Стабильность при ультрацентрифугировании

Аксиома, что механизм действия фермента не может быть полностью выяснен без знания его структуры. Ни для одного из кобаламин-зависимых ферментов не определена первичная структура, а определение трехмерной структуры кажется делом далекого будущего. Метилмалонил-СоА-мутаза в силу доступности, стабильности и относительно низкой молекулярной массы была выбрана в качестве объекта исследования [132]. Авторами был получен препарат фермента, гомогенный согласно данным ультрацентрифугирования и другим критериям. Средняя молекулярная масса 124 000 под действием гуанидинхлорида фермент диссоциирует на две субъединицы одинакового размера. Получен также кристаллический комплекс фермента с НО-СЫ, однако кристаллы не удовлетворяли требованиям кристаллографического анализа. [c.683]

Некоторые ферменты образуют с коферментами относительно стабильные комплексы. Их можно изучить, отделив фермент от раствора ультрацентрифугированием таким путем было установлено [18, 19], что одна молекула фермента, глицеральдегид-З-фосфат-дегидраза, взаимодействует с двумя молекулами кофермента [c.113]

Так как поведение веществ в коллоидном состоянии сильно отличается от их поведения в истинных растворах и, кроме того, соотнощение между различными коллоидными и ионными формами в растворе меняется с течением времени, для получения воспроизводимых данных при работе с радиоактивными индикаторами следует стремиться к максимальному снижению коллоидообразования. Этому способствует тщательная очистка растворов от примесей (например, путем ультрацентрифугирования, ультрафильтрации, диализа и т. п.) внесение в раствор весовых количеств того же соединения, содержащего стабильные атомы увеличение кислотности раствора, правильный выбор материала посуды и т. п. [c.144]

В эмульсиях нуйол/вода с концентрацией дисперсной фазы 0,5, содержащих 0,2% технического додецилсульфата натрия, понижалась скорость отслапвапия масла при уменьшении скорости ультрацентрифугирования от 56 100 до 10 589 об1мин. При последней скорости отслаивание масла не наблюдалось в течение 2,5 ч. Волд и Грут (1962) пришли к заключению, что коалесценция может не начинаться до тех пор, пока сила поля ультрацентрифугирования лишь едва превышает силу разрыва адсорбционных слоев эмульгатора. Ниже К1 М с увеличением концентрации додецилсульфата натрия стабильность возрастала, при ККМ — оставалась постоянно " (Рефельд, 1962). [c.130]

Волд и Грут (1964) показали аналогию между устойчивостью эмульсий к ультрацентрифугированию и стабильностью пен. В пенах тонкие пленки водной фазы разделяют полиэдрические газовые ячейки. Чем тоньше пленка, тем больше вероятность того, что газовые ячейки будут разрушаться. Поэтому верхние спои пен менее стабильны вследствие вытекания жидкости. [c.131]

Осн. характеристики П. соотношение мол. масс нуклеиновых к-т и белков (определяется хим. анализом или из значения плавучей плотности Н., измеряемой ультрацентрифугированием в градиентах плотности s l или s SOJ, стабильность в р-рах с разл. ионной силой, конформация и гиютность упаковки нуклеиновых к-т в Н., взаимная укладка макромолекул нуклеиновых к-т и белков. Все эти параметры варьируют для разных Н. в широких пределах. [c.304]

Ультрацентрифугированне - метод разделения и исследования частиц размером менее 100 нм (макромолекул органелл животных и растит, клеток, вирусов и др.) в поле центробежных сил. Позволяет разделять смеси частиц на фракции или индивидуальные компоненты, находить мол. массу и ММР полимеров, плотность их сольватов. Дает возможность оценивать форму и размеры макромолекул в р-ре (см. Дисперсионный анализ), влияние статич. давления на стабильность частиц, параметры взаимод. типа ассоциация - диссоциация макромолекул друг с другом или с молекулами низкомол. компонентов и ионами, влияние природы р-рителя на конформации макромолекул и др. [c.343]

С исйользованнем аналогичной методики [28] из бамбука выделены ЛУК [29 , содержащие фе] ольные кислоты. .Tua из фракций ЛУК содержала (%) 34,7 — нейтральных сахаров, 1,6 — уроновых кислот, 52,1 — лигнина, 6,1 — фенольных кислот, а другая — 67,9, 3,6, 22,3 и 1,1 соответственно. Углеводы в выделенных комплексах представлены линейными цеиями -(l—v4)-связанных остатков ксилозы, к каждому третьему звену которой ири-соединено одно звено 4-0-метил-Л-глюкуроновой кислоты и один или два остатка арабинофуранозы. Фенольные кислоты представлены и-кумаровой и феруловой кислотами. В ЛУК имеются как щелочно-стабильные, так и лабильные связи между лигнином и углеводами. Отмечаются поверхностно-активные свойства ЛУК, объяснимые содержанием остатков гидрофильных углеводов и гидрофобного лигнина в одной молекуле. По мнению авторов работы [29], использование фракционирования на гидрофобных гелях открывает новые возможности для разделения смеси ЛУК, однородных по отношению к электрофорезу и ультрацентрифугированию ио содержанию в них лигнинной части. [c.174]

Путем добавления силиката и смолы к золю кремнезема с малыми размерами частиц при 95° можно увеличить размер частиц от 15 до 150 и получить золи, которые стабильны при концентрации до 30% ЗЮг. Другой процесс получения золей кремнезема из силиката натрия посредством ионного обмена описан Трайлом [36], который нащел, что при пропускании разбавленного раствора силиката натрия, содержащего 3% 5102, через слой смолы, стабилизации его добавлением небольшого количества щелочи и последующем нагревании золя под давлением активный или ионный кремнезем превращается в неионную форму. Затем добавляют более концентрированный силикат натрия, раствор снова пропускают через слой смолы, снова подщелачивают и подвергают термообработке. Было обнаружено, что при непрерывном повторении процесса могут быть получены золи, содержащие от 20 до 23% кремнезема. Согласно определению, данному в этом патенте, ионный кремнезем включает не только кремнезем, способный ионизироваться в водных растворах, но также кремнезем, который имеет средний размер частиц меньше 40 м 1, определенный методом ультрацентрифугирования . Чтобы превратить ионный кремнезем в коллоидный, применяли температуру свыше 100°, соответствующую давлению пара от 4,2 до 14 при продолжительности нагревания 10—20 мин. В этом процессе получаются коллоидные частицы относительно больших размеров. [c.96]

Чтобы преодолеть эту трудность, необходимо создать градиент плотности. Это можно осуществить и в умеренно разбавленных солевых растворах, применяемых в аналитическом ультрацентрифугировании, если исследуемый материал первоначально находится в более разбавленном растворе. Когда слой с исследуемым материалом нанесен на поверхность основного объема растворителя, из-за быстрой диффузии малых молекул образуется пологий градиент плотности (рис. 11.16, Б). Перепад плотности от мениска до дна ячейки может составлять всего так что это почти не влияет на скорости седиментации. При центрифугировании градиент остается стабильным (и даже увеличивается), поскольку молекулы соли имеют ббльшую, чем у воды, плотность. Большие силы в ультрацентрифуге могут влиять даже на небольшие ионы. Однако градиенты в разбавленных солевых растворах недостаточно стабильны вне центрифуги. Бели вы захотели бы извлечь очищенный материал соответствующей зоны, вам пришлось бы отсасывать его, пока ротор еще крутится. Это возможно, но в большинстве случаев существует более простое решение. [c.250]

В обычном зональном препаративном ультрацентрифугировании стабильность наслоенной зоны с биополимерами обеспечивается предсозданным градиентом плотности. Наиболее широко для этого применяют сахарозу. [c.177]

Для ЭТОГО предложено почти полтора десятка методов. Белок признают гомогенным, если увеличение его количества в твердой фазе не сопровождается возрастанием содержания белка в растворе (рис. 14). Наличие одной белковой полосы при электрофорезе в полиакрила-мдцном геле, одного пика на выходной кривой (либо одной белковой зоны на пластинке) при хроматографировании или гельфильтрации, резкой границы пограничного слоя белок—растворитель при ультрацентрифугировании белка являются наиболее надежными показателями гомогенности белкового препарата. В большинстве случаев гомогенны кристаллические белки. Если кривая распределения белковых частиц по высоте при использовании метода свободной диффузии подчиняется теоретической кривой распределения Гаусса, белок гомогенен. Достижение в процессе очистки белка стабильного содержания свободных Н8-групп или содержания радиоактивной метки (при работе с меченым белком), равно как и постоянного уровня биологической (ф мен-тативной, гормональной и т. п.) активности, свидетельствует в пользу гомогенности белка. Выявление единственной N-кoнцeвoй и единственной С-кон-цевой аминокислоты при анализе белкового препарата также является признаком гомогенности выделенного белка. [c.34]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология