Агрегация белков

Такая гипотеза резко противоречит данным других исследователей [22], обнаруживших, что эти связи играют лишь вспомогательную роль в явлениях нерастворимости, наблюдаемых в процессе термической обработки. Эти авторы полагают, что агрегация белков скорее всего является здесь следствием формирования межмолекулярных дисульфидных мостиков их гипотеза основана на изучении кривых растворимости в зависимости от термического воздействия на белки клейковины (рис. 10.3). [c.512]

Единственным серьезным ограничением является возможность агрегации белков при повышенном давлении. Установлено, что при фракционировании бычьего сывороточного альбумина агрегация наступала при 2880—3500 атм [14]. В настоящее время благодаря выпуску материалов с более мелкими порами область применения СКП существенно расширилась. [c.430]

Браун и Нетши [14] использовали изложенные выше представления для изучения белков мембран и липо-протеидов. Определения они проводили в 8 М растворе мочевины и пришли к выводу, что в обычных растворах эти молекулы вытянуты и сильно сольватированы. Влияние липида ца агрегацию белка или на его конформацию в 8 М растворе мочевины не было обнаружено. [c.142]

Механизм агрегации белка ВТМ изучен довольно детально. Ниже 12° С белок как таковой имеет тенденцию агрегировать в виде стопки дисков, содержащих по 17 субъединиц, а не в виде характерной для ВТМ непрерывной спирали, на каждый виток которой приходится 16 и 3 субъединиц. Повышение температуры способ- [c.219]

В отношении скорости фокусирования белки выгоднее вносить с той стороны геля, где большая их часть сильнее заряжена (кислые белки — со стороны катода, щелочные — со стороны анода), хотя при этом и расстояние миграции может оказаться больше. Помимо уже упомянутых проблем устойчивости к кислым или щелочным воздействиям и сорбции на бумагу, следует также иметь в виду опасность агрегации белков в препарате, которая также может зависеть от pH. Надежный критерий достоверности фракционирования белков — совпадение картин фокусирования при внесении препаратов как со стороны анода, так и со стороны катода. Обратное утверждение не имеет силы если эти картины не совпадают, то возможно, что лишь одна из них искажена за счет артефактов внесения препарата, но надо выяснить, какая именно. [c.31]

Какую роль в генно-инженерной практике играет явление внутриклеточной агрегации белков [c.350]

Гидрофобные радикалы, обычно находящиеся в гидрофобном ядре глобулярных белков, при денатурации оказываются на поверхности молекулы, тем самым создаются условия для агрегации белков. Агрегаты белков выпадают в осадок. [c.22]

Какие особенности строения шаперонов позволяют им узнавать склонные к агрегации белки и взаимодействовать с ними [c.24]

Ясно, что в этом случае Д5° будет большой и притом положительной величиной. Можно ожидать, что изменение энтальпии данного процесса будет обратным по сравнению с ее изменением для процесса, описанного уравнением (3.1), т. е. будет положительным. Значит, величина мала, а ее знак будет зависеть от относительных значений ДЯ и Д5°. При низкой концентрации соли ДС для типичного водорастворимого белка положительна. Так как белок растворим, заметной агрегации (уравнение 3.2) происходить не будет. Однако, если молекулы воды, освободившиеся в описанном процессе (3.2), захватываются какими-либо другими молекулами, взаимодействие белковых молекул может привести к агрегации белка. Ионы солей подвергаются гидратации, и поэтому при [c.62]

Рис. 3.9. Агрегация белков вследствие их взаимодействия в смеси воды с органическим растворителем.

Небольшие количества органического растворителя (например, до 10% по объему) практически не оказывают влияния на результаты фракционирования другими методами. Исключение составляют методы гидрофобной хроматографии (разд. 4.8) и аффинной адсорбции, зависящие от гидрофобных взаимодействий (разд. 4.5), а также часто фракционирование с помощью высаливания. Если фермент относительно стабилен к действию растворителя, фракционирование сульфатом аммония можно проводить в присутствии растворителя. Однако концентрация соли, необходимая для осаждения белка, будет при этом, вероятно, несколько выше, что обусловлено присутствием молекул органического растворителя, препятствующих гидрофобной агрегации белка при высокой концентрации соли. Излишки рас- [c.79]

Денатурация растворенных белков обычно происходит при температуре 50—60°С и требует различного времени, но точное значение температуры, вызывающей конформационный переход, варьируется в широких пределах для различных белков. Например, некоторые ферменты инактивируются даже при охлаждении от 30 до 0°С (холод-лабильные ферменты). Тепловая денатурация часто оказывается обратимой, но во многих случаях агрегация белка сопровождается его осаждением из раствора. Причиной денатурации белков может быть также изменение pH. Понятно, что характер электростатических взаимодействий в полипептидных цепях белков существенным образом зависит от pH. Однако весьма сложно объяснить, почему данный белок денатурирует прп одном значении [c.204]

Вероятно, при высокой концентрации происходит агрегация белка. Получающаяся крупная структура не может проникнуть в поры и выходит в свободном объеме. [c.551]

Денатурация белков — процесс обычно обратимый. Однако разные белки очень сильно различаются по своей способности к восстановлению исходной конформации после удаления денатуранта. В связи с тем, что конкурентные реакции неспецифической агрегации белков обычно вызывают образование нерастворимых осадков, сдвигая равновесие в растворе, многие белки с трудом поддаются ренатурацни. Следовательно, диссоциацию вирусных белков следует проводить таким образом, чтобы свести сопутствующий ей процесс денатурации к минимуму. [c.49]

Белок-белковые взаимодействия в мембранах характеризуются высокой специфичностью и проявляются в виде обратимой внутримембранной агрегации мембранных белков, которая сопровождается изменением функциональной активности всей системы. При температурах ниже температуры фазовых переходов липидов белки находятся в агрегированном состоянии, а при температурах выше фазовых переходов — в диспергированном состоянии. Считают, что это происходит вследствие выталкивания белковых молекул из упорядоченной гелевой фазы. Степень диспергированности белков в мембране контролируется фазовым состоянием липидов. Имеются данные, свидетельствующие о том, что при частичном удалении липидов из мембраны происходит усиленная агрегация белков, а при введении в мембрану небольших количеств детергента наблюдается диссоциация олигомерных молекул, например, Са -АТФазы. [c.61]

Поэтому низкотемпературные эффекты в биомембранах сводятся к нескольким важным физико-химическим механизмам, влияющим на результаты замораживания различных биологических объектов. К их числу могут быть отнесены термотропные фазовые переходы липидов, температурозависимые изменения структуры мембранной воды, сегрегация и агрегация белков, нарушение барьерных свойств мембран, биохимическая модификация структурных компонентов мембран под влиянием процессов перекисного окисления и гидролиза липидов мембранными фосфолипазами и некоторые другие механизмы. [c.19]

Из-за снижения растворимости белков вблизи изоэлектрической точки и опасности их осаждения иногда в состав геля для ИЭФ приходится вводить мочевину. Для плохо растворимых и склонных к агрегации белков э.то может быть необходимым с самого начала, еще на стадии приготовления препаратов. Многие гидрофобные белки для своего растворения нуждаются в добавлении детергентов, например неионных — типа Тритона Х-100 или Nonidet Р-40 (NP-40). Наконец, нередки случаи, когда надежное растворение белков удается обеспечить только совместным воздействием мочевины и детергентов. [c.24]

Использование высокой концентрации мочевины на всех этапах процесса, начиная с лизиса клеток, необходимо для устранения угрозы агрегации белков. Как всегда, при этом следует опасаться распада мочевины и карбамоилирования белков, что приведет к появлению мультиплетов пятен, расположенных рядом, на одном уровне пластины. Ввиду этого растворы особо чистой мочевины должны быть свежеприготовлены или храниться в замороженных аликвотах. Замечено, что в продажных препаратах мочевины даже нанвысшей чистоты встречаются примеси солей, способствующих агрегации белков [Goldsmith et а ., [c.48]

Уже указывалось, что для предотвращения агрегации белков в рабочий буфер геля нередко вводят мочевину в концентрации от 2 до 8 М. Ее, разумеется, добавляют и в исходный белковый препар1ат. В электродные буферы вносить мочевину не нужно, так как, не будучи заряженной, она не мигрирует в геле, а сле-ровательно, и не нуждается в пополнении. На электропроводно- ти буфера присутствие мочевины практически не сказывается. 1)днако под влиянием нового окружения могут изменяться р/С отдельных групп и суммарный заряд белка. Это может заметно повлиять на конфигурацию, а следовательно, и на подвижность белков. [c.50]

В системе in vitro денатурированные белки взаимодейству ют друг с другом гидрофобными участками, агрегируют и выпадают в осадок. По-видимому, сходный процесс часто происходит и в клетках, когда они синтезируют большие количества аберрантных полипептидов. Такие полипептиды, а также нор мал >ныз по аминокислотной последовательности рекомбинантные белки, могут образовывать нерастворимые агрегаты. Внутриклеточная агрегация белков является одним из способов их сохранения в клетке. [c.324]

Основная причина агрегации белков заключается, вероятно, в электростатических и вандерваальсовых силах, сходных с силами, действующими при высаливании белков в отсутствие органического растворителя. Гидрофобные взаимодействия имеют здесь меньшее значение из-за солюбилизирующего влияния органических растворителей на неполярные участки белковой глобулы. Было установлено, что вблизи изоэлектрической точки белков осаждение происходит при более низкой концентрации органического растворителя. Это подтверждает предположение о том, что агрегация, происходящая в данном случае, сходна с агрегацией, наблюдающейся при изоэлектрическом осаждении белков. На рис. 3.9 схематически изображены молекулы белков в смеси воды с органическим растворителем агрегация здесь происходит за счет взаимодействий между противоположно заряженными участками на поверхности белков. [c.74]

Рассмотрим два примера. Первый пример — исследование связывания лиганда ферментом в ходе иекатализируемой реакции. При этом могут произойти два физических события связывание и индуцируемое лигандом конформационное изменение фермента. Чтобы установить число промежуточных стадий и определить соответствующие им константы скорости, прежде всего необходимо определить число времен релаксации и найти их концентрационную зависимость. В идеальном случае число времен релаксации будет равно числу стадий данной реакции. Если найдено даже одно время релаксации и его концентрационная зависимость нелинейна, это может означать, что процесс протекает в две стадии [например, уравнения (4.71) и (4.74)], Далее стоит воспользоваться несколькими физическими методами (например, исследовать флуоресценцию и поглощение лиганда и белка), поскольку некоторые стадии могут быть выявлены только с помощью одного из этих методов. В ходе рассматриваемой реакции могут протекать и другие физические процессы, например отдача или присоединение протона или изменение степени агрегации белка. В первом случае весьма полезен еще один метод — измерение pH, для чего можно использовать просто цветные индикаторы. Агрегация осложняет кинетические исследования, однако ее можно обнаружить и количественно охарактеризовать, что также даст дополнительную информацию. Для исследования простых реакций релаксационные методы часто оказываются эффективнее струевых, поскольку позволяют изучать более быстрые процессы. Однако иногда метод остановленной струи более ценен, например, при исследовании процессов, слишком медленных, чтобы применять метод температурного скачка. Кроме того, некоторые эксперименты (такие, как исследование влияния сильных изменений pH) можно осуществить только в том случае, если использовать методы, включающие быстрое смешивание реагентов (хотя небольшого изменения pH можно добиться, применив метод темпера- [c.151]