Проведение электрофореза

Рис. 90. Схема установки для проведения электрофореза

В данной работе описано проведение электрофореза в ячейке со скользящими пластинами, конструкция которой предложена Мароном (рис. 62). Этот прибор хорошо зарекомендовал себя при работе с мицеллярными растворами ПАВ. [c.175]

Приготовление агаровых пластинок и проведение электрофореза. [c.93]

Проведение электрофореза. Разделение можно проводить как в трубочках (с. 95), так и на пластинах для вертикального электрофореза (с. 97). После обработки ДСН к образцам добавляют сахарозу (до концентрации 10%) и в качестве лидирующего красителя — бромфеноловый синий (до концентрации 0,001%). Образцы исследуемых белков и белков-маркеров наносят на поверхность геля в объеме от 20 до 100 мкл (каждого или смеси нескольких образцов) и осторожно наслаивают электродный буфер. Нагрузка на гель определяется методом окраски гелей, а также способностью того или иного белка связывать используемый краситель. Как правило, при электрофорезе в трубочках удается обнаружить от 20 до 100 мкг белка, при электрофорезе в пластинке — от 4 до 15 мкг. В электродный буфер катодного отделения добавляют ДСН до концентрации 0,1%. Электрофоретическое разделение проводят при комнатной температуре и силе тока 8 мА на трубочку. При этом сначала устанавливают силу тока - [c.120]

Обработка электрофореграмм. Определяют расстояние, пройденное каждым белком от стартовой линии. Определение можно проводить визуально или с помощью денситометра при 550—600 нм. Строят калибровочный график, откладывая по оси абсцисс длину пути 1а, пройденного данным белком, а по оси ординат — логарифм его молекулярной массы. Определив длину пути, пройденного белком с неизвестной молекулярной массой 1х, пользуясь калибровочным графиком, определяют молекулярную массу исследуемого белка. При проведении электрофореза в трубочках часто трудно получить хорошо воспроизводимые результаты на разных трубках. В этом случае определяют не абсолютную, а относительную подвижность белков. Для этого определяют отношение длины пробега белковой зоны либо к общей длине геля, либо к длине пробега лидирующего красителя. После этого строят зависимость относительной подвижности белков от логарифма их молекулярной массы. [c.121]

Проведение электрофореза. После окончания полимеризации буфер с поверхности геля отсасывают и наносят образцы РНК, полученные одним из описанных выше методов, в объеме 0,01—0,05 мл. Раствор РНК разводят электродным буфером до концентрации 2 мг/мл и добавляют равный объем 40%-ного раствора сахарозы. В электродные камеры заливают трис-ацетатный буфер (pH 7,8), разведенный в 3 раза. Для предотвращения денатурационных изменений РНК разделение рекомендуется проводить при 4°С. [c.173]

Проведение электрофореза. Поверхность гелей промывают охлажденным электродным буфером и наносят по 10—50 мкг РНК в 0,02— [c.174]

Проведение электрофореза. Наносят в лунки геля смесь рестриктов ДНК фага X и анализируемый образец ДНК (0,05—5 мкг в зависимости от гомогенности образца). Электрофорез проводят в течение [c.175]

Рис. 478. Общая схема прибора для проведения электрофореза в агаре.

Примерная схема проведения электрофореза [c.144]

Проведение электрофореза и обработка электрофореграмм. Для создания герметичности в мостике, в прорезь в крышке вкладывают резиновую прокладку. Далее включают ток и проводят электрофорез в течение 15 мин — 6 ч током 1—16 ма при напряжении 400 в. [c.57]

ТЕХНИКА ПРОВЕДЕНИЯ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА [c.46]

Результаты, сходные с хроматографией на бумаге, при разделении моносахаридов дает метод электрофореза на бумаге . Хотя проведение электрофореза по сравнению с хроматографией требует более сложного -оборудования, разделение веществ с помощью электрофореза происходит быстрее. Известно много случаев успешного применения электрофореза для исследования смесей, которые с трудом поддаются разделению путем хроматографии на бумаге. Поэтому электрофорез является ценным методом анализа моносахаридов, дополняющим метод хроматографии на бумаге . [c.411]

Электрофорез особенно успешно применяется для обнаружения моносахаридов, в молекуле которых имеются основные (как в аминосахарах) или кислые (как в альдоновых, уроновых, сахарных кислотах, фосфатах и сульфатах сахаров) группировки (см., например, ). В тех случаях, когда необходимо разделить нейтральные моносахариды, используют их способность образовывать отрицательно заряженные комплексы с борной кислотой или ее солями , с молибдатами , вольфраматами, германа-тами и рядом других неорганических анионов разные анионы предъявляют часто различные требования к стереохимии моносахарида, необходимой для образования устойчивых комплексов. Естественно поэтому, что выбор комплексообразователя и условий проведения электрофореза, в первую очередь pH растворов, весьма существенно влияет на результат разделения (см. ). Для обнаружения зон веществ на электрофореграммах применяется большинство реагентов, используемых при хроматографии на бумаге. [c.411]

Электрофорез в растворе пока имеет весьма ограниченное применение, поскольку разделяемые по ходу электрофореза зоны, во-первых, подвергаются диффузионному размыванию, а во-вторых, что более существенно, размываются конвекционными токами, возникающими в результате незначительных неоднородностей температуры в системе, при ничтожных механических воздействиях и т.п. В настоящее время, по-видимому, начинается второе рождение этого метода в связи с возможностью проведения электрофореза в условиях невесомости на орбитальных космических станциях. [c.241]

Изложенный метод с точки зрения канонов классической аналитической химии противоестествен. Для установления структуры гомогенного полинуклеотида его превращают в чрезвычайно сложную смесь фрагментов. Но именно это дает возможность после проведения электрофореза с одного геля сразу прочесть структуру, состоящую из многих десятков, а в некоторых случаях даже из нескольких сотен звеньев. Это связано со спецификой объекта — биополимера, построенного из большого числа заранее изученных и не слишком разнообразных структурных элементов. [c.280]

Проведение электрофореза на бумаге. В состав прибора для электрофореза входят две кюветы с электродами, выпрямитель и стабилизатор тока (рис. 25). Каждая кювета разделена перегородкой на два отсека. В наружных отсеках помещаются угольные электроды, а во внутренний погружают концы бумажных полосок с исследуемым веществом. [c.170]

В настоящей работе используют последовательное проведение электрофореза и хроматографии для разделения аминокислот. [c.161]

Рис. 40. Расположение аминокислот при последовательном проведении электрофореза, а затем хроматографии

Анализ процесса электрофоретического выделения биополимеров на поддерживающей среде показывает, что этот процесс подобно и другим, используемым для разделения дисперсно неустойчивых систем, следует рассматривать как многостадийный и использовать для этого схему описания, показанную на рис. 3.4. На рис. 3.4 константы К, К2, Кз К4, Къ и Кь характеризуют соответственно скорость гомогенизации (разрушения) комплексов биополимеров К, скорость нового образования комплексов /С2, скорость электрофоретического разделения /Сз, скорость процессов, снижающих разрешающую способность электрофореза вследствие комплексо-образования Ка, скорость процессов, снижающих разрешающую способность электрофореза в результате диффузии Къ, скорость электрофоретического движения биополимеров в виде комплексов К%. При проведении электрофореза с использованием поддерживающей среды на величину /Сз может существенно влиять структура среды. [c.65]

На электроды 8 к 9 подают разность потенциалов, необходимую для проведения электрофореза в поддерживающей среде — носителе, в качестве которого можно использовать различные гели. После электрофореза обечайку 1, выполненную из отдельных секторов, разбирают и извлекают из аппарата электрофореграммы, которые подвергают обработке. [c.67]

Из сорбентов для проведения электрофореза в тонком слое наиболее часто применяют целлюлозу и силикагель. Однако работают также на ацетилцеллюлозе, кварцевом песке, кизельгуре, смеси тефлона с целлюлозой. Органические соединения разделяют на кизельгеле. [c.159]

Работа состоит из следующих операций подготовка прибора и проведение электрофореза, окрашивание электрофореграммы, экстрагированне и фотометрировапие. [c.150]

Проведение электрофореза. Закрывают крышку прибора и включают электрический ток. Электрофорез проводят при комнатной температуре. Хорошее разделение смеси аминокислот при напря- [c.150]

Проведение электрофореза. После того, как бумажные полосы полностью пропитаются буферным раствором, на отмечепнь е участки с помощью пипетки объемом 0,1 мл наносят пробы 0,01—0,02мл (1—2 мг белка) сыворотки. Камеру закрывают крышей и включают ток. Длительность электрофореза составляет 22—24 ч при напряжении 200— 300 В [c.91]

Подобно крахмальному и акриламидному агаровый гель является очень мягким носителем в отличие от электрофореза на бумаге при нем не происходит инактивации белков, что позволяет определять активность отдельных фракций бeлкОДJieпo peд твeннo в геле после проведения электрофореза. Приготовление агарового геля значительно проще, чем крахмального или полиакриламидного, продолжительность электрофореза составляет I—4 ч. [c.92]

Для проведения электрофореза можно использовать прибор фирмы Реанал (описание к прибору прилагается). Прибор (рис. 10) состоит из двух резервуаров для буферных растворов емкостью 1,5 л. [c.95]

Для проведения электрофореза на порошкообразных носителях было сконструировано большое число различных приборов. Одним из наиболее эффективных является аппарат Пората [52], в котором разделение веществ осуществляется на вертикальной термостатированной колонке, наполненной целлюлозой. После окончания процесса разделения вещества элюируют буфером и собирают при помощи автоматического коллектора фракций. [c.537]

С помощью электрофореза удалось осуществить немногочисленные разделения нуклеозидов, однако обычно этот метод используется для контроля за протеканием реакций. Метод особенно полезен для определения N-замещенных в ядре пирймидиновых нуклеозидов, но интервал pH, при которых исключаются какие-либо существенные миграции, довольно узок, что ограничивает возможности метода. Одно частное применение в области нуклеозидов— это проведение электрофореза рибонуклеозидов в боратном буфере при pH 10. В этих условиях образуется стабильный комплекс между боратом и ис-диольными группами, что приводит к миграции рибонуклеозидов к аноду [30]. [c.74]

Весьма перспективными методами разделения белков (как и определения ряда физико-химических свойств) оказались разные варианты метода изоэлектрического фокусировання-изотахофореза, основанные на проведении электрофореза в поддерживающих средах (на колонке или в тонком слое) с градиентом pH. Точное местоположение на колонке каждого белка из смеси определяется значением его изоэлектрической точки, т.е. состоянием, при котором суммарный электрический заряд белковой частицы при данном значении pH равен нулю. При использовании [c.31]

Еще большее число белковых фракций (свыше 30) можно получить методом иммуноэлектрофореза (рис. 17.1). Этот метод представляет собой своеобразную комбинацию электрофоретического и иммунологического методов анализа белков. Иными словами, термин иммуноэлектрофорез подразумевает проведение электрофореза и реакции преципитации в одной среде, т.е. непосредственно на гелевом блоке. При данном методе с помощью серологической реакции преципитации достигается значительное повышение аналитической чувстительности электрофоретического метода. [c.569]

Ледерер [990] исследовал миграцию многих неорганических ионов методом электрофореза на бумаге. При проведении электрофореза в течение 1 часа в 2 %-ном растворе (N114)2003 при напряжении 150 е найдены значения подвижности В/ (в мм) для следующих анионов борат (33), арсенат (61), фосфат (59), нитрат (83), хлорат (26), бромат (67), хлорид (80), иодат (50), роданид (64), сульфат (78), селенит (60), теллурат (38), пертехнетаТ (59), перренат (59). [c.182]

Пробы на лабильность или коллоидоустойчивость белков (цинковая, тимоловая, коагуляционная лента Вельтмана), обладая несомненными преимуществами в отношении быстроты и доступности, в свсем большинстве не дают точного представления о содержании отдельных белковых фракций. Тем не менее при отсутствии технических условий проведения электрофореза использование указанных тестов позволяет судить [c.190]

Для выяснения возможного механизма соэкстракции была изучена более детально экстракция кальция в присутствии скандия. Коэффициенты распределения кальция в присутствии скандия были определены прямым и обратным методами было показано, что результаты прямой и обратной экстракции практически совпадают. Исследовалось влияние концентрации скандия и оксихинолина на экстракцию кальция, были сняты спектры поглощения экстрактов и проведен электрофорез органических фаз. Полученные данные в какой-то мере объясняются предположением об экстракции смешанного соединения Са(ЗсОх4)2. [c.234]

Рис. 28. Схема камеры для получения алектро-форетических бумажных хроматограмм при одновременном проведении электрофореза и хроматографии

Электрофорез. Для проведения электрофореза используют прибор, описанный Маркхэмом и Смитом [8]. Он состоит из трех прямоугольных стеклянных сосудов А, Б w. В, имеющих следующие размеры А и Б—15ХЮХЮ см, В — 25,Х12,Х X 10 см (рис. 7). Сосуды А VI Б заполняют цитратным буфером pH 3,5, В — I4, который используется для охлаждения бумаги. [c.96]

Место нанесения В этом направлении смеси пептидол проведен электрофорез [c.149]

При таком двумерном разделении фракция сывороточных белков дает не менее 12 зон. Их расположение на пластинке указывает на то, что при проведении электрофореза эффект молекулярных сит фактически отсутствует. Аномальная миграция при электрофорезе наблюдается лишь в случае а-макроглобу-лина, что может быть обусловлено тормозящим влиянием сетки геля. Вергани и сотр. [25] модифицировали методику путем проведения электрофореза на мембранах из ацетата целлюлозы. Таким способом удалось избежать тормозящего влияния геля на г-макроглобулин и другие высокомолекулярные белки. [c.269]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология