меченой oli рибосом

К З -концу. Время т прохождения рибосомой среднего расстояния б между двумя рибосомами, равного, согласно данным седиментационного анализа н электронной микроскопии, 90 нуклеотидам, составляет примерно 3 сек, что отвечает линейной скорости порядка 10 см/сек. Кинетика синтеза изучается по скорости включения меченной С аминокислоты в белковую цепь (см., например, [132]). [c.598]

Ядра, митохондрии и хлоропласты растений, как сообщалось, также синтезируют белок. Ядра, тщательно выделенные из гороха, включают в белок меченый лейцин в присутствии других белковых аминокислот и АТФ. Синтез белка в митохондриях растений показан не очень убедительно, так как не было исключено загрязнение данной фракции рибосомами. Препараты хлоропластов, как обнаружено, также катализируют включение аминокислот в белок. [c.482]

Эксперименты показали, что если в среду ввести аминокислоты, меченные С то метка раньше всего появляется в белке рибосом. Это свидетельствует о том, что реакции синтеза белка в клетке протекают главным образом в рибосомах. Рибосомы функционируют и вне клеток в системе, содержащей, помимо рибосом, аминокислоты, нуклеотиды, источник энергии и [c.369]

Ретикулоциты инкубировали с меченой аминокислотой в течение 45 сек, после чего их лизи-ровали. Полисомы отделяли путем центрифугирования в градиенте плотности сахарозы. Затем определяли по всему градиенту количество рибосом и связанной с рибосомами меченой аминокислоты (растущие полипептидные цепи). Обозначения кривых I — радиоактивность II — оптическая плотность [28]. [c.26]

То, что именно полисомы участвуют в белковом синтезе, может быть показано методом центрифугирования в градиенте плотности сахарозы. Для этой цели клетки в течение короткого промежутка времени обрабатывают меченой аминокислотой, после чего из этих клеток выделяют рибосомы. Затем эти рибосомы разделяют путем центрифугирования в градиенте плотно- [c.26]

Чтобы окончательно доказать, что заготовки белка, меченные радиоактивной серой, в рибосомах являются предшественниками растворимых белков клетки, опыты несколько видоизменялись. После 12 сек. контакта культуры с радиоактивным сульфатом добавлялся большой избыток нерадиоактивной серы и после дополнительных 30 сек. инкубации культура быстро охлаждалась до 0°, клетки разрушались и их содержимое фракционировалось в ультрацентрифуге. Результаты опыта представлены на рис. 148, В. [c.459]

Из этого можно заключить, что меченые атомы сначала появляются в растущих полипептидных цепях, связанных с рибосомами, а затем переходят из рибосом в растворимую (т, е, не рибосомную, общую) фракцию бактериальных белков. Можно доказать, что в опыте, изображенном на фиг, 195, скорость, с которой меченые атомы серы включаются в связанные с рибосомами растущие полипептиды и затем выходят из них, вполне достаточна, чтобы обеспечить весь синтез бактериальных бел- [c.388]

А. Плотность тяжелых и легких бактериальных рибосом. Клетки . соЦ, выращенные на меченной N , С Р -среде, смешивают с 50-кратным избытком клеток, выращенных на обычном питательном бульоне. Из этой смешанной популяции бактерий рибосомы экстрагируют, растирая клетки с окисью алюминия, а затем очищают дифференциальным центрифугированием. Затем рибосомы центрифугируют в градиенте плотности хлористого цезия. Каждый вид рибосом дает два максимума — а и Ь. Максимум Ь радиоактивности меченых, тяжелых рибосом находится непосредственно под максимумом а поглощения немеченых, легких рибосом. [c.392]

Результаты этого опыта подтвердили, что большая часть постинфекционной РНК связана с рибосомами. Однако, как видно из фиг. 196, измерение плотности рибосом, несущих постинфекционную РНК, меченную Р, показало, что эти рибосомы содержат тяжелые, приобретенные до заражения изотопы и С, а не легкие N и Иными словами, этот опыт показал, что образовавшаяся под влиянием фага постинфекционная РНК включается в старые рибосомы, уже содержавшиеся в клетке до ее заражения фагом Т4. В зараженной клетке совсем не удается обнаружить легких рибосом. Следовательно, заражение Т-четными фагами действительно прекращает образование новых рибосом. [c.392]

В качестве радиоактивной метки. Другая культура была выращена на обычной легкой среде, содержащей HjO, и В качестве радиоактивной метки в ней присутствовал С-урацил. Видно, что меченные С рибосомы, выделенные из легкой культуры, дают три пика с характерными константами седиментации 70S, 50S и 30S, соответствующими нормальным легким рибосомам и некоторому количеству диссоциированных 50S- и 30S- yбъeдиниц. Меченные рибосомы, выделенные из тяжелой культуры, дают три более быстрых максимума с константами седиментации 86S, 61S и 38S, соответствующих тяжелым 70S-pn6o oMaM и диссоциированным тяжелым 50S- и 30S- yбъeдиницaм. На фиг. 214, Б представлена аналогичная кривая седиментации в градиенте плотности сахарозы еще одной смеси рибосом, выделенных из двух культур Е. соИ. Одну из этих культур выращивали, как и ранее, в тяжелой среде с Н-урацилом, а затем переносили на нерадиоактивную легкую среду, где она росла в течение еще 3,5 генерации, после чего из нее выделяли рибосомы. Другая культура все время росла на тяжелой среде с С-урацилом. Видно, что после 3,5 генерации в легкой среде меченные Н тяжелые 508-и 308-субъединицы рибосом по-прежнему седиментируют с той же высокой скоростью, что и меченные тяжелые 50S- и 305-субъединицы тяжелой культуры, не подвергавшейся переносу. Но меченные Н, ранее бывшие тяжелыми 705-рибосомы той культуры, которую переносили с одной среды на другую, седиментируют теперь со скоростью, лежащей примерно посередине между скоростями седиментации полностью тяжелых и полностью легких 708-рибосом. Эти результаты показывают, что, в то время как тяжелые 50S- и 305-рибосомные субъединицы остаются неизменными после переноса бактерии в легкую среду, большинство из них за это время соединилось с легкими , позднее синтезированными партнерами и образовало наполовину тяжелые , наполовину легкие гибридные 708-рибосомы. [c.430]

Полисомы активнее участвуют в синтезе полипептидов, чем отдельные рибосомные мономеры. Об этом можно судить по включению меченых аминокислот в системе, содержащей, например, синтетическую яг-РНК в виде поли-У, которая обеспечивает специфическое включение фенилаланина в полипептид. Уже образовавшие агрегат рибосомы певосприимчивы к добавленной поли-У, а мономеры с готовностью акцептируют поли-У и образуют быстро осаждающийся комплекс, обладающий белоксиитезирующей активностью, о чем говорит включение С -фенилаланина [82,83, 93]. [c.281]

Прямыми линиями обозначены немеченые полипептидные цепи волнистыми — меченые полипептидпые цепи, образовавшиеся после добавления меченой аминокислоты в момент времени t,. Группы пептидов, обозначенные через К,— незавершенные полипептидные цепи, соединенные в данный момент с рибосомами. Считается, что цепи, достигшие конечной длины, переходят во фракцию растворимого гемоглобина. В момент времени (левая часть фигуры) две верхние волнистые линии соответствуют пептидным цепям, целиком образовавшимся из аминокислот за променчуток времени между 1, и 2 две средние линии — цепям, которые синтезировались в течение итого ше промежутка времени, по еше не достигли конечной длины и остались поэтому присоединенными к рибосомам, и две нижние линии — цепям, которые достигли к моменту времени конечной длины, отделились от рибосом и смешались с другими молекулами растворимого гемоглобипа. [c.527]

О последней стадии синтеза белка — сборке белковой молекулы на рибосомах — предстоит еще выяснить очень многое. Информационная РНК, по-видимому, стимулирует агрегацию 70 5-рибосом. Эксперименты с введением меченых аминокислот в ретикулоциты кролика показывают, что для синтеза полипептидной цепи гемоглобина, происходящего последовательно в линейном порядке, начиная с аминного конца цепи, требуется 1—2 мин. Многие детали этой и других стадий синтеза белка еще неизвестны. Исследования этой сложной проблемы развиваются очень интенсивно, и мы привели здесь лищь беглый обзор полученных к настоящему времени результатов. [c.375]

Что произойдет, если ввести синтетический рибонуклеотид в бесклеточную систему, синтезирующую белок Ниренберг и Маттеи вводили поли-У в систему, содержащую отмытые рибосомы из Е. соН, и обнаружили, что включение L-фенилаланина усиливалось при этом в 1000 раз. Для остальных 17 аминокислот никакого усилия включения не наблюдалось. Очевидно, в си-, стеме шел синтез полифенилаланина. Отсюда можно было заключить, что кодом фенилаланина служит последовательность остатков урацила. Обладая свойствами информационной РНК, большая часть поли-У после введения в систему быстро распадается. Нераспавшаяся часть поли-У (она была мечена тритием) образует комплексы с агрегатами рибосом (полисомами), в состав которых входил фенилаланин, меченный С . Эти результаты подтверждают точку зрения, согласно которой поли-У играет роль синтетической информационной РНК. При введении в эту систему также поли-А образуются сложные двух- и трехцепочечные спирали поли-(У-ЬА) и поли-(ГУ-f А), причем включение фенилаланина прекращается. Следовательно, для синтеза белка необходима одноцепочечная информационная РНК- [c.376]

Рибосомы метили 1п vivo аминокислотой. Затем изолированные полисомы инкубировали в реакционной смеси, содержащей немеченую аминокислоту. В этих условиях заканчивается рост полипептидных цепей и в растворе появляется меченый белок (гемоглобин). Одновременно с этим происходит освобождение рибосом из полисом (I — доля рибосом, высвободившихся из полисом II — гемоглобин в растворе [10, 11]). [c.27]

По-видимому, основная масса синтезированных в ядрышке белков иснользуется для образования рибосом. Наличие в ядрышке рибосом впервые было показано с помощью электронной микроскопии на электронных микрофотографиях в ядрышке обнаруживалось большое количе-ство частиц, по своим размерам сходных с рибосомами цитоплазмы. Было найдено, что[в экстрактах целых клеточных ядер содержатся частицы, состав и коэффициент седиментации которых сходны с соответствующими параметрами рибосом, описанных Тео и Сато [54]. Бёрнстил иего коллеги выделили эти частицы из изолированных ядрышек и показали, что они обладают основными свойствами рибосом, т. е. имеют коэффициент седиментации 80S, распадаются на субъединицы] при удалении ионов магния, а аминокислотный состав их белка сходен с аминокислотным составом белка цитоплазматических рибосом. Факт синтеза рибосомного белка в ядрышке был подтвержден опытами, в которых изолированные ядра инкубировали в течение короткого времени с меченой аминокислотой. Затем из таких ядер выделяли ядрышки, а из них выделяли белок, обладавший самой высокой скоростью включения аминокислот. [c.40]

Из развивающихся семядолей гороха и из вегетативных ночек растений гороха был выделен хроматин. Напомним, что семядоли синтезируют глобулин семян гороха, тогда как вегетативные почки не синтезируют этот белок. К каждому из этих двух препаратов хроматина добавляли очищенную РНК-полимеразу и смесь четырех рибонуклеозидтрифосфатов. В такой системе, как это уже отмечалось в гл. 4, хроматин функционирует в качестве матрицы для синтеза информационной РНК. Затем к обеим системам, способным синтезировать информационные РНК, добавляли рибосомную систему синтеза белка, зависящую от информационной РНК. Таким образом, в этой смеси информационная РНК, сиптезироваппая на хроматине, использовалась для функционирования рибосомной системы синтеза белка, причем количества синтезированного растворимого белка были довольно велики. После инкубации рибосомы и хроматин удаляли из системы центрифугированием, а избыток меченой аминокислоты удаляли путем диализа. Долю глобулина в смеси вновь синтезированных растворимых белков определяли с помощью имму-нохимического метода, как это описапо выше для случая синтеза белков в различных органах [c.524]

В первых опытах на целом организме было показано, что включение меченых аминокислот в белки происходит раньше всего в рибосомной фракции цитоплазмы. Так, Келлер обнаружил через 15 мин. после введения меченного С лейцина в организм крысы до 70% радиоактивности в рибосомной фракции (изучались белкп печени). Соотношение между удельной активностью белков в рибосомах и в других частях клетки составляло 5—10. Множество других экспериментов подтвердило, что напболее интенсивный синтез белка локализован в мельчайших частицах цитоплазмы, рибосомах, содержащих большую часть клеточной РНК. [c.441]

Первый вопрос решался с помощью радиоактивно меченных аминокислот. Существенно то, что нам известно концевое звено цепи гемоглобина, содержащее КН2-группу, — это валин. Опыт ставился следующим образом препарат отмытых рибосом (большая часть, свьппе 80%, имеет константу седиментации 70 э) подвергался инкубации на среде с набором аминокислот и меченным С валином. Синтез шел сравнительно короткое время, что доказывает кинетический характер эксперимента. После извлечения синтезированного рибосомами белка у последнего определялась общая радиоактивность и активность N-кoнцeвoй аминокислоты путем реакции концевой аминогруппы с динитро-фторбензолом или фенилизотиоцианатом, отщепления меченой концевой группы и ее хроматографической очистки. Молекула гемоглобина (кролика) состоит из 670 аминокислотных звеньев, из которых 46 являются валинами, в том числе 4 валина — КНа-концевой группы (в молекуле гемоглобина содержится [c.453]

Метод выделения ИРНК был применен также в случае заражения клеток фагом Та. После адсорбции в течение 2 мин. задавался урацил в течение последующих 3—5 мин. Вскрытие клетки при 10" М Мд " снова обнаруживало в рибосомном препарате присутствие отдельного радиоактивного пика. После де-протенизации получалась меченая фракция с константой седиментации 16 8. Здесь интересна деталь время контакта бралось достаточно большим (до 5 мин.), вместе с тем радиоактивность находилась вся в ИРНК в согласии с данными Фолькина. Значит, в зараженной клетке рибосомная РНК не синтезируется. Если взять столь же длительный импульс в незараженных клетках, то практически вся радиоактивность оказывается в рибосомах. [c.471]

Следующий важный вопрос относится к связи ИРНК с рибосомами и к ее участию в синтезе белка. Вьппе указывалось, что при приготовлении меченой ИРНК и ее выделении в ультрацентрифуге нри низкой концентрации магния около 10% радиоактивной ИРНК находится в нераснавшихся рибосомах 70 в, а 90% в свободном состоянии. Если экстрагировать растертый клеточный препарат при высокой концентрации магния (10" М), то 65% ИРНК будет находиться в рибосомах 70 в, которые нри высокой концентрации магния являются преобладающими, и только [c.475]

Берутся разорванные клетки, из которых удалены ядра. В такой системе не содержится ни ДНК, ни м-РНК, но имеются рибосомы, набор т-РНК для всех аминокислот и необходимые ферменты. В систему вводятся синтетические полирибонуклеотидные цепи и различные аминокислоты, меченные радиоактивными атомами С . В такой системе природа обманута — вместо м-РНК в качестве матрицы работает синтетический полинуклеотид. О его работе можно судить по включению меченой аминокислоты в синтезируемую полипептидную цепь. Оказалось, что цепочка полиурацила — поли У [c.282]

В настоящее время есть исчерпывающие доказательства существования в клетке относительно низкомолекулярных информационных рибонуклеиновых кислот, синтезируемых на ДНК как на матрице, т, е. так, что матричным А, О, Т и С отвечают соответственно и (урацил, а не тимин, так как это уже не ДНК, а РНК), С, А и О. Эти и-РНК, берущие, так сказать, отпечаток с ДНК, перемещаются в рибосомы и, закрепляясь на рибосомальной РНК (р-РНК), передают туда информацию о типе белков, которые нужно синтезировать рибосомам. В сущности, сборка молекул белка идет именно на и-РНК, называемых поэтому также м-РНК— матричными РНК (о коде информации речь пойдет позднее). Доказано это было, в частности, так (Фолькин, Астрчан) бактерии заражали фагом, а затем в среду вводили радиоактивный фосфат, меченный Через [c.727]

Чтобы изучать столь сложный процесс, пришлось в течение длительного времени разрабатывать методику постановки экспериментов, которая позволила бы выделить из всей массы клеточных превращений нужный вид и проследить за его закономерностями. Наиболее широко при этом использовались опыты с аминокислотами, снабженными радиоактивной меткой. Если проследить за интенсивностью включения метки в те или иные клеточные элементы, то можно определить, где в клетке сосредоточены области наиболее интенсивного синтеза белка. Таким способом было установлено, что биосинтез белка связан с определенными клеточными структурами — рибосомами, построенными из рибонуклеопротеидов Это справедливо для всех клеток животного происхождения. В растениях интенсивное включение меченых аминокислот наблюдалось в хлоропла-стах клеток, у бактерий — на поверхности клеточных мембран и те и другие клеточные элементы также содержат рибонуклеопротеидные частицы. Менее интенсивно биосинтез белка протекает в клеточных ядрах и митохондриях. [c.482]

При обсуждении структуры полипептидов в гл. IV было показано, что на одном конце цепи имеется свободная -карбоксильная группа, а па другом — свободная а-аминогруппа. Это обусловлено тем, что в отличие от остальных аминокислот, находящихся внутри цепи и соединенных со своими соседями двумя пептидными связями, каждая из карбокси- и аминоконцевых аминокислот присоединяется к своему единственному соседу только одной пептидной связью. Проще всего предположить, что при сборке аминокислот в полипептидную цепь ее рост происходит с одного конца путем последовательного присоединения аминокислот одня за другой. Когда, наконец, соединится необходимое число аминокислот, рост цепи прекращается терминация синтеза) и завершенная полипептидная цепь освобождается из рибосомы, с тем чтобы выполнить ту фу нкцно-нальную роль в жизни клетки, к которой она предназначена. До пустим теперь, что в момент времени /х мы добавим к клеточной культуре меченные Н аминокислоты, а затем через короткие промежутки в м оменты i , tз и т. д. определим в завершенных полипептидных цепях, уже отделившихся от рибосом, появление этих аминокислот. Тогда, если справедлив постулированный механизм роста цепи, получатся результаты, схематически изображенные на фиг. 201. [c.406]

Смотреть страницы где упоминается термин меченой oli рибосом: [c.12] [c.26] [c.27] [c.194] [c.199] [c.137] [c.151] [c.197] [c.197] [c.197] [c.277] [c.583] [c.599] [c.273] [c.26] [c.40] [c.472] [c.86] [c.441] [c.476] [c.687] [c.168] [c.389] [c.394] [c.407]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология