие листы режут на куски длиной 60 см и шириной 10 см. Базисную линию слегка наносят карандашом на уровне 8 см от верхней части длинного листа (необходимо учитывать направление потока, указанное на листах). С помощью пипетки по 5 мм раствора наносят на базовую линию (желательно удалить растворитель горячим воздухом сразу после нанесения образцов на бумагу для предотвращения неправильного распространения пятен) [c.251]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология