Промотор эффективность сила

Плазмидные векторы. Как уже отмечалось, для клонирования и экспрессии генов в клетках Е. oli обычно применяют различные модификации вектора pBR322, содержащие промоторы фага Л, лактозного и триптофанового оперона и их операторные участки. Благодаря последним экспрессию клонируемых генов можно регулировать, если плазмидная или бактериальная ДНК несет гены соответствующих репрессоров. Из многих вышеперечисленных факторов, влияющих на экспрессию генов, решающими являются сила промотора и структура сайта связывания рибосом (RBS-сайта). Напомним, что этот сайт включает в себя начальные кодоны гена, поэтому нет простых путей, обеспечивающих эффективную экспрессию чужеродных генов в бактериях. Такой экспрессии добиваются двумя принципиально различными подходами (схемами) — путем [c.329]

Эффективность инициации яа разных про.моторах, их сила , существенно различается если с некоторых промоторов инициируется всего одна-две молекулы РНК за период деления клетки, то с других (например, с промоторов генов рибосомных РНК) инициация происходит раз в одну-две секунды. Частота, с которой инициируется транскрипция при насыщающей концентрации субстратов, зависит главным образом от равновесной константы образования закрытых промоторных комплексов и константы скорости превра- [c.138]

Уровень ДНК. На этом уровне эффективность экспрессии зависит 1) от силы промотора 2) наличия терминатора транскрипции 3) отсутствия внутригенных терминаторов транскрипции 4) числа копий гена 5) суперспирализйции рекДНК 6) от расположения чужеродного гена по ходу движения репликативной вилки. Рассмотрим по очереди эти факторы. [c.316]

Горячая прокатка алюминия. При горячей прокатке алюминия применяют эмульсии типа масло в воде с содержанием масла от 2 до 5 % (об.). Концентрат для прокатки состоит из 70—80 % нафтенового или парафинового минерального масла, 15—20 % анионных и/или неионных эмульгаторов и 5—10 % активных компонентов (например, производных жирных кислот) он также содержит противозадирные присадки типа эфиров фосфорной кислоты, растворы промоторов и бактерициды. Для оценки масел, применяемых при прокатке алюминия, используют различные критерии налипание металла на валки, коэффициент трения и проскальзывание [11.205]. Главная цель применения эмульсий — обеспечить эффективное охлаждение, максимальное обжатие в силу снижения коэффициента трения, низкий расход энергии и высокое качество поверхности проката [11.206]. Толщина образующейся масляной пленки влияет на коэффициент трения, количество шлама и налипание металла на валки. Расход, давление, температуру и способ подачи эмульсии следует выбирать для каждой прокатной клети путем испытаний. Причиной дефектов поверхности катаной полосы часто является неоднородность температурного поля валков, что отрицательно влияет на их геометрию [11.207]. При горячей прокатке охлаждение имеет первостепенное значение, трение — лишь вторичное. [c.390]

В бактериальной клетке существует очень большое число промоторов. различающихся по ну1С1еотидной последовательности и эффективности инициации синтеза РНК. Часто их условно делят на сильные и слабые. Сильные промоторы обеспечивают высокий уровень синтеза РНК с оперонов, находящихся под их контролем, а слабые — соответственно низкий уровень. Использование промоторов различной силы является одним из способов регуляции синтеза РНК в клетке. Количество синтезированной РНК определяет уровень биосинтеза белка. Многие белки требуются клетке на протяжении всей ее жизни. Их количество зависит главным образом от эффективности промоторов, инициирующих синтез соответствующих мРНК. Однако у клетки существуют и более радикальные способы регуляции на уровне транскрипции. Она их использует в случае необходимости для того, чтобы включать или выключать транскрипцию некоторых генов, ускорять или замедлять ее. [c.413]

Модификация персептрона, учитывающая некоторые особенности распознавания сайтов, была применена к промоторам E. oli (Александров, Миронов, 1987). Как мы уже отмечали, близлежащие сайты могут оказывать заметное влияние друг на друга, а значит и эффективность (сила) сайта может значительно варьировать в зависимости от окружающих его последовательностей. Поэтому у нас нет гарантии, что промотор, с которого идет транскрипция в каком-то одном окружении, будет работать в другом окружении, например рядом с гораздо более сильным промотором. Эти соображения заставляют нас отказаться от граничного числа R, которое служило критерием принадлежности исследуемой последовательности к множеству сайтов. [c.139]

Сообщений о работе установок алкилирования на промотированной серной кислоте очень мало. В одном из патентО В упоминается, что высокая технико-экономиче-ская эффективность использования промотора Rex-121 была проверена в США на шести промышленных установках. В другом сообщении [69] приводятся следующие результаты применения Rex-121 на одном из заводов фи мы Great Northern Oil в Пайн Бенде (М ннисота). Было сделано два пробега с использованием промотора, первый продолжительностью три недели, второй — более двух недель (точных данных нет). Количество добавляемого промотора не указано. Отмечается, что добавка его с-блегчает эмульгирование вследствие снижения вязкости эмульсии перепад давления на каждом реакторе понизился на 0,04 ат, сила тога на электромоторе контактора уменьшилась на 0,5 а. [c.86]

На основании сравнения последовательностей разных промоторов выведена каноническая последовательность промотора, в которой представлены наиболее часто встречающиеся в каждом положении нуклеотиды. Каноническая последовательность участка —10 — ТАТААТ (эта последовательность называется также блоком Приб-нова), участки —35 — TTGA A (при рассмотрении промоторов обычно приводят последовательность только той нити ДНК, которая в транскрибируемой части совпадает с последовательностью РНК, т. е. является незначащей). Каноническая последовательность промотора несимметрична, что отражает его функциональную несимметричность. Действительно, промотор определяет не только место начала транскрипции, но и ее направление. Среди природных промоторов пока не обнаружено ни одного с канонической последовательностью, но искусственно сконструированный промотор с канонической последовательностью отличается очень высокой эффективностью (этот результат не был заранее очевиден усредненная последовательность вполне могла бы обладать средними свойствами). О том, что каноническая последовательность является наиболее эффективной, свидетельствуют и результаты многочисленных данных по мутационным изменениям последовательности промоторов изменения, приближающие последовательность промотора к канонической, как правило, увеличивают его силу, тогда как изменения, уменьшающие его сходство с канонической,— уменьшают его силу. Изменения нуклеотидной последовательности вне участков —10 и —35 обычно слабо сказываются на силе промотора. Знание этих закономерностей, однако, еще не позволяет надежно предсказывать силу промоторов и находить промоторы, рассматривая последовательность ДНК, хотя РНК-полимераза делает это очень быстро. [c.141]

Приступая к конструированию ifl -промотора, Де Боер и его коллеги ставили своей целью создание на основе двух разных сильных регулируемых промоторов еще более сильного промотора, способного обеспечивать высокий уровень экспрессии чужеродных белков. Когда они начинали свои исследования, нуклеотидные последовательности большинства прокариотических промоторов, в первую очередь Е. соИ, были >0Ke установлены, однако конкретные свойства, обусловливающие их эффективность, оставались неизвестными. Было показано, что почти все мутации, влияющие на силу промотора, локализуются в -10- или в -35-областях (находящихся на расстоянии 10 или соответственно 35 п. и. до точки инициации транскрипции). Бо- [c.120]

В реакции Фишера - Т1юпша на основе СО и Н2 гидрирующая активность железного катализатора сильно зависит от добавки электронных промоторов, таких, как катионы щелочных металлов в виде их карбонатов. Их эффективность зависит от силы соответствующего основания, изменяясь в ряду КЬ > К > Ка > 1л. [c.641]

При добавлении 1 % этого вещества к каучуку скорость деструкции при пластикации в инертной среде становится такой же, как при пластикации на воздухе. В этом случае выбранный акцептор радикалов, так же как и кислород, связывает фактически все полимерные радикалы, и, таким образом, скорость реакции определяется и ограничивается скоростью механо-химической деструкции, обусловленной силами сдвига. Присутствие других активных акцепторов свободных радикалов также вызывает подобное ограничение максимальной скорости реакции. Менее активные акцепторы радикалов не могут столь эффективно конкурировать с реакциями типа (Х1У-3) и (Х1У-4) и поэтому обусловливают скорости реакций деструкции, средние между скоростями реакций в присутствии кислорода или тиофенола и скоростями реакций в отсутствие акцепторов свободных радикалов. На рис. Х1У-3 приведена диаграмма сравнительной эффективности действия типичных акцепторов свободных радикалов [10]. (Для технологии каучука важно, что многие так называемые пептизаторы не только связывают свободные радикалы, но и промотируют окислительную деструкцию в процессе горячей пластикации. Однако они не обязательно являются промоторами окисления при последующем, старении и могут быть даже замедлителями окисления.) [c.479]

Экспериментсшьно установлено два типа связи водорода с медью,никелем, платиной, железом и вольфрамом [44,45]. При г-типе связи атом водорода заряжен отрицательно и расположен над поверхностным атомом металла на расстоянии 0,25 нм при 5-типе атом водорода заряжен положительно и находится между ионами металла на глубине -V 0,05 нм. При адсорбции 5-типа водород ведет себя, подобно растворенному водороду в решетке металла. Большое влияние на проникновение водорода в металл оказывают стимуляторы или промоторы наводороживания. К основным стимуляторам относятся гидриды элементов И / , Аз, 5в, В / и и /5, 5е, Те/ групп, которые увеличивают долю внедряющегося в сталь водорода 43,46,47]. Только гидриды перечисленных элементов проявляют катализирующее действие. Слои элементных Аз, 5в, 5е и Те, которые в определенных условиях осаждаются на поверхность металла, тормозят проникновение водорода, т.е. действуют как ингибиторы наводороживания 43]. Катализирующее действие гидридов может достигаться за счет торможения рекомбинации или в результате облегчения разряда в обоих случаях растет степень заполнения поверхности адсорбированными атомами водорода. Предполагается, что промотирующие гидриды снижают энергию активации процесса Н, уменьшая силы сцепления между атомами металйа 47]. На рис. 2 показана относительная эффективность новодороживания стальных катодов под действием некоторых элементов, введенных в количестве 10 мг в 10%-ный раствор серной кислоты [46]. Как [c.17]

В представленных последовательностях промоторов Е. соН, наиболее часто используемых в генно-инженерных конструкциях для экспрессии в этих клетках, отмечены различия (выделены курсивом), которые оказывают влияние на эффективность использования промотора РНК-полимеразой ( силу промотора). В конечном счете, сила промотора определяется легкостью образования так называемого открытого комплекса между РНК-по-лимеразой и промотором, в котором происходит стабильное локальное расплетение цепей ДНК, что необходимо для инициации транскрипции. Естественно, легкость такой ферментативной денатурации ДНК зависит от первичной структуры окружающих этот участок последовательностей нуклеотидов. Консенсусная последо- [c.107]

Эмульгируемые СОЖ. Когда в процессе резания требуется эффективный отвод тепла, следует применять смешиваемые с водой СОЖ, так как для обеспечения желаемого теплоотвода нужны высокие значения удельной теплоемкости, удельной теплопроводности и удельной теплоты парообразования. В силу своих термодинамических свойств вода гораздо больше подходит для этой цели, чем масло. Смазочно-охлаждающие эмульсии типа масло в воде представляют собой стабильные дисперсии минерального масла в воде из-за высокого поверхностного натяжения между водой и маслом такие эмульсии могут быть получены только при добавлении эмульгаторов. Внешний вид эмульсии зависит от размера капель в молочной эмульсии размер капель около 2 мкм, в прозрачной — 0,05 мкм. Смешанные с водой СОЖ состоят из минерального масла, эмульгаторов и присадок, повышающих антикоррозионные свойства (например, алканоламидов), или снижающих склонность к пенообразованию (например, высших это-ксилированных жирных спиртов). Масла содержат также биоциды (триазины) для предотвращения бактериального заражения и промоторы. Противозадирные СОЖ, смешанные с водой, кроме того, содержат хлор-., серо- и фосфорсодержащие соединения и растительные или животные масла. [c.376]

СОСТОЯНИИ. Физическая адсорбция азота позволяет установить общую площадь поверхности. Низкотемпературная (—183°) хемосорбция СО является показателем доли поверхности, занятой атомами железа. Для приблизительно чистого железного катализатора № 973 отношение объема хемосор-бированной окиси углерода к объему физически адсорбированного азота при монослойном покрытии равно 1,13. Полученная величина не является ошибочно завышенной, так как слой хемосорбированных молекул может быть упакован более плотно, чем слой, удерживаемый физическими силами. Присутствие промоторов уменьшает эту величину, причем окись калия оказалась наиболее эффективной. Двуокись углерода хемосорбируется на окиси калия, находящейся на поверхности катализаторов. Это явление может служить основой для определения доли площади поверхности, занятой каждым компонентом катализатора. Повидимому, в свободных от щелочей катализаторах № 954 и № 424 промоторы-окислы занимают соответственно около 55 и 35% поверхности. 1,07% окиси калия покрывает около 70% поверхности катализатора № 930. В катализаторе. № 958 около 62% поверхности состоит из атомов железа, 27%—из окиси калия и оставшиеся 11%—из окиси алюминия. Оказалось, что на поверхности катализатора № 931 нет свободной окиси алюминия. Возможно, что на поверхности окись алюминия связана с окисью калия. Таким образом, концентрация промоторов на поверхности выше, чем в объемной фазе. Это явление сильнее выражено для окиси калия, чем для окиси алюминия. Такое заключение согласуется с тем наблюдением, что щелочь легко улетучивается из однократно промотированного катализатора и может быть легко экстрагирована водой из невосстановленного, однажды и дважды промотированного катализатора. [c.55]

Мутация, локализующаяся в области блока Прибнова и усиливающая транскрипцию, обнаружена в /ас-промо-торе. Промотор дикого типа имеет структуру TATGTT. Мутация, усиливающая транскрипцию, приводит к возникновению последовательности TATATT. Таким образом, ее эффект состоит в увеличении степени гомологии со среднестатистической последовательностью. Должна существовать какая-то причина, в силу которой это увеличение эффективности не произошло спонтанно и не было закреплено отбором у бактерий. (Очень небольшое число других мутаций, усиливающих транскрипцию, было обнаружено в участке — 10. Все они возникают в промоторах, у которых гомология с блоком Прибнова слищком незначительна, чтобы можно было понять механизм действия этих мутаций. Однако вполне возможно, что они повышают степень гомологии со среднестатистической последовательностью.) [c.145]

Возможность экспрессии клонированных эукариотических генов в клетках Е. соИ способствовала углубленному изучению множества белков, представляющих интерес для фундаментальных научных исследований и медицины. В тех случаях, когда нативный негибридный белок экспрессируется недостаточно эффективно, часто экспрессия белков или их фрагментов в виде гибридов с полипептидами Е.соИ, такими, как -галактозидаза, оказывалась более успешной. К тому же гибридные белки можно легко очищать с помощью хроматографических методов, разработанных для -галактозидазы. Эукариотические белки, экспрессируемые в составе гибридных продуктов, были с успехом использованы при изучении иммунологически важных участков поверхностных антигенов [1], функций рекомбинантных полипептидов [2], при получении иммунологических зондов, необходимых для исследования ранее не изученных антигенов [3—6], для экспрессии вариантных форм белковых субъединиц и для выделения и исследования клонов ДНК из экспрессирующихся библиотек генов [8—10]. Технология работы с экспрессирующими векторами достигла столь высокого уровня развития, что стало возможным осуществлять в клетках Е. соН достаточно эффективную экспрессию практически любой кодирующей последовательности с образованием гибридного продукта, который можно выделить с помощью разнообразных биохимических методов и использовать его либо в различных функциональных исследованиях либо в качестве иммуногена. Синтез чужеродного полипептида в виде гибридного белка с -галактозидазой, по всей вероятности, значительно увеличивает стабильность этого полипептида в клетках Е. соИ. По-видимому, стабильность белка, а не сила промотора — наиболее важный фактор для успешной экспрессии рекомбинантных белков в бактериях. [c.138]

Показано, что Ест не требует строгого сохранения последовательностей районов -35 и -10, и поэтому данный основной вариант РНК-полимеразы Е. соН взаимодействует с большим количеством различных промоторов и промотороподобных участков на молекулах ДНК. Разные промоторы функционируют с различной эффективностью. Так называемые сильные (эффективные) промоторы инициируют транскрипцию с высокой частотой. Именно такими промоторами обычно предпочитают манипулировать при проведении генно-инженерных экспериментов. На силу промотора существенно влияют последовательности областей -35 и -10, а также расстояние между ними. Например, выявлена мутация UV5, которая усиливает транскрипцию с промотора лактозного оперона. Секвенирование показало, что мутация затрагивает область -10 промотора и эта область, имеющая в промоторе дикого типа р/дс структуру TATGTT, в pia uvs изменена так, что соответствует наиболее часто встречающейся последовательности ТАТААТ (рис. 3.2). [c.143]

Последовательности, 01фужающие относительно высококонсервативные районы -35 и -10, также влияют на силу промотора. Однако закономерности этого влияния пока не определены, и поэтому по последовательности нуклеотидов эффективность промотора оценить невозможно. Каждый промотор индивидуален, и его применимость для решения тех или иных задач может быть оценена лишь экспериментально. [c.143]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология