Рибосома плотность

Оба типа клеток имеют рибосомы, причем рибосомы эукариот (мол. масса 4,2 10 ) значительно большего размера (23 нм в диаметре), чем рибосомы прокариот (мол. масса 2,5 Ю , 8 нм в диаметре). Обычно рибосомы характеризуют по скорости их седиментации в центрифужном поле, которая количественно выражается константой седиментации s в единицах Сведберга S (см. главу 1). Величина s зависит не только от размера частиц, но и от формы и плотности, так что она непропорциональна размеру. Число рибосом в микробной клетке равно примерно 10 , а эукариот —около 101 [c.513]

Как было указано, стрептомицины нарушают синтез белка на уровне 30S рибосом. Если эти последние диссоциировать в градиенте плотности хлористого цезия на кор-частицы (16S РНК + 15 белков) и на отделяющиеся белки (6 белков), то при реассоциации 30S рибосом доказано, что чувствительность к антибиотикам определяется кор-частицами. Каждая рибосома может связывать 1...2 молекулы антибиотика в присутствии ионов магния и уридин- или цитозин-содержащих полинуклеотидов. При этом отмечается не только ошибочное считывание [c.189]

После импульсной метки и центрифугирования в градиенте плотности были получены, как и предполагалось, три пика, поглощающие ультрафиолет при 260 ммк. Пики эти соответствовали 233- и 168-рибосомам и 43-5-РНК и не содержали метки. Пик радиоактивности соответствует фракции, содержащей молекулы с коэффициентом седиментации между 48 и 168 (фиг. 83). Однако количество вещества в этой фракции слишком мало, чтобы его можно было определять путем измерения оптической плотности этот пик соответствует т-РНК. [c.242]

В этом варианте препарат в виде тонкого слоя помещают в пробирку поверх среды, плотность которой обычно меньше плотности выделяемых частиц, и затем подвергают центрифугированию. Под действием приложенной центробежной силы частицы движутся в виде отдельной полосы через градиент, который служит лишь для того, чтобы предотвратить размывание зоны, или полосы в результате конвекции. Этот исключительно полезный метод, очень широко применяемый как для аналитических, так и для препаративных целей, используется для выделения и характеристики частиц всех размеров, начиная от таких крупных объектов, как вирусы, ядра и митохондрии, и кончая рибосомами, а также чистыми белками и нуклеиновыми кислотами. [c.250]

Ретикулоциты инкубировали с меченой аминокислотой в течение 45 сек, после чего их лизи-ровали. Полисомы отделяли путем центрифугирования в градиенте плотности сахарозы. Затем определяли по всему градиенту количество рибосом и связанной с рибосомами меченой аминокислоты (растущие полипептидные цепи). Обозначения кривых I — радиоактивность II — оптическая плотность [28]. [c.26]

То, что именно полисомы участвуют в белковом синтезе, может быть показано методом центрифугирования в градиенте плотности сахарозы. Для этой цели клетки в течение короткого промежутка времени обрабатывают меченой аминокислотой, после чего из этих клеток выделяют рибосомы. Затем эти рибосомы разделяют путем центрифугирования в градиенте плотно- [c.26]

Вообще говоря, нас должно было бы удивить неравномерное, кажущееся совершенно случайным распределение рибосом в клетке. Конечно, часто некоторые, вернее многие, из них объединены в полисомы, однако и полисомы тоже весьма беспорядочно распределены на опорной пленке. Неужели основное вещество клетки, цитоплазма, представляет собой прос-то-напросто бесструктурную массу различной плотности, в которую вкраплены рибосомы Как же в таком случае быть с укоренившимся представлением, будто клетка — это система, отличающаяся исключительно высокой организацией [c.196]

Собственно говоря, после наших скептических замечаний по поводу незначительности различий в плотности клеточных компонентов тот факт, что рибосомы так явственно отличаются от фона и дают такой сильный контраст, кажется поразительным. Неужели они действительно обладают намного большей плотностью, чем их окружение, чем, скажем, мембраны эндоплазматической сети, к которым они прикреплены [c.201]

Общая картина, найденная после разделения, изображена на рис. 150. Измерение оптической плотности, или суммарный метод определения РНК, обнаруживает частицы (рибосомы) с константами седиментации 50 8 и 30 8 и небольшое количество с 70 8, что вполне нормально для рибосомного препарата при низкой концентрации Что [c.469]

Для того чтобы отделить рибосомы от полисом, был использован метод центрифугирования в градиенте плотности сахарозы. Этот метод позволяет разделять материалы, осаждающиеся с разными скоростями в сильном гравитационном поле, и заключается в следующем. Пластмассовую центрифужную пробирку наполняют раствором сахара, концентрация которого плавно меняется, например от 30% на дне пробирки до 15% в верхнем слое. Для получения градиента медленно наполняют пробирку из двух сосудов, содержащих 15-процентный и 30-процентный раствор сахарозы. По мере наполнения количество приливаемого 30-процентного раствора убавляют, а 15-процентного — прибавляют. Испытуемый материал, состоящий из молекул различной величины, осторожно наслаивается поверх раствора сахара, после чего пробирку помещают в ротор центрифуги. Сахарозный градиент сохраняется во время центрифугирования и после него за счет силы тяжести. Во время центрифугирования молекулы разного размера проходят неодинаковое расстояние и остаются разделенными и после центрифугирования. Дно пластмассовой пробирки можно проколоть и собрать отдельные фракции, а затем их проанализировать. [c.310]

А. Плотность тяжелых и легких бактериальных рибосом. Клетки . соЦ, выращенные на меченной N , С Р -среде, смешивают с 50-кратным избытком клеток, выращенных на обычном питательном бульоне. Из этой смешанной популяции бактерий рибосомы экстрагируют, растирая клетки с окисью алюминия, а затем очищают дифференциальным центрифугированием. Затем рибосомы центрифугируют в градиенте плотности хлористого цезия. Каждый вид рибосом дает два максимума — а и Ь. Максимум Ь радиоактивности меченых, тяжелых рибосом находится непосредственно под максимумом а поглощения немеченых, легких рибосом. [c.392]

Результаты этого опыта подтвердили, что большая часть постинфекционной РНК связана с рибосомами. Однако, как видно из фиг. 196, измерение плотности рибосом, несущих постинфекционную РНК, меченную Р, показало, что эти рибосомы содержат тяжелые, приобретенные до заражения изотопы и С, а не легкие N и Иными словами, этот опыт показал, что образовавшаяся под влиянием фага постинфекционная РНК включается в старые рибосомы, уже содержавшиеся в клетке до ее заражения фагом Т4. В зараженной клетке совсем не удается обнаружить легких рибосом. Следовательно, заражение Т-четными фагами действительно прекращает образование новых рибосом. [c.392]

Еще один способ получения информации о клетках связан с химическим исследованием выделенных клеточных органелл. Если осторожно растереть клеточную массу в соответствующей среде, то по крайней мере часть клеточных органелл можно выделить в интактном виде. Органеллы, имеющие различную плотность, разделяют центрифугированием при постоянно возрастающем числе оборотов (рис. 2.1). Например, такие тяжелые частицы, как ядра и хлоропласты, осаждаются при сравнительно небольших скоростях, соответствующих центробежным силам, в 1000—3000 раз превышающим силу земного притяжения (1000—3000 д) митохондрии переходят в осадок примерна при 10 000 д, рибосомы — приблизительно при 30 000 д, а для [c.22]

На электронных микрофотографиях в ядрышках нередко видны две зоны центральная — гомогенная и периферическая — построенная из гранулированных нитей. Эти гранулы напоминают рибосомы, но отличаются от них меньшей плотностью и величиной. [c.69]

Интерпретация карт электронной плотности молекулы значительно облегчается при знании аминокислотной последовательности. Однако далеко не каждый Б. удается получить в кристаллич. состоянии. Необходимое условие кристаллизации-сохранение нативной конформации, к-рая часто реализуется лишь в условиях, приближенных к физиологическим. В частности. Б., входящие в состав нуклео-протеидных комплексов (рибосома, вирусы хорошо кристаллизуются только в составе таких комплексоа С помощью обычного рентгеновского излучения проводить анализ таких гигантских образований сложно. В этих случаях используют синхротронное рентгеновское излучение, интенсивность к-рого может быть на два порядка выше. Вследствие этого резко сокращается время эксперимента по регистрации дифракц. отражений, а также снижается кол-во исследуемого в-ва. Ряд мембранных Б. кристаллизуется в условиях нативного липидного окружения с образованием т. наз. двухмерных кристаллов, представляющих из себя регулярно упакованные молекулы Б. в бислойной липидной мембране. При изучении двухмерных кристаллов используют электронную микроскопию и электронографию. [c.252]

Соотношение масс РНК белок в них около 2 1 соответственно, парциальный удельный объем 70S рибосом около 0,60 см /г, а плавучая плотность в s l 1,64 г/см . РНК в рибосомах присутствует главным образом в виде ее Mg2+-, и, по-видимому, частично Са2+-соли Mg составляет до 2% сухой массы рибосом. Кроме того, в варьирующих количествах (до 2,5% сухой массы) могут присутствовать также органические катионы, такие как спермин, спермидин, кадаверин и путресцин. Количество связанной воды в 70S рибосомах относительно невелико и составляет около 1 г/г, т. е. рибосомы в водной среде суть довольно компактные, не разбухшие частицы. [c.52]

ЖИВОТНЫХ, Грибы, растения и простейших, содержит несколько более крупные 80S рибосомы. Их молекулярная масса составляет около 4 10 дальтон, а линейные размеры от 25 до 30 нм (в лиофильно-высушенном состоянии). Они также включают только два типа биополимеров — РНК и белок, но содержание белка в них существенно больше, чем в прокариотических рибосомах соотношение масс РНК белок около 1 1, парциальный удельный объем около 0,65 смз/г и плавучая плотность в s l 1,55—1,59 г/смз. Важно отметить, что абсолютное количество как РНК, так и белка (а не только пропорция белка) в 80S рибосомах существенно больше, чем в 70S рибосомах. Рибосомная РНК 80S рибосом также связана, в основном, с такими двувалентными катионами, как Mg2+ и Са2+, а также с небольшим количеством полиаминов и диаминов (спермин, спермидин, путресцин). [c.53]

Фактор элонгации Tu GDP по форме напоминает головастика. Удалось также закристаллизовать фактор элонгации Tu GDP, который образует с рибосомой и тРНК тройной комплекс [717]. Его структура определена с разрешением 6 A [718]. Форма молекулы заметно отличается от формы обычных глобулярных белков. Это — головастик , состоящий из глобулярного домена ( головы ) и удлиненного тонкого домена ( хвоста ), разделенных расщелиной с меньшей плотностью. Голова содержит несколько а-спиралей и, по-ви-димому, имеет довольно жесткую структуру. Хвост, напротив, более лабилен и, по-видимому, представляет собой -структуру. Интересно, что голова и хвост имеют и второе сочленение, так что в результате возникает некая циклическая структура. Вероятно, тРНК присоединяется вблизи отверстия этого цикла в большом желобе между доменами. Хорошо видно относительное смещение долюнов во время стадии элонгации на рибосоме. Деление на подвижный и жесткий домены обнаружено также для нуклеопротеидов L7/L12 [716] и 1ас-репрессора [719]. В L7/L12 подвижный домен находится со стороны N-конца. [c.271]

А. Разделение путем аналитического ультрацентрифугирования (с использованием шлирен-оптики). Пик 1 соответствует 808-рибосомаи, пики г, 3, 4 а 5 соответствуют частицам, содержащим 2 рибосомы (коэффициент седиментации 1103), 3 рибосомы, 4 и 5 рибосом соответственно [1]. В. Отделение рибосом от полисом миксомицета путем центрифугирования в градиенте плотности сахарозы. Ник справа соответствует полисомам, в состав которых входит от 2 до 20 и более рибосом [26]. [c.26]

При описанном выше ультрацентрифугировании пики, наблюдаемые при помощи шлирен-системы, отвечают границам между раствором и растворителем. Первые, быстрые пики отвечают компонентам, движущимся в окружении более медленных компонентов (фиг. 8). В биохимических смесях некоторые из этих медленных компонентов (например, рибосомы при анализе бактериального экстракта) создают большую вязкость. Измеряемые коэффициенты седиментации могут при этом очень сильно отличаться от приведенного к стандартным условиям значения Поэтому полученные при помощи скоростной седиментации значения s не всегда можно непосредственно использовать при планировании и анализе данных препаративного зонального центрифугирования в градиентах плотности. При зональном ультрацентрифугировании анализируемая смесь наносится в виде слоя на раствор с увеличивающейся по направлению ко дну плотностью (что предотвращает конвекционное перемешивание) и различные компоненты седиментируют в градиенте плотности в виде отдельных зон. Для наслоения смеси можно использовать специальную аналитическую ячейку, в которой техника наслоения принципиально не отличается от обычного препаративного наслоения на градиент. Одна из таких ячеек (Be kman Instruments In .) приведена на фиг. 15. Преимущества применения такой ячейки, как отмечают Виноград и Брунер [11], состоят в том, что она требует меньше исследуемого материала, анализируемые компоненты в ней пространственно разобщены, медленные примеси отстают от быстрее движущихся зон и седиментацию последних можно осуществлять в любом растворителе, не прибегая к предварительному диализу. Растворитель должен быть более плотным по сравнению с [c.67]

Ме лодин.а. Рибосомы, полученные в результате растирания клеток с окисью алюминия и центрифугирования, суспендируют в 0,9 мл ТМЛ(-4)-буфера и каждую 0,3 миллилитровую аликвотную часть наслаивают на поверхность 4,6 мл линейного градиента плотности сахарозы (10—30%), приготовленного в ТМА(-4)-буфере. Пробирки помещают в ротор SW -39 и центрифугируют 4 ч при 36 ООО об/мтт и [c.245]

С. Этот процесс проводят точно так же, как было описано выше в случае центрифугирования тРНК в градиенте плотности сахарозы. После центрифугирования градиент фракционируют через дно пробирки, по 3 капли в каждой фракции. Нз каждой фрак гяи берут 5 кл для определения радиоактивности. Фракции, соответствующие 50 5 - и 30S -рибосомам, соответственно объединяют, а фракции между двумя главными пика чпт, содержащие смесь 50 5- и 30S -субъединиц, собирают отдельно и в случае необходимости снова црнтрифугируют. [c.245]

Этот метод, изобретенный в середине 50-х годов, чрезвычайно облегчил исследование структуры и функции субклеточных структур вообще и рибосом в частности, С помощью этого метода, схематически показанного на фиг. 195, можно разделить на фракции смесь веществ, седименти-рующих с разной скоростью. На фиг. 195, Б п В показаны кривые седиментации двух клеточных экстрактов в градиенте плотности сахарозы. Как видно из фиг. 195, Б, к концу 15-секундного периода метки более половины атомов находится в составе растущих полипептидных цепей, которые седиментируют вместе с 705-рибосомами. Остальная же часть метки находится в уже завершенных свободных белковых молекулах, которые седиментируют гораздо медленней. Из фиг. 195, В видно, что за 120 с после добавления S0 2 и прекращения включения атомов большая часть метки ранее находившейся в растущих полипептидных цепях, связанных с рибосомами, перешла в медленно седиментирующую фракцию, состоящую из завершенных молекул белка. [c.388]

В качестве радиоактивной метки. Другая культура была выращена на обычной легкой среде, содержащей HjO, и В качестве радиоактивной метки в ней присутствовал С-урацил. Видно, что меченные С рибосомы, выделенные из легкой культуры, дают три пика с характерными константами седиментации 70S, 50S и 30S, соответствующими нормальным легким рибосомам и некоторому количеству диссоциированных 50S- и 30S- yбъeдиниц. Меченные рибосомы, выделенные из тяжелой культуры, дают три более быстрых максимума с константами седиментации 86S, 61S и 38S, соответствующих тяжелым 70S-pn6o oMaM и диссоциированным тяжелым 50S- и 30S- yбъeдиницaм. На фиг. 214, Б представлена аналогичная кривая седиментации в градиенте плотности сахарозы еще одной смеси рибосом, выделенных из двух культур Е. соИ. Одну из этих культур выращивали, как и ранее, в тяжелой среде с Н-урацилом, а затем переносили на нерадиоактивную легкую среду, где она росла в течение еще 3,5 генерации, после чего из нее выделяли рибосомы. Другая культура все время росла на тяжелой среде с С-урацилом. Видно, что после 3,5 генерации в легкой среде меченные Н тяжелые 508-и 308-субъединицы рибосом по-прежнему седиментируют с той же высокой скоростью, что и меченные тяжелые 50S- и 305-субъединицы тяжелой культуры, не подвергавшейся переносу. Но меченные Н, ранее бывшие тяжелыми 705-рибосомы той культуры, которую переносили с одной среды на другую, седиментируют теперь со скоростью, лежащей примерно посередине между скоростями седиментации полностью тяжелых и полностью легких 708-рибосом. Эти результаты показывают, что, в то время как тяжелые 50S- и 305-рибосомные субъединицы остаются неизменными после переноса бактерии в легкую среду, большинство из них за это время соединилось с легкими , позднее синтезированными партнерами и образовало наполовину тяжелые , наполовину легкие гибридные 708-рибосомы. [c.430]

Рибосомы, содержащие большое количество РНК, придают шероховатым микросомам большую плотность по сравнению с гладкими. Поэтому гладкие и шероховатые микросомы можно отделить друг от друга путем седиментации их смеси в градиенте плотности сахарозы (рис. 8-40). Если сравнить шероховатые и гладкие микросомы печени по таким параметрам как ферментативная активность или нолипептидный состав, они окажутся чрезвычайно схожими (но не идентичными). Отсюда следует, что большинство компонегттов мембраны ЭР может свободно перемещаться между ее гладкими и шероховатыми областями, чего и следовало ожидать, принимая во внимание текучесть и непрерывность мембранной системы. [c.42]

Описанные свойства рибосом прослежены главным образом в клетках, не имеющих истинного ядра (прокариотических), например в бактерии Е. oli, а также в таких эукариотических клетках, как клетки поджелудочной железы и печени. Общие выводы, по-видимому, приложимы и к нервным клеткам, но имеются также важные отличия. В нервных клетках близ ядра образуется характерное скопление шероховатого ЭР, называемое субстанцией Ниссля. Очевидно, оно служит местом интенсивного синтеза белка. В крупных нейронах субстанция Ниссля содержится в изобилии и отличается плотностью в мелких она может состоять всего лишь из рассеянных частиц. Внимательное рассмотрение показывает, что многие рибосомы в субстанции Ниссля не прикреплены к мембране ЭР, а лежат между мембранами в виде полирибосом. Высказано предположение, что эти скопления участвуют в синтезе сложных белков, специфичных для нервных клеток, возможно, разных для разных типов этих клеток. Некоторая часть белка, синтезируемая в субстанции Ниссля, возможно, секретируется в форме медиаторных веществ. Но полагают также, что большая часть белков, вероятно, служит для поддержания структуры и функции больших ветвящихся отростков нейрона. [c.86]

Гиалоплазма (основная плазма, матрикс цитоплазмы) — основная внутренняя среда клетки, она занимает все пространство между мембранами эндоплазматической сети, органелла-ми, всевозможными включениями и другими структурами. Гиалоплазма (от греч. Ьуа1о8 — стекло) под электронным микроскопом имеет вид гомогенной или мелкозернистой массы с низкой электронной плотностью, В ней во взвешенном состоянии находятся рибосомы, микротельца, микротрубочки и различные продукты метаболизма. [c.26]

Компоненты белоксинтезирующего аппарата (рибосомы, белковые факторы трансляции, тРНК и аминоацил-тРНК-синтетазы) вносят в систему в виде фракции, получаемой путем центрифугирования гомогената клеток Кребс-2 при 30 000 g (фракция 8зо). Концентрация фракции Sao в системе составляет 10—20 единиц оптической плотности при 260 нм на 1 мл (Ааво/мл). [c.358]

При использовании концентрированных растворов солей для создания градиентов плотности необходимо учитывать их активность в качестве диссоциирующих агентов. Это весьма существенно при центрифугировании белков (которые могут денатурировать и выпадать в осадок), но особенно пагубно влияет на нуклеопротеиды (например, рибосомы), которые диссоциируют. То же самое относится к мультиферментам и другим белковым комплексам, состоящим из нековалентно связанных субъединиц. Нуклеопротеиды и белковые комплексы можно анализировать центрифугированием в солевых градиентах только после их предварительной сщивки формальдегидом или глутаровым альдегидом, однако это, естественно, несколько изменяет их седиментационные характеристики и лишает эти вещества биологической активности. [c.249]

Из очищенных ядер РНП-частицы экстрагировали при 37 0,01 М Трис-H l (pH 8) с 0,1 М Na l и 1 мМ АТФ (АТФ способствует выходу частиц из ядра). Их собирали центрифугированием при 60 000 об/мик в течение 4 ч и предварительно очищали зонально-скоростным центрифугированием в градиенте сахарозы, собирая фракцию с константой седиментации около 40S. Эту фракцию переносили в полиалломерные пробирки ротора SW 41, фиксировали добавлением глутарового альдегида до 6% в течение 1 ч при 0°, а затем смешивали с концентрированным водным раствором s l с таким расчетом, чтобы исходная плотность при центрифугировании составляла 1,5 г/ м а объем смеси —5 мл. Остальной объем пробирки (8 мл) заполняли парафиновым маслом. Центрифугирование вели при 30 000 об/мии и 25 в течение 60 ч. Собирали 30 фракций. 40 S РНП-частицы выходили острым пиком в области р= 1,4 г/см . Аналогичным образом исследовали плавучую плотность рибосом, а по ней определяли содержание в них белка. Рибосомы фиксировали обработкой 6%-ным раствором формальдегида. [c.262]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология