Гемолиз см клетки их образующие

Истинные зоны гемолиза образуются только после добавления комплемента. Под микроскопом в центре зоны гемолиза должны быть видны антителообразующие клетки. [c.294]

В 60-х годах были достигнуты важные успехи, открывшие новые пути изучения В-клеток. Первым из ннх была разработка метода локального гемолиза, который позволил идентифицировать и подсчитывать индивидуальные В-клетки, вырабатывающие антитела к определенному антигену. В простейшем варианте этого метода берут лимфоциты (обычно из селезенки) у животного, иммунизированного бараньими эритроцитами (БЭ). Их помещают затем в агар вместе с избытком Ю. В результате на чашке получается газон из иммобилизованных БЭ с вкраплением лимфоцитов. В этих условиях клетки не могут передвигаться, но любые выделяемые В-клеткой антитела будут диффундировать и покрывать поверхность всех БЭ, находящихся поблизости. Такие покрытые антителами эритроциты можно лизировать, добавив комплемент (разд. 17.5). Таким образом, присутствие каждой выделяющей антитела клетки обнаруживается по прозрачному пятну ( бляшке ) в темном слое БЭ. Аналогичный метод можно использовать для подсчета клеток, вырабатывающих антитела к другим антигенам, таким как белки или полисахариды, если присоединить эти антигены к поверхности бараньих эритроцитов. [c.20]

Дефибринированную кровь готовят следующим образом в стерильных условиях отбирают кровь шприцем с иглой № 18 (для предотвращения гемолиза, вызываемого механическим разрушением) и немедленно переливают ее в стерильную колбу, в которую помещен слой стерильных стеклянных шариков (диаметром около 3 мм). Колбу встряхивают в горизонтальной плоскости в течеиие 10 мин. Фибрин, образовавшийся во время свертывания, остается на шариках. Надосадочную жидкость, содержащую клетки крови и сыворотку, сливают в стерильный сосуд и хранят в холодильнике. [c.71]

Для определения антителообразующих клеток методом локального гемолиза, или бляшкообразования. к исследуемой клеточной популяции добавляют эритроциты, сенсибилизированные антигеном. При последующей инкубации эритроциты, окружающие антителообразующую клетку, связывают секретируемые ею специфические антитела и в результате лизируются комплементом. Вид образующейся при зтом зоны просветления - бляшки - с В-клеткой в центре показан справа. Локальный гемолиз может быть двух типов. [c.542]

Нестабильные гемоглобины [31 1335-1357]. Описано свыше 100 нестабильных гемоглобинов. В большинстве случаев мутация затрагивает 3-цепь. У многих нестабильных гемоглобинов в полипептидной цепи обнаруживаются аминокислотные замены или делеции в участках связывания гема. Клинические проявления варьируют от едва заметной нестабильности, практически не имеющей клинических последствий, до выраженной нестабильности, при которой происходит интенсивное разрушение эритроцитов. В некоторых случаях гемолиз усиливается при лечении сопутствующих заболеваний сульфониламидами. Нестабильность этих гемоглобинов часто обусловлена преждевременной диссоциацией гема и глобиновой цепи. Такие лишенные гема молекулы глобина преципитуруют внутри клетки, образуя так называемые тельца Хейнца, нарушающие функционирование клеточных мембран. В селезенке тельца Хейнца могут быть удалены из эритроцитов без их разрушения. В конечном итоге такие эритроциты преждевременно уничтожаются ретикуло-эндотелиальной системой. При некоторых формах нестабильности гемоглобина сильный гемолиз удается смягчить удалением селезенки. [c.82]

Т-клетки, специфичные к носителю, получают по любой из существующих стандартных методик, суспендируют в культуральной среде и добавляют в оптимальной концентрации к охлажденным В-клеткам. Затем смесь клеток разливают по чащ-кам н культивируют. Мы использовали стандартные культуры объемом в 1 мл (1,5-10 клеток/мл) по Мишеллу—Даттону и микрокультуры по 0,2 мл (1—3-10 . клеток/мл). Для оценки активации В-клеток, зависимой от Т-хелперов, мы подсчитывали клетки, образующие зоны гемолиза. [c.184]

В некоторых образцах бараньих эритрЬцитов могут содержаться клеточные элементы, дающие зоны гемолиза. Вероятно, это клетки, образующие аутоантитела. Такие зоны можно исключить с помощью контрольного опыта без испытуемых лимфоидных клеток. [c.294]

Бактерий этой группы многократно выделяли из мертвых насекомых, и была доказана их патогенность при пероральном введении насекомым. Стефенс [199] обнаружила в мертвых гусеницах яблонной плодожорки бактерию, которая была способна размножаться на обычных питательных средах, образуя серые, сухие колонии. Этот факультативно анаэробный вид на желточных средах не вырабатывает черный пигмент, так как не содержит фосфатазу, разжижает желатин, гидролизует крахмал и образует кислоту из глюкозы, мальтозы и сахарозы. Он не расщепляет ара-бинозу, лактозу, глицерин и маннит. На кровяных средах не вызывает гемолиз, восстанавливает нитраты до нитритов, дает положительную реакцию с метиленовой красной. Реакция Воже — Проскауера непостоянная. Индола не образует. Вегетативные клетки размером 0,9—1,4X1,4—3,0 и до 7,0мк, споры правильно яйцевидной формы, 1—1,3X1,0 мк. Параспоральные тельца и кристаллы не образует. [c.192]

Гемолитическая желтуха. Усиленный гемолиз эритроцитов приводит к интенсивному образованию в клетках ретикулоэндотелиальной системы непрямого билирубина. Печень не в состоянии связать весь этот билирубин с глюкуроновой кислотой. В результате в крови и тканях накапливается непрямой билирубин. Так как через печень идет повышенный поток непрямого билирубина, образуется больше и прямого билирубина. Увеличение потока прямого билирубина в желчь приводит к увеличению образования уробилиногенов и стер-кобилиногена в кишечнике. Кал приобретает более интенсивное окрашивание. Кровь повышение общего билирубина за счет повышения непрямого билирубина. Кал повышение стеркобилиногена (темная окраска). Моча билирубин (—), уробилиноген(+). [c.440]

Большой практический интерес для правильной диагностики гемолитических процессов представляют полученные в последние годы новые данные об основных механизмах гемолиза и метаболизме эритроцитов. Согласно этим данным, существуют два механизма разрушения эритроцитов в нутрисосудистый — непосредственно в кровяном русле и внутриклеточный — в клетках ретику-ло-эндотелиальной системы, главным образом селезенки, печени, костного мозга. [c.225]

Значительная часть ионов железа, входящего в состав асбестов, редокс-активна и способна катализировать на поверхности волокон железокатализируемую реакцию Хабера — Вейса (см. уравнения (1.14)—(1.16)), в результате которой образуется агрессивный гидроксильный радикал [158, 159]. Более того, ионы железа способны катализировать на поверхности минеральных волокон реакции одноэлектронного восстановления кислорода и образования супероксида, который затем вовлекаются в реакцию Хабера — Вейса [158], что приводит при инкубации с асбестом к повреждению клеток, лишенных способности к фагоцитозу и дыхательному взрыву, в частности — к гемолизу эритроцитов. Благодаря тому, что гидроксильный радикал и другие цитотоксич-ные агенты, образующиеся на поверхности асбеста, химически чрезвычайно активны, повреждение клетки мишени происходит только непосредственно в зоне активации молекулярного кислорода, то есть имеет место так называемый сайт-специфический эффект (рис. 2.28а). Очевидно, что для того чтобы фармакологический агент мог эффективно защищать клетки, недостаточно только высокой антирадикальной активности, то есть способности перехватывать радикалы, он также должен обладать сайт-спе-цифичными свойствами. Сайт-специфическое связывание может быть обусловлено формированием комплекса антирадикального [c.139]

Лизис нагруженных белком А эритроцитов можно использовать при анализе у Xenopus клеток, образующих иммуноглобулины, по описанным в литературе методикам. Для такого анализа, так же как и для обратного локального гемолиза, необходимо определение оптимальных разведений (титрованием) кроличьих антител против иммуноглобулинов Xenopus. Например, нашу антисыворотку для использования в тесте с нагруженными белком А эритроцитами нужно разводить 1 80, а для обратного гемолиза 1 256. Вероятно, антисыворотка обеспечивает более прочное связывание антител низкой аффинности с клетками-мишенями. Ни одни из известных моноклональных антител против IgY не дают присущего кроличьим антисывороткам усиливающего эффекта. [c.503]

Клетки, о-бразующие розетки с БЭ, т, е. Т-лимфоциты, можно собрать на дне пробирки под слоем СРЛ. Надосадочную жидкость удаляют, осадок клеток ресуспендируют в 3 мл разбавленной СР аутологичной плазмы, которая была собрана в начале процедуры разделения лимфоцитов и сохранялась на льду. Еслн теперь клетки проинкубировать 15 мин прн 37 С, то нормальные антитела к БЭ и комплемент, которые, как правило, содержатся в плазме человека, вызовут гемолиз АЭТ-БЭ. Т-лимфоцнты, освобожденные та-ким образом от БЭ, отмывают дважды в СР, ресуспендируют в среде Мак-Коя с 30% СПК, подсчитывают и доводят до концентрации 3 10 в 1 мл. Эту обогащенную взвесь Т-лимфоцитов можно использовать для НЬА-АВС ТНПирования. [c.193]

Долю неотвечающих культур определяют, как правило, путем анализа культуральной жидкости, пробы которой отбирают автоматическим репликатором и наносят на индикаторный слой (Lefkovits, Kamber, 1972). Образцы культуральной жидкости, содержащие антитела, образуют в индикаторном слое зоны комплемент-зависимого гемолиза. Нередко кроме культуральной жидкости исследуют и клетки. В этом случае определяют количество АОК в каждой культуре. Когда концентрация взвеси доведена до единичных клеток, результаты традиционного флуктуа-цнонного теста трудно интерпретировать. Поэтому приходится прибегать к более сложному методу, получившему название анализа с помощью лимитирующих разведений . Этот анализ проводят в диапазоне таких доз лимфоидных клеток, в котором можно с уверенностью ожидать, что ответ лимитируется только титруемым типом клеток. [c.365]

Данные типичного опыта с положительным результатом представлены в табл. 1. Мышей 57BL/10 иммунизировали внутри-брюшинно тринитрофенилированными бараньими эритроцитами (20 мкл осадка БЭ, суспендированные в 0,2 мл физиологического раствора, забуференного фосфатами). Спустя 3 дня после повторной иммунизации, осуществленной через месяц после первой, извлекали селезенки и объединяли клетки из трех селезенок. Непосредственно после слияния мы обнаружили среди 10 селезеночных клеток 10" клеток, образующих прямые зоны гемолиза, и столько же клеток, образующих непрямые зоны в [c.403]

Гибридные клетки (гибридомы) отбирали по их способности размножаться на НАТ-среде. Присущая клеткам миеломы способность к быстрой пролиферации в этом случае восстанавливалась за счет привнесения клетками селезенки упомянутого фермента запасного пути синтеза АМФ. Этот этап селекции гибридных клеток играет ключевую роль ввиду очень малого выхода процесса гибридизации. Достоверность получения гибридом была подтверждена не только фактом их пролиферации на селективной среде, но и прямым анализом кариотипа этих клеток было обнаружено почти суммарное число хромосом родителей . Методом гемолиза было показано, что эти гибридомы образуют антитела к эритроцитам барана. Более того, путем селекции удалось отобрать такие штаммы гибридом, которые выделяли в питательную среду только эти селезеночные антитела и не синтезировали иммуноглобулинов миеломного происхождения. Использовав изначально мышей линии BALB, авторы смогли путем инъекции отобранных таким образом гибридом мышам этой же линии стимулировать развитие у них злокачественных новообразований, ведущих массированный синтез антител к эритроцитам барана. [c.113]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология