Комплемент тесты

Для исследования реактивности организма, подвергающее гося воздействию различных промышленных ядов в низких концентрациях, наибольшей популярностью пользуются различные модификации фагоцитарной реакции нейтрофилов кро-ви. Довольно часто применяют и определение титра иммунных антител. В литературе можно встретить также экспериментальные исследования, в которых изучались тесты на реактивность количество комплемента, пропердина, интен-сивность бактерицидных свойств сыворотки крови титры лизоцима в слюне и тканях, барьерные функции крови и ели- [c.281]

Генетический анализ состоит в экспериментальном изучении отношений, существующих между мутантами. Для определения характера этих отношений используются два основных приема,-рекомбинационный тест и тест на комплементацию. Рекомбинационный тест, как мы уже отмечали в предыдущем разделе, определяет взаимное пространственное расположение мутаций на генетической карте. Комплемента-ционный тест, с другой стороны, определяет функциональные отношения мутантов. Все -//-мутанты обладают одинаковым фенотипом (табл. 6.1). Одинаковы ли их генетические функции Для ответа на этот вопрос клетки Е. соН К (А) заражали различными парными комбинациями мутантов гП, как это схематически изображено на рис. 6.6. Если в такой дважды инфицированной клетке возникает потомство фага, то это означает, что каждый из двух мутантных фагов осуществляет функцию, которую не в состоянии осуществлять второй мутант. Такие два мутанта называют комплементарными. С другой стороны, если в такой дважды инфицированной клетке потомства фагов не возникает, то это означает, что оба мутанта не способны осуществлять одну и ту же функцию. [c.166]

Псевдоаллели. Мутации, аллельные друг другу на основании комплемента-ционного теста но отделяющиеся друг от друга при рекомбинации. [c.313]

Метод ЕАС-розеток. Один из простых методов количественного учета В-лимфоцитов крови человека. В этом случае тест розеткообразования ставят, как и в случае Е-розеток, но с эритроцитами барана, предварительно инкубированными последовательно с антиэритроцитарными антителами, а затем с комплементом. Такие эритроциты присоединяются избирательно к клеткам, несущим рецепторы для комплемента, в том числе к В-лимфоцитам. У здоровых людей В-лимфоциты (ЕЛС-розетки) составляют 15—25% от общего числа лимфоцитов. [c.106]

Рис. 51. Выявление рецепторов, к активированным компонентам комплемента техникой розеткообразования. А — получение тест-реагентов эритроцитов с фиксированными на их поверхности различными комплексами активированных компонентов комплемента и регуляторных белков Б — формирование комплекса лимфоцита, имеющего рецепторы для активированных компонентов комплемента с эритроцитами, связавшими комплемент (С )

В основе этого метода лежит наиболее старая форма иммуноферментного анализа — комплемент-зависимый лизис эритроцитов. Эритроциты-мишени сенсибилизируются иммуноглобулином в такой форме, которая не связывает комплемент. Пробы, которые содержат ревматоидный фактор, связывающийся с сенсибилизированными клетками, могут быть обнаружены по лизису эритроцитов в присутствии комплемента. Этот тест наиболее чувствителен к ревматоидным факторам IgM-класса, но с помощью соответствующих модификаций (они будут обсуждаться ниже) можно увеличить его чувствительность и по. отношению [c.315]

Тест цитотоксичности имеет свои проблемы, более многообразные, чем в случае гемагглютинации и тем не менее этот тест используется повседневно во многих лабораториях благодаря его простоте и быстроте проведения, а также возможности количественного учета и объективности — при использовании изотопа Сг. В обоих вариантах теста цитотоксичности наиболее серьезную проблему представляет комплемент. Большинство лабора- [c.228]

Ротавирусы кур, индюков, уток и других птиц дают перекрестные реакции со всеми серотипами реовирусов млекопитающих [62]. Всего выделено 77 штаммов реовирусов птиц. Все они дают перекрестные реакции по тесту связывания комплемента и преципитации в агаре и разделяются на пять серотипов по результатам реакции нейтрализации [142, 143]. [c.268]

Многие вещества могут быть определены по их способности ингибировать реакции антиген — антитело. Это особенно широко используется при анализе гаптенов, поскольку гаптены обычно реагируют с антителом без фиксации комплемента. Поэтому прямое определение гаптенов по фиксации комплемента невозможно. Однако, если реакция антиген — антитело проводится таким образом, что все антитела полностью связываются антигеном и весь комплемент фиксирован, любой агент, который может связывать антитело без фиксации комплемента, можно определить по восстановлению количества фиксированного комплемента. Таким образом, если с антигеном добавляется гаптен, дающий перекрестную реакцию, этот гаптен может конкурировать с антигеном за центр связывания антигена с антителом и, следовательно, снижать количество фиксируемого комплемента. Путем прибавления различных количеств данного гаптена к данной смеси антиген-антитело можно получить калибровочную кривую, которую затем можно использовать для определения неизвестного количества того же гаптена в смеси. Эта процедура называется тестом торможения фиксации комплемента. Пример показан на рис. 10-5. [c.256]

Лабораторные тесты определение СОЭ, ревматоидного фактора, С-реактивного белка, серомукоида, IgA, IgM, IgG, общего титра комплемента, АСТ, АЛТ, оценка сиаловой и тимоловой проб. [c.314]

Наиболее распространенными иммуноглобулинами являются IgG ж IgM. Именно эти классы иммуноглобулинов описаны в серологических реакциях с участием вирусов растений. Сравнительное значение IgG и IgM иммуноглобулинов в различных описанных ниже серологических тестах варьирует в зависимости от характера антигена. Как правило, в тестах, используемых обычно при работе с вирусами растений (реакции преципитации, агглютинации и связывания комплемента), чаще фигурирует класс 7S (IgG). [c.360]

Дисульфидные мостики определяют механические свойства внеклеточных белков. Дисульфидные мостики обычны в белках, котог рые переносятся или действуют во внеклеточном пространстве типичными примерами служат змеиные яды и другие токсины, пептидные гормоны, пищеварительные ферменты, белки комплемента, иммуноглобулины, лизоцимы и белки молока. Кроме того, эти мостики играют важную роль в некоторых крупных структурах. Свойства вязкости и эластичности различных природных продуктов по крайней мере отчасти определяются дисульфидными мостиками между структурными белками [ПО]. Поперечные связи между молекулами кератина придают эластичность шерсти и волосу [110], когезионноэластичный характер теста из пшеничной муки определяется дисульфидами глютенина, а трехмерная сеть дисульфидов глютенина создает трудности при влажном помоле зерна. Таким образом, оказывается, что успехи в таких древних занятиях, как помол зерна, обработка шерсти и даже парикмахерское искусство, зависят от сложных конструкций дисульфидных связей [110]. [c.68]

Для повышения чувствительности тестов антигены или антитела адсорбируют на эритроцитах (РНГА, РОНТА, РТОНГА, РГадсТО, РРГ), метят их ферментами (ИФА), радиоактивными изотопами (РИА, РПГ), флюорохромами (РИФ) или же используют принцип лизиса эритроцитов при взаимодействии антигенов и антител в присутствии комплемента (РСК, РРГ). [c.273]

С целью выяснения влияния природы носителя на развитие толерантности к формальдегиду нами были проведены опыты с использованием в качестве толерогена его конъюгатов с гетерологичным и аутологичным носителем. Учитывая высокую реактогенность формальдегида к белкам, конъюгаты готовили ех tempore добавлением гаптена к разведенному сухому комплементу морских свинок (гомологичный носитель) и к свежей кроличьей сыворотке (гетерологичный носитель) в соотношении 1 100, что исключало присутствие гаптена в несвязанном виде. Конъюгаты вводили морским свинкам однократно внутрисердечно в количествах, соответствующих 1 и 0,5 мг формальдегида сенсибилизацию животных после 14 сут отдыха осуп1ествляли 20 эпикутанными аппликациями 4% водного раствора формальдегида. Состояние специфичной чувствительности подопытных животных оценивали по интенсивности кожного теста на формальдегид [c.73]

Описанный выше метод носит название цис/транс-тест или тест на комплементацию ГфункщЕОнальный тест на. алделизм -Яер.]. С его помощью определяют группу комплементации как протяженную единицу, все части которой должны быть дикого типа и находиться в одной хромосоме. Единичная мутация в любой части может нарушить функцию. Эта генетическая единица получила название цистрон. Согласно этой терминологии, две мутации в одном и том же цистроне не могут комплементи- [c.19]

Рис. 3.34. Принцип лимфотоксического теста. Клетка, содержащая определенный антиген, реагирует с соответствующим антителом и комплементом. Через поврежденную клеточную мембрану краситель трипановый голубой проникает в клетку, что указывает на то, что антиген клеточной поверхности распознан специфическим антителом.

Оценка гуморального иммунитета (В-системы) проводится путем определения количества В-лимфоцитов в крови реакцией иммунофлюоресценции с антисывороткой против иммуноглобулинов человека или путем выявления на В-лимфоцитах рецепторов для комплемента — с помощью теста розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами, несущими на себе комплекс антиэритроцитарные антитела-1-комплемент (ЕАС-розет-ки). Функциональная активность В-лимфоцитов оценивается косвенно по уровням сывороточных иммуноглобулинов (Ig) различных классов A,G, М. [c.105]

Главная система гистосовместимости у человека состоит из антигенов ЛАЧ, расположенных на плазматических мембранах большинства ядерных клеток. Эти многочисленные антигены, кодируемые кодоминантными генами (77 аллелей) пяти тесно сцепленных локусов в 6-й хромосоме, представляют собой наиболее полиморфную из известных систем у человека. Антигены выявляют с помош,ью стандартного двухэтапного цитотоксиче-ского теста, зависящего от комплемента для оценки жизнеспособности используется тест на исключение красителя (разд. [c.143]

Линия опухолевых клеток легкого человека 2563 (полученная из опухоли МАС-21) была использована Акесоном [37] непосредственно в качестве антигена для кроликов. При анализе полученной антисыворотки с помощью реакции связывания комплемента, иммунофлуоресцентного теста и метода насыщающего связывания в ней обнаружили антитела, специфические для антигенов нормальной ткаии почек. Эти антитела могли быть избирательно адсорбированы препаратами легочной ткани следовательно, существует антиген, общий для этих двух нормальных органов. [c.152]

Выбор используемой процедуры скрининга зависит от дальнейшего возможного использования моноклональных антител. Другими словами, если вы намерены получить моноклональные антитела, которые предполагаете использовать для лизиса клеток в присутствии комплемента, то и для скрининга следует использовать соответствующий тест (реакцию комплемент-за-висимого лизиса). Подобно этому, если моноклональные антитела предполагается использовать в реакциях преципитации илн для окрашивания заключенных в парафин препаратов тканей при иммуногистологических исследованиях, то именно эти методы и должны использоваться для скрининга гибридом. Тест, используемый для скрининга, в идеале должен удовлетворять следующим критериям [c.134]

Мер каптоэтанол (2-МЭ) может вызывать диссоциацию lgM-пентамеров, р результате. чего они утрачивают агглютинирующую способность. Поэтому добавление данного реагента приводит к Т о му, что в реакции агглютинации участвуют лишь IgG, что позволяет сравнивать титры. IgM и IgG. Антитела, связывающие комплемент (источником которого служит свежая сыворотка), в его присутствии вызывают лизис эритроцитов-мишеней. У большинства видов животных лишь некоторые подклассы IgG способны связывать комплемент в то же время IgM обладают более высокой комплемент-свя- Зывающей активностью. Поэтому антисыворотки с высоким Содержанием IgM имеют более высокий гемолитический титр, чем сыворот. ки, в составе которых преобладают JgG. Гемолитические тесты, в делом, более. чувствительны, чем агглютинационные— раз умеется, лишь в том случае, если участвующие в реакции антитела связывают комплемент. Поскольку 2-МЭ обладает способностью ингибировать связывание комплемента IgM, он заметно снижает гемолитический титр антисывороток с высо ким содержанием антител этого класса. В результа те можно. определить концентрацию IgM в сыворотке (ом. рис. 7.2). [c.241]

Титруют исслёдуемые сыворотки (например, к ЭБ в. прямом тесте) с использованием стандартного избытка комплемента. [c.246]

Сам по себе комплемент оказывает слабое антимикробное действие, но, вступая в контакт и адсорбируясь на поверхности специфических антител, усиливает их действие. В отсутствие комплемента активность некоторых антител полностьк> утрачивается. Поэтому содержание и уровень комплемента в крови можно использовать как тест, характеризующий со- [c.149]

ИФМ имеет ряд существенных преимуществ перед цитоток-сическими тестами, ELISA и РИА. Во-первых, с помощью ИФМ можно определять молекулы, присутствующие на клеточных поверхностях с плотностью до нескольких тысяч копий на клетку. Во многих случаях, когда методы ELISA на клеточных поверхностях, цитотоксические тесты или РИА оказываются недостаточно чувствительными, антигены плазматической мембраны удается определить с помощью ИФМ. Во-вторых, при исследовании ИФМ имеется возможность достаточно просто детектировать антитела практически всех классов иммуноглобулинов. Например, в настоящее время имеется несколько видов мышиных МА против каппа-легких цепей иммуноглобулинов крыс. Поскольку от 90 до 95% всех иммуноглобулинов крыс содержат каппа-легкую цепь, эти МА существенно улучшают возможности скрининга. В отличие от этого в цитотоксических тестах желательно, чтобы МА принадлежали к классу IgM, так как при этом фиксация комплемента обеспечивается с наибольшей эффективностью. В-третьих, при проведении ИФМ на проточном флуорометрическом клеточном сортере (ПФКС) для каждого определения связывания антител анализируется большое число клеток. Если для каждого образца имеется возможность просчитывать 5—10-10 клеток, то значительно уменьшается вероятность ошибок. [c.179]

Как замороженный, так н лиофилизироваиный комплемент оттаивают н разводят непосредственно перед употреблением и держат на льду. Д тя постановки лимфоцитотоксического теста иа одной паиелн необходимо 0,3 мл комплемента. [c.196]

Одна из предложенных модификаций (Berno o et al., 1976) основана на том, что антисыворотки к Рг-микроглобулину способны блокировать лимфоцитолиз, вызываемый антителами ан-ти-HLA. По этой методике антигены HLA-A, -В и -С маскируются птичьими антителами к 2-микpoглoбyлинy человека или F(ab ) 2-фрагментами кроличьих антител той же специфичности. Обработанные таким образом клетки не связывают комплемент и не реагируют с антителами анти-HLA (А, В, С) при 20°С, но могут вступать в цитотоксическую реакцию с антителами другой специфичности (не анти-HLA). Этот модифицированный тест [c.238]

Долю неотвечающих культур определяют, как правило, путем анализа культуральной жидкости, пробы которой отбирают автоматическим репликатором и наносят на индикаторный слой (Lefkovits, Kamber, 1972). Образцы культуральной жидкости, содержащие антитела, образуют в индикаторном слое зоны комплемент-зависимого гемолиза. Нередко кроме культуральной жидкости исследуют и клетки. В этом случае определяют количество АОК в каждой культуре. Когда концентрация взвеси доведена до единичных клеток, результаты традиционного флуктуа-цнонного теста трудно интерпретировать. Поэтому приходится прибегать к более сложному методу, получившему название анализа с помощью лимитирующих разведений . Этот анализ проводят в диапазоне таких доз лимфоидных клеток, в котором можно с уверенностью ожидать, что ответ лимитируется только титруемым типом клеток. [c.365]

Серологическое типирование тканей производят при помощи микролимфоцитотоксического теста. К испытуемым клеткам добавляют типирующие сыворотки (например, анти-Ни -В8), комплемент и краситель трипановый синий. Гибель клеток, определяемая по их окрашиванию, говорит о том, что тест-клетки несут определяемый антиген (в данном случае НЬА-В8). На микрофотографии справа видны окрашенные трипа-новым синим (темные) погибшие клетки. [c.500]

При помощи этих тестов в исследуемой сыворотке определяют отдельные компоненты комплемента. Определение заключается в том, что к суспензии сенсибилизированных эритроцитов добавляют 1) специфический С-реагент, содержащий все необходимые для лизиса компоненты комплемента, за исключением одного, и 2) исследуемую сыворотку. Например, чтобы определить компонент С4 в исследуемой сыворотке, к сенсибилизированным антителами эритроцитам добавляют сыворотку морской свинки с дефицитом С4 (С-реагент). Если исследуемая сыворотка содержит С4, произойдет гемолиз, и наоборот, в отсутствие С4 гемолиза не будет. В таблице приведены комбинации реагентов, используемых для определения каждого из компонентов комплемента. Сенсибилизацию эритроцитов антителами производят с таким расчетом, чтобы при взаимодействии ЭСА с комплементом получить определенную степень гемолиза. Реагентами могут быть сыворотки, исходно не содержащие один из компонентов комплемента или подвергнутые физико-химической обработке для удаления либо инактивации того или иного компонента. Можно проводить количественное определение компонентов, используя, например, простой радиальный гемолиз или реакцию 50 % гемолиза в пробирках. (ЭСА - эритроциты, сенсибилизированные антигеном ЭСАК - эритроциты, сенсибилизированные антигеном и комплементом ЭГТА - этиленгликоль-тетраацетат.) [c.538]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология