Клетки обработка ультразвуком

Нередко для полного разрушения клетки требуются значительные усилия. Здесь может быть полезным, кроме механического разрушения, такое воздействие, как чередующееся быстрое замораживание и оттаивание. Нередко хорошие результаты дает быстрое замораживание в жидком воздухе или азоте с последующим измельчением замороженного препарата в ступке или фарфоровой мельнице. Для особо прочных клеток (например, некоторых бактериальных), а также для глубокого разрушения отдельных элементов животной клетки (например, митохондрий) рекомендуется обработка ультразвуком. Варьируя мощность источника и частоту колебаний, можно, как правило, подобрать режим воздействия, при котором не происходит денатурации извлекаемого белка. [c.15]

При оценке численности микроорганизмов, особенно в естественных субстратах (прежде всего в почве), необходимо помнить, что их клетки часто находятся в прикрепленном (адгезированном) состоянии или в виде микроколоний. Поэтому перед началом подсчета их нужно отделить от частиц субстрата и друг от друга (десорбировать). Выбор метода десорбции (механическое перемешивание суспензии клеток, растирание, обработка ультразвуком, применение поверхностно активных веществ и т. д.) определяется особенностями исследуемого субстрата. [c.117]

В научных исследованиях, а также в биохимической технологии часто необходимо разрушить клеточную стенку. Для этих целей используют механические дезинтеграторы, ультразвук, ли-тические ферменты. Полученную после такой обработки массу, содержащую активные ферменты и неразрушенные структурные элементы клетки, называют клеточным гомогенатом. [c.15]

Одной из серьезных проблем, возникающих по мере па-лучения заготовок вирусов герпеса, является их очистка от клеточного материала, поскольку большая часть вируса тесно связана с клетками. Клетки разрушают, проводя ряд циклов замораживания и оттаивания, однако это может привести и к снижению титра вируса. Обработка клеток ультразвуком небезопасна из-за возможного образования аэрозолей, содержащих инфекционный вирус. Поэтому лучше всего проводить дезинтеграцию в ультразвуковой бане в закрытом сосуде. К сожалению, мы не можем рекомендовать какую-либо определенную марку ультразвукового дезинтегратора. Необходимо проверять эффективность каждого из них. Вирусные заготовки обрабатывают ультразвуком до полного разрушения клеток. [c.274]

Клетки микроорганизмов разрушать труднее. Для этого используют ультразвук, высокое давление, замораживание— оттаивание, обработку определенными веществами и др. [c.101]

Антиген. Готовили чистую культуру Е. histolyti a шт. НКЭ, как описано (Diamond, 1968). Собирали биомассу через 96 ч центрифугированием при 4°С. Осадок промывали 3 раза при 4 "С и разрушали клетки обработкой ультразвуком в ледяной бане (Зх 1 мин). [c.379]

Клетки можно разрушить и физическими методами немеханическими (например, с помощью осмотического шока или быстрого многократного замораживания и оттаивания) или механическими (обработкой ультразвуком, с помошью шаровой мельницы, гомогенизации под давлением, соударения). Обычно после обработки немеханическими методами многие клетки остаются неповрежденными. Напротив, механическое разрушение высокоэффективно, что делает его более привлекательным. Особенно часто ультразвуковые излучатели, генерируюшие высокочастотные звуковые волны, используют для обработки малых объемов. Клетки разрушаются при этом под действием гидродинамических сил (сдвига слоев жидкости друг относительно друга, кавитации и т. д.). [c.366]

Адагуляция микроорганизмов с частицами минерала характерна только для живых микроорганизмов. При этом связь между клеткой и частицей оказывается настолько прочной, что интенсивное перемешивание, промывка, обработка ультразвуком и другие воздействия не вызывают разрушения этих агрегатов. Убитые (воздействием теплоты или рентгеновских лучей) клетки полностью теряют способность к гетерокоагуляции, независимо от типа минерала или микроорганизма. [c.111]

Липосомы — это сферические образования, оболочки которых состоят из фосфолипидов. Их можно получить в результате резкого встряхивания или обработки ультразвуком водных эмульсий фосфолипидов. С помощью липосом в протопласты растений были введены РНК вируса табачной мозаики, ДНК Ti-плазмиды А. tumefa iens, а также целые метафаз-ные хромосомы. К преимуществам систем переноса с помощью липосом можно отнести их низкую токсичность по отношению к клеткам и возможность использования на множестве растений, клетки которых способны утилизировать липосомы. В настоящее время этот способ трансформации применяется все реже из-за его технической сложности и низкой трансформирующей активности (0,5—1 %). [c.62]

В интактных клетках бактерий дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК) включена в структуру нуклеоида. Эта структура стабилизируется рибонуклеиновой кислотой (РНК), и поэтому присутствие следов рибонуклеазы приводит к разворачиванию нуклеоида во время лизиса и образованию очень вязкого раствора высвободившейся ДНК. Трудности, связанные с высокой вязкостью, можно преодолеть несколькими путями. Цепи молекул ДНК можно разрезать короткой обработкой ультразвуком или гомогенизацией суспензии лизирован-ных клеток в ножевом микроизмельчителе. Можно также добавить в раствор дезоксирибонуклеазу, но для функционирования этого фермента необходим Mg + в концентрации не менее 0,1 мМ. Если сферопласты ли-зируются в присутствии ЭДТА, то требуется избыток M.g + по сравнению с содержанием ЭДТА. [c.147]

В критических и необычных случаях раствор следует подбирать специально. Если нужно задержать рост клеток, в качестве лучшего раствора для разведения может послужить питательная среда без источников углерода. При использовании солевого буфера с желатиной, как правило, требуется корректировка pH и осмотического давления. Для многих анаэробных бактерий раствор для разведения должен содержать какой-штбудь восстановитель и в нем не должно быть растворенного кислорода (разд. 6.6.3 и 6.6.4). При работе с микроорганизмами могут возникать проблемы, связанные с адсорбцией бактериальных клеток на поверхности стеклянной посуды (см. Введение к гл. И). Трудности могут появиться и при электроподсчете клеток (разд. 11.1.2), а также в других случаях, когда, например, клетки пе расходятся после деления или агрегируют благодаря адгезивным свойствам поверхности или за счет электростатического заряда. Такие группы клеток иногда можно диспергировать путем физических воздействий— очень кратковременной обработкой ультразвуком или интенсивным перемешиванием в миксере [c.232]

Задача введения лекарственного препарата в клетки может быть решена путем создания контейнеров-переносчиков типа липосом или мицелл. Оболочка липосомы представляет собой однослойную или многослойную поверхность, образованную, в свою очередь, бислойной структурой, созданной соединениями, имеющими два гидрофобных, достаточно протяженных участка и гидрофильную группу. Гидрофобные концы слипаются между собой и образуют пленку, обе стороны которой гидрофильны Чаще всего основой таких структур является фосфатидилхолин. Длина гидрофобной цепи около 14—18 атомов углерода, цепь иногда имеет двойную связь в 9—10-м положении. Для каждого типа фосфолипидов имеется определенная температура, при которой твердая структура расплавляется. Фосфолипиды, содержащие насыщенные углеводородные цепи, плавятся уже при физиологических температурах. Липосомы формируются путем обработки ультразвуком водной дисперсии липидов выше температуры их застывания. Если используется непредельный липид, его можно заставить полимеризоваться под действием УФ-из-лучения и получить липосому с прочной оболочкой. Лекарственное начало может быть введено внутрь липосомы, если оно гидрофильно, или в стенку, если оно гидрофобно. Диаметр липосом составляет от 20 до 10 нм, следовательно, применять их как контейнеры для доставки ферментов нецелесообразно, если нет возможности с точностью нацелить липосому на определенную клетку. Однако липосомы имеют преимущества, поскольку поверхность их может быть легко модифицирована ферментом, связанным с длинноцепочечным углеводородом. Липосома, специфически или неспецифически адсорбировавшись на клетке, может быть поглощена ею путем эндоцитоза, и фермент внутри [c.130]

Под действием ультразвука сокращается время замачивания сырья с нескольких часов (для корневищ с корнями валерианы, девясила, аира оно равно 6-8 ч) до нескольких минут (30 мин замачивания и 10 мин обработки ультразвуком) для его полного набухания. Ультразвуковые волны создают знакопеременное давление, кавитацию и звуковой ветер , в результате чего увеличивается растюрение содержимого клетки, повыщается скорость обтекания частиц сырья, в пограничном диффузионном слое экстрагента образуются турбулентные и вихревые потоки. Ультразвук увеличивает коэффициент внутренней диффузии. Изменяя мопщость ультразвукового поля при экстрагировании растительного сырья, можно регулировать [c.107]

Для максимального выделения вируса из зараженной клетки с помощью ультразвука необходимо предваритель но подобрать оптимальные условия обработки (мощность, время), чтобы полностью разрушить клетки, не уменьшая биологической активности данного вируса Обычно обработку ультразвуком сочетают в комбинации с другими способами дезинтеграции, такими, как осмотический шок клеток в дистиллированной воде, многократное заморажи- [c.37]

Препарат глюкозоизомеразы получают двумя способами клетки мицелия подвергают определенной обработке с целью фиксирования фермента внутри клетки и используют эту биомассу для изомеризации фермент выделяют обработкой водной суспензии клеток ультразвуком или просто экстракцией растворителями. Для очистки применяют диализ. [c.136]

Ткань измельчают либо в мясорубке, либо, если нужна более мягкая обработка, в гомогенизаторе. Клетки микробов чаще всего разрушают с помощью ультразвука или продавливанием через пресс под высоким давлением. При фракционировании очень важно подобрать нужное значение pH и состав буфера, а при выделении субклеточных органелл— осмотическое давление. Для сохранения целостности органелл часто в качестве суспендирующей среды используют 0,25 М сахарозу, к которой добавляют Mg U, а также реагент, образующий комплекс с металлами, например этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) (табл. 4-2). Растворимые ферменты обычно экстрагируют без добавления сахарозы, но при этом используют восстановители — глутатион (дополнение 7-Б), меркаптоэтанол или дитиотреитол (разд. 3.3.а). [c.158]

Осадок клеток ресуспендируют в 2 мл соответствующего ледяного буфера (например, 0,1 М калий-фос-фатного буфера, pH 7,0), используя гомогенизатор типа Vortex. Если клетки склонны к агрегации, то для получения суспензии отдельных клеток используют мягкую обработку их ультразвуком или мягкую гомогенизацию (в гомогенизаторе или размельчителе тканей). Для культур, которые особенно плохо поддаются ресуспендированию, можно вначале добавить к буферу 0,01% (вес/ [c.415]

Выделению мембран предшествует этап разрушения клеток и тканей. Для этого подбирают методику, позволяющую не только эффективно разрушать клетки, но и сохранять нативную структуру мембран, подлежащих выделению. При выделении большинства мембран животных клеток используют гомогенизацию в гомогенизаторах Даунса и Поттера со стеклянными стенками и тефлоновым пестиком. Для разрушения клеток применяют также вращающиеся ножевые гомогенизаторы. Предварительно свежевыделенную ткань измельчают и промывают водой. В гомогенизаторе клетки разрушаются за счет сдвиговых усилий, возникающих при продавливании суспензии через узкий зазор между тефлоновым пестиком и стеклянной стенкой. При гомогенизации следует тщательно подбирать значение pH, ионную силу и состав буферного раствора. Часто в качестве суспендирующей среды используют раствор сахарозы в концентрации 0,25 моль/л с добавлением хлорида магния, комплексообразователей (например, ЭДТА), восстановителей (дитиотреитол, Р-меркаптоэтанол), С целью облегчения последующего разрушения растительных, грибных и бактериальных клеток их сначала обрабатывают ферментами, расщепляющими компоненты клеточной стенки (лизо-цим, целлюлаза). Более жесткая обработка клеток предусматривает их растирание с помощью абразивных материалов (стеклянных шариков, песка, оксида алюминия), разрушение ультразвуком и путем экструзии (продавливание суспензии клеток через отверстия под давлением). Полученный гомогёнат клеток процеживают и используют дальше для получения мембран. [c.217]

Через определенное время после введения метки зараженные клетки промывают физиологическим раствором, снимают с поверхности культурального сосуда стерильной резиновой палочкой или струей физиологического раствора и осаждают 5 мин при 2000 g или при 10 000 g (в микроцентрифуге) 30 с. Если меченые белки необходимо разделить электрофорезом в полиакриламидном геле в присутствии ДДС-Na (см. рис. 6.7), осадок ресуспендируют в буфере для нанесения образцов, объем которого равен исходному объему культуральной среды. Альтернативный, упрощенный метод обработки зараженных клеток состоит в том, что буфер для нанесения образцов добавляют непосредственно к клеточному монослою (не менее 200 мкл раствора на 10 клеток) и далее извлекают лизат из культурального сосуда. Если лизат оказывается очень вязким из-за высокой концентрации ДНК, его обрабатывают ультразвуком или пропускают через тонкую иглу для инъекций. Все вирусоспецифические белки хорошо разделяются в содержащих ДДС-Na 15—17,5%-ных полиакриламидных гелях с помощью диск-электрофореза Лэммли [32]. [c.197]

Процедура. Надо отметить, что разрушение животных клеток под действием ультразвука при определенной концентрации вязкости суспензии и интенсивности озвучивания происходит за 2—5 минут. При такой кратковременной однократной обработке тогие вирусы не инактивируются [16, 589], Например, для извлечения аденовируса типа 12 зараженные клетки ресуспендировали в 0,01 М трисбуфере pH 8Д до концентрации 1—2x10 на 1 мл и дезинтегрировали ультразвуком при интенсивности 10 Кгц/сек в течение 5 минут. Обломки клеток удаляли умеренным центрифуги рованием (3000 об/мин в течение 30 минут), Надосадочная жидкость, содержащая вирус, использовалась для дальнейшей очистки [735]. [c.37]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология