Разделение и идентификация нуклеотидов

Разделение и идентификация нуклеотидов [c.48]

Идентификацию нуклеотидов проводили по спектру поглощения в ультрафиолетовой области, по фосфору и по расположению на бумаге относительно метчиков. Изображение хроматограмм, полученных при разделении нуклеотидов из проводящих пучков и паренхимы черешков сахарной свеклы, дано на рис. 2. [c.253]

Второй раздел практикума ставит своей целью познакомить студентов с особенностями выделения, фракционирования, идентификации и количественного определения различных природных азотсодержащих < оединений. белков, пептидов, аминокислот, нуклеиновых кислот, нуклеотидов и пр Предлагаемые экспериментальные работы включают аиболее широко используемые в лабораторной практике современные методы разделения и анализа этих соединений различные виды электрофореза, хроматографии, спектрофотометрии, колориметрии и др. Работа проводится как на готовых коммерческих препаратах высоко- и низкомолекулярных азотсодержащих соединений, так и на препаратах, выделяемых студентами из различных тканей лабораторных животных. [c.79]

В заключение отметим, что еще не созданы предпосылки для действительно автоматического анализа последовательности нуклеотидов, поскольку разработанные методы и аппаратура позволяют автоматизировать только часть процессов — разделение и идентификацию продуктов расщепления (см. Разделение низкомолекулярных компонентов нуклеиновых кислот ). [c.94]

Из числа кислотных систем растворителей применяются главным образом смеси Сз—С5. Системы Сз и С4 особенно эффективны при разделении оснований и нуклеозидов система С4 пригодна для разделения гидролизатов с последующей спектрофотометрической идентификацией их компонентов. Система С5 очень неудобна в работе из-за ее резкого неприятного запаха, однако она обладает исключительно высокой разделяющей способностью в отношении свободных нуклеотидов. [c.127]

Используемые при разделении нуклеотидов сильноосновные анионообменные смолы (а в случае нуклеозидов и оснований — сильнокислые катионообменные смолы) не разрушаются при давлении 180—300 атм. Кроме того, чтобы можно было обеспечить быстрый массоперенос и быстрое установление равновесия, частицы смолы должны иметь малый диаметр — от 3 до 20 мкм или в случае ионообменников пленочного типа — очень тонкий слой смолы. Быстрый массоперенос также увеличивает скорость регенерации по окончании разделения способом градиентного элюирования. В точности идентификации компонентов можно быть уверенным в том случае, если используемые смолы в течение длительного периода времени дают один и тот же удерживаемый объем для определенного соединения. [c.302]

Электрофорез на бумаге с последующей хроматографией на бумаге представляет удобный метод разделения присутствующих в рибонуклеазных гидролизатах нуклеотидов и олигонуклеотидов (вплоть до тетрануклеотидов) [163]. Разделение, идентификация и количественное определение этих фрагментов дает некоторую информацию [c.392]

Выделение и идентификацию компонентов нуклеиновых кислот производят с помощью физико-химических методов. Очень важную роль в разделении сложных смесей играют хроматографические методы ( см. 15.1). Пиримидииовые и пуриновые основания, обладающие заметным поглощением около 260 нм, обычно идентифицируют с помощью УФ-спектроскопии (см. 15.3.1). Поскольку нуклеотиды имеют кислотный характер и способны находиться в ионизированном сосюя НИИ, то для идентификации их используют также электрофорез (см. 15.1). [c.444]

В девятом издании Определителя бактерий Берги все обнаруженные организмы, отнесенные в царство Prokaryotae, разделены на 33 группы. Признаки, по которым осуществляется разделение на группы, как правило, относятся к категории легко определяемых и вынесены в названия групп, например грамотрицательные аэробные палочки и кокки (группа 4), анаэробные грамотрицательные кокки (группа 8), грамположительные палочки и кокки, образующие эндоспоры (группа 13), скользящие бактерии, образующие плодовые тела (группа 24). Основная идея классификации по Берги — легкость идентификации бактерий. Для осуществления этого используют совокупность признаков морфологических (форма тела наличие или отсутствие жгутиков капсулы способность к спорообразованию особенности внутриклеточного строения окрашивание по Граму), культуральных (признаки, выявляемые при культивировании в лаборатории чистой культуры), физиолого-биохимических (способы получения энергии потребности в питательных веществах отношение к факторам внешней среды нуклеотидный состав и последовательность нуклеотидов в молекуле ДНК наличие и характер минорных оснований в ДНК нуклеотидный состав рибосомальной РНК последовательность аминокислот в ферментных белках с аналогичными функциями). [c.158]

При разделении защищенных нуклеозидов, например ано-мерных рибофуранозилпроизводных урацила, в качестве сорбента с успехом используют нейтральную окись алюминия, а в качестве элюента — смеси бензола и этилацетата в разных пропорциях [44, 45, 84, 85]. В табл. 37.6 приведены значения Ка основных нуклеозидов на колонке с сефадексом на основании этих данных можно оценить возможность разделения той или иной смеси методом гель-проникающей хроматографии при использовании элюентов различного состава [47, 48, 67—69]. Хорошие результаты дает разделение на обычных или специально фракционированных биогеле Р-2 [86, 87] и сефадексе 0-10 [88]. Показано, что эти два геля можно использовать для определения нуклеотидного состава нуклеиновых кислот (рис. 37.11). Биогель Р-2 применяют также для разделения нуклеозидов в присутствии большего количества нуклеотидов, которые в этом случае элюируются существенно быстрее, чем на сефадексе 0-10. Хроматографию на биогеле Р-2 или сефадексе 0-10 неоднократно использовали в качестве микроаналитического метода при определении нуклеозидного состава энзиматических гидролизатов ДНК [89—91] и идентификации концевых нуклеотидов [92]. Смесь рибо- и дезоксирибонуклеозидов разделяли на колонке с фракционированным биогелем Р-2 в буферном растворе (pH 10,1), содержащем тетраборат натрия (рис. 37.12) [87]. Для отделения тимидина от 5-бром- и 5-иоддезоксиуридинов предложено проводить хроматографию на сефадексе 0-10 в фос-фатноцитратном буферном растворе с pH 3,5 [93, 94]. [c.53]

Довольно большая группа природных соединений, содержащихся в растительных и животных объектах, представлена азотсодержащими гетероциклическими соединениями, к числу которых принадлежат важнейшие в биогенетическом отношении нуклеиновые основания, нуклеотиды и нуклеозиды, а также желчные пигменты, бетацианиновые красители и многие мета-болитные производные.Естественно, что вопрос о методах их идентификации, разделения и даже выделения приобретает исключительно важное значение. Поэтому неудивительно, что в последнее время наметилась тенденция все более активного привлечения хроматографии на полиамиде для выделения и анализа метаболитов в биологических объектах, природных пигментов животного и растительного происхождения, а также синтетических производных. [c.103]

В первой и второй главах практикума даются краткие сведения общего характера о методах выделения, разделения, очистки и идентификации индивидуальных соединений. В препаративной части приведены эти методы в приложении к представителям отдельных классов, причем такие вещества, как белки, нуклеотиды, полисахариды и другие биополимеры, не включены в перечень работ. [c.10]

Нуклеиновые кислоты — составные части сложных белков клеточных ядер — нуклеопротеидов. Продуктами распада нуклеиновых кислот являются пурины, ниримидины и их производные (нуклеозиды, нуклеотиды). Бумажная распределительная хроматография может быть с успехом использована для разделения всех этих органических веществ. Методика разделения остается той же, что и для аминокислот и пептидов. Поэтому здесь можно остановиться лишь на рассмотрении способов идентификации. [c.169]

Физические методы также использовались для идентификации а - и -изомеров адениловой и цитидиловой кислот. Очень точными измерениями плотности водных растворов нуклеотидов было показано, что для любого нуклеотида раствор -изомера обладает более высокой плотностью (вследствие электрострикции), так как в динолярных ионах этих соединений имеется большее разделение заряда. Кроме того, известно, что отрицательно заряженная группа действует на аминогруппу таким образом, что значения рК амии-ной группы тем больше, чем меньше расстояние между этими заряженными группалш. Измерения констант диссоциации (табл. 3-1) аминогрупп, входящих в состав аденинового и цитозинового колец, подтверждают тот факт, что а -изомеры представляют собой 2 -фосфаты, а -изомеры — З -фосфаты [58]. [c.130]

Методы, собранные в этих двух книгах, весьма разнообразны и охватывают почти все стороны исследований этой важнейшей грунны соединений. Здесь можно найти методы выделения и анализа отдельных компонентов нуклеиновых кислот (пуриновых и пиримидиновых оснований, нуклеозидов и нуклеотидов), методы выделения, разделения и анализа олигонуклеотидов, изолирования отдельных клеточных органелл, выделения и фракционирования нуклеиновых кислот (ДНК и РНК), а также изолирования их суммарной фракции для различного рода исследований, способы идентификации нуклеиновых кислот, методу. модификации их молекул, методы изучения их синтеза как in vivo, так и in vitro, методы изучения нуклеиновых кислот в связи с процессом биосинтеза белка и, наконец, методы изучения биологических свойств нуклеи1говых кислот, в том числе их иммунологических свойств. [c.5]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология