Белки стабильность

В некоторых случаях денатурацию вызывает весьма незначительное изменение pH среды. Одни белки стабильны при кислых значениях pH (например, пепсин), другие — при щелочных (щелочные протеиназы), третьи — при нейтральных. Часто для денатурации белков используют 8М раствор мочевины или 6М раствор гидрохлорида гуанидина. [c.104]

Для осуществления эффективной экспрессии чужеродных генов у микроорганизмов существуют три подхода. Наиболее простой вариант — внедрение (см. рис. 5.1) чужеродного гена внутрь структурного гена. В этом случае бактериальная или дрожжевая клетка использует регуляторные элементы собственного гена. Единственное условие такого способа конструировании — встройка чужеродного гена должна быть осуществлена в правильной рамке считывания. Недостатком этого метода является производство клеткой химерного белка, из которого нужный продукт получается путем химического расщепления. Метод применен для получения ряда продуктов, особенно небольших пептидов, таких, как соматостатин. Небольшие пептиды часто являются нестабильными продуктами из-за активного протеолиза. Важно, что в составе химерных белков стабильность пептидов повышается. [c.100]

Глутаровый альдегид можно использовать в качестве сшивающего реагента для полимеризации антигенов и антител. Сшитые белки становятся нерастворимыми вблизи своей изоэлектрической точки (pH 4,5—7,5). Нерастворимые перекрестно-сшитые белки стабильны в растворах мочевины и додецилсульфата натрия и могут быть использованы как иммуносорбенты для очистки соответствующих антигенов или антител с помощью колоночной или бесколоночной хроматографии. Метод не требует больших затрат времени, воспроизводим и может быть использован для всех белков, содержащих свободные а- или е-аминогруппы (Avrameas, Ternyn k, 1969). [c.73]

Итак, сохранение вида требует, чтобы половые клетки организмов были защищены от быстрых генетических изменений, но сохранение каждого конкретного индивидуума требует такой же защиты и для всех прочих клеток многоклеточного организма (соматических клеток). Нуклеотидные замены в соматических клетках могут способствовать естественному отбору в пользу тех или иных лучше приспособленных клеток и привести к их неконтролируемому размножению, т. е. развитию рака, на долю которого в Западном полушарии приходится около 20% всех преждевременных смертей. Убедительные данные подтверждают, что гибель людей в данном случае вызвана главным образом накоплением изменений в нуклеотидных последовательностях ДНК соматических клеток. Десятикратное повышение частоты мутаций привело бы, вероятно, к катастрофическому росту раковых заболеваний вследствие того, что чаще возникали бы различные вариантные формы соматических клеток. Таким образом и сохранение того или иного вида с его 60000 белков (стабильность половых клеток), и предотвращение рака, возникающего как следствие мутаций в соматических клетках (стабильность соматических клеток), зависят у эукариот от чрезвычайно высокой надежности сохранения нуклеотидных последовательностей ДНК. [c.279]

Пептидные связи синтезируются строго контролируемым путем на рибосомах. Они могут менять свою конфигурацию при довольно низких затратах свободной энергии. Это помогает организму быстро приспосабливаться к флуктуациям окружающей среды-)Кесткость пептидной связи вносит существенный вклад в стабильность белка. Стабильность полипептидной цепи увеличивается в результате взаимодействий атомов основной цепи, а также атомов основной и боковых цепей. Геометрические условия удовлетворительно описываются с помощью карт потенциальной энергии, которые могут также учитывать гибкость основной цепи. транс-Ие.п-тидная связь имеет явные преимущества перед ц с-связью, поскольку не вносит столь серьезных структурных ограничений, как цис-связь. [c.37]

Иммобилизованные белки стабильнее нативных по отношению к инактивации в потоке. Причина заключается в том, что носитель механически защищает молекулы ферментов от деформаций в потоке, выполняя роль своеобразного демпфера. [c.127]

Первичная структура), а также взаимодействиями с др. фрагментами цепи в рамках третичной структуры белка. Стабильность В. с. зависит от обра.зования кооперативной системы водородных свя.зей и от стерич. факторов. Упорядоченные виды В. с.— а-снираль, (3-структура, (3-изгиб, способ укладки полипептидной цепи в коллагене и др. [c.109]

Также как синтетические полипептиды, а-белки могут быть переведены в р-форму. Это достигается растяжением, иногда в специальных условиях. Рентгенограммы р-белков показывают, что их молекулярные цепи принимают при растяжении вытянутую конфигурацию. Водородные связи -в р-белках также, как в синтетических/полипептидах, направлены перпендикулярно оси волокна. р-Форма белков нестабильна и после удаления растягивающего усилия, как правило, вновь восстанавливается а-спиральная конфигурация цепей. Только один белок,— фиброин шелка в естественном состоянии существует в виде р-формы. Образование Р- Конфигурации цепей в фиброине шелка происходит в тот момент, когда шелковичный червь прядет шелковую нить. Образующиеся при этом большие силы давления развертывают молекулярные цепи белка. Стабильность образовавшейся р-конфигурации в нити фиброина шелка объясняется тем, что на отдельных фрагментах молекул этого белка скапливаются остатки с короткими боиовыми цепями — глицин, аланин, серин. Отталкивание боковых групп этих остатков во много раз меньше отталкивания больших боковых цепей других аминокислот. Поэтому Р-структуры, возникающие на отдельных фрагментах цепей фиброина шелка (в местах скоплений остатков с короткими боковым и дшями), оказываются относительно стабильными. Это подтверждается изучением р-структур синтетических полипептидов с короткими боковыми цепями, таких, как поли-(глицил- аланин). [c.543]

Так как в большинстве случаев белки стабильны в анионной форме (т. е. при pH > ИЭТ), для разделения их используются анионообменные сефадексы. Элюирующие буферные растворы — см. раздел 53. Ионообменные сефадексы регенерируют 0,1—0,5 н. растворами соляной кислоты (для катионитов) нли NaOH (для анионитов) или 0,5—1 М растворами солей. О применении ионообменных сефадексов см. в разделе 59. [c.163]

Изучая рентгеноскопически ряд фибриллярных белков, Эстбюри установил наличие двух основных типов рентгенограмм, соответствующих двум группам белков. Рентгенограммы первого рода соответствуют белкам, которые содержат в своем составе все или большинство известных аминокислот. Эти белки характеризуются наличием а-спиральной конформации, являющейся преобладающей пространственной формой фибриллярных белков. К этой группе белков принадлежат миозин, тропо-миозин, фибриноген, белки жгутиков бактерий, а-кератины и белки эпидермиса. Как показали многочисленные физико-химические исследования, а-спиральиая конформация этих белков стабильна в достаточно широком диапазоне температур и pH среды [c.152]

Слабые нековалентные связи определяют, как различные участки одной молекулы располагаются друг относительно друга, кроме того, они определяют, как такая макромолекула взаимодействует с другими молекулами. Однако, как можно видеть в верхней части схемы 3-1, атомы ведут себя как твердые шары определенного радиуса ( вандерваальсов радиус ). Невозможность взаимного перекрывания двух атомов ограничивает число пространственных расположений атомов (или конформаций), которые возможны для каждой полипептидной цепи. В принципе длинная подвижная цепь, такая, как молекула белка, может складываться огромным числом способов, при которых каждая кон-формапия будет иметь разный набор слабых взаимодействий между цепями. Однако на деле большинство клеточных белков стабильно складывается только одним способом в ходе эволюции была отобрана такая последовательность аминокислотных субъединиц, одна конформация которой способна образовывать значительно более благоприятные взаимодействия между цепями, чем любая другая. [c.115]

Концентрaщiя водородных ионов может влиять на действие ферментов и косвенным путем, поскольку многие ферменты, как и вообще белки, стабильны только в ограниченном интервале pH,, наиболее часто при нейтральных pH. В то же время известны исключения наиболее необычные свойства проявляет пепсин, который стабилен в кислой среде и быстро инактивируется в нейтральных и щелочных растворах. [c.261]

Для ЭТОГО предложено почти полтора десятка методов. Белок признают гомогенным, если увеличение его количества в твердой фазе не сопровождается возрастанием содержания белка в растворе (рис. 14). Наличие одной белковой полосы при электрофорезе в полиакрила-мдцном геле, одного пика на выходной кривой (либо одной белковой зоны на пластинке) при хроматографировании или гельфильтрации, резкой границы пограничного слоя белок—растворитель при ультрацентрифугировании белка являются наиболее надежными показателями гомогенности белкового препарата. В большинстве случаев гомогенны кристаллические белки. Если кривая распределения белковых частиц по высоте при использовании метода свободной диффузии подчиняется теоретической кривой распределения Гаусса, белок гомогенен. Достижение в процессе очистки белка стабильного содержания свободных Н8-групп или содержания радиоактивной метки (при работе с меченым белком), равно как и постоянного уровня биологической (ф мен-тативной, гормональной и т. п.) активности, свидетельствует в пользу гомогенности белка. Выявление единственной N-кoнцeвoй и единственной С-кон-цевой аминокислоты при анализе белкового препарата также является признаком гомогенности выделенного белка. [c.34]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология