Нуклеотиды идентификация

Общее строение нуклеиновых кислот строго доказано. При гидролизе нуклеиновые кислоты распадаются на соответствующие нуклеотиды. Место связи рибозы с фосфорной кислотой установлено с помощью избирательного гидролиза. При этом в зависимости от природы фермента получают нуклеозид-5 -монофосфат, или нуклеозид-3, 5 -ди-фосфат, или нуклеозид-З -монофосфат, откуда следует, что остатки рибозы связаны в нуклеиновых кислотах фосфорной кислотой в положении 3,5. Природа оснований установлена путем их идентификации в продуктах гидролиза нуклеотидов. Наконец, нуклеиновые кислоты титруются как одноосновные кислоты. Это указывает на то, что две гидроксильные группы фосфорной кислоты связаны с двумя остатками рибозы. [c.361]

Второй раздел практикума ставит своей целью познакомить студентов с особенностями выделения, фракционирования, идентификации и количественного определения различных природных азотсодержащих < оединений. белков, пептидов, аминокислот, нуклеиновых кислот, нуклеотидов и пр Предлагаемые экспериментальные работы включают аиболее широко используемые в лабораторной практике современные методы разделения и анализа этих соединений различные виды электрофореза, хроматографии, спектрофотометрии, колориметрии и др. Работа проводится как на готовых коммерческих препаратах высоко- и низкомолекулярных азотсодержащих соединений, так и на препаратах, выделяемых студентами из различных тканей лабораторных животных. [c.79]

Высокая специфичность внутренней мембраны в отношении проницаемости для разных веществ привела к представлению о существовании в ней ферментов-переносчиков. Так как многие субстраты ферментов, локализованных внутри митохондрий, при физиологических значениях pH являются ионами (нуклеотиды, субстраты цикла трикарбоновых кислот, неорганический фосфат, катионы и т. д.), представляет интерес идентификация ионных форм транспортируемых веществ. Такие данные важны для понимания конкретного механизма переноса субстрата через мембрану. [c.458]

В заключение отметим, что еще не созданы предпосылки для действительно автоматического анализа последовательности нуклеотидов, поскольку разработанные методы и аппаратура позволяют автоматизировать только часть процессов — разделение и идентификацию продуктов расщепления (см. Разделение низкомолекулярных компонентов нуклеиновых кислот ). [c.94]

Настоящая книга, издаваемая в серии научных трудов ВИР, освещает методы и методики по определению содержания нуклеиновых кислот в растительных тканях и препаратах. В ней также изложены — идентификация и количественный учет свободных нуклеотидов выделение нативных РНК и ДНК из растений фракционирование их на колонках определение нуклеотидного состава РНК и ДНК методами колоночной и бумажной хроматографии изучение свойств макромолекул нуклеиновых кислот, обнаружение их в клетке, цитофотометрия, определение состояния ДНК и РНК в клетке. [c.2]

Выделение, идентификация и количественный учет свободных нуклеотидов [c.46]

Разделение и идентификация нуклеотидов [c.48]

Идентификация и расчет концентрации нуклеотидов. С этой целью расчет молярности раствора производят переводом спектрофотометрических отсчетов в моли нуклеотида с учетом коэффициента молярной экстинкции по формуле [c.49]

Затем производят дополнительную идентификацию по кривой спектра поглощения, по Rf, по величине отношения поглощения 275 Eim (это отношение для адениловых нуклеотидов равно 0,4, для гуаниловых — 0,75, для уридиловых — 0,6, для цитидиловых — 1). [c.50]

Из числа кислотных систем растворителей применяются главным образом смеси Сз—С5. Системы Сз и С4 особенно эффективны при разделении оснований и нуклеозидов система С4 пригодна для разделения гидролизатов с последующей спектрофотометрической идентификацией их компонентов. Система С5 очень неудобна в работе из-за ее резкого неприятного запаха, однако она обладает исключительно высокой разделяющей способностью в отношении свободных нуклеотидов. [c.127]

Идентификацию нуклеотидов проводили по спектру поглощения в ультрафиолетовой области, по фосфору и по расположению на бумаге относительно метчиков. Изображение хроматограмм, полученных при разделении нуклеотидов из проводящих пучков и паренхимы черешков сахарной свеклы, дано на рис. 2. [c.253]

Из органических высокомолекулярных соединений построено большое количество биологически и технически важных веществ. К ним относятся вещества, из которых состоят растения и природные волокна,— целлюлоза и другие полисахариды, шерсть, шелк к ним принадлежат также коллаген и эластин, основная часть белков — протеиды и нуклеотиды, гликоген и крахмал, натуральные полипрены — каучук и гуттаперча. Синтетические высокомолекулярные соединения охватывают область пластических масс и синтетических волокон. Химия высокомолекулярных соединений изучает методы синтеза, характеристики и исследования этих веществ, а также превращения природных и синтетических полимеров в их производные. Если учесть значение перечисленных выше соединений, то представляется обоснованным выделение химии высокомолекулярных органических соединений в особую область органической химии. В строении макромолекул полимеров, а также в их химических и физических свойствах и в методах идентификации и характеристики этих соединений имеется столько особенностей, что необходимо самостоятельное рассмотрение этих вопросов. Однако следует учесть, что как для высокомолекулярных, так и для низкомолекулярных органических соединений в основном характерны одни и те же типы связи атомов в молекуле. Таким образом, все законы органической химии в полной мере относятся также и к химии высокомолекулярных соединений. [c.11]

Двумерная и одномерная ионообменная ТСХ на иластинках импрегнированной полиэтиленимином целлюлозы ( РЕ1-се11и1озе ) и ДЭАЭ-целлюлозы нуклеозидов или нуклеотидов для определения нуклеотидного состава нуклеиновых кислот, включая идентификацию минорных нуклеозидов элюцию ведут, как правило, солями лития или аммония, используя также вариации pH соответствующ,их буферов. [c.460]

Предварительно клонированные гены вводят в клетку животных различными путями. Суть одного из них состоит в трансформации клеток требуемым геном, соедршенным с одним из генов, для которых осуществляется селекция. Для идентификации и последующего размножения клеток, содержащих интегрированную ДНК, был разработан метод, получивший название метода маркера. Примером может служить метод получения клеток, дефектных по синтезу фермента тимидинкиназы (ТК -клетки). Такие клетки трансформировались фрагментами ДНК вируса герпеса (HSV), содержащего ген фермента ТК, и после трансформации они приобретали способность к синтезу фермента на селективной среде, т.е. становились ТК -клетками. Клетки ТК легко отличаются от клеток TK , поскольку способны расти на средах с ами-ноптерином (ингибитор, блокирующий определенные стадии биосинтеза нуклеотидов), гипоксантином и тимидином. Следовательно, в данном случае для трансформации клеток животных бьши использовапы гибриды бактериальных плазмвд с геном ТК из вируса герпеса. Для этого предварительно проводили клонирование и идентификацию генов в клетках Е. соИ и затем полученная рекомбинантная плазмида вводилась в ТК -клетки. Анализ мето- [c.125]

Д е 3 о кси р и б о 3 а. Выделение и идентификация дезоксирибозы как компонента ДНК были значительно более трудной задачей, ввиду большой неустойчивости этого моносахарида, которая характерна вообще для всех 2-дезоксисахаров. При первоначальных попытках выделить Моносахарид из ДНК посредством гидролиза получали только левули-човую кислоту, в которую превращалась дезоксирибоза. Лишь в 1930 г. Левину удалось, подвергая индивидуальные нуклеотиды, выделенные из ДНК, кислотному гидролизу в очень мягких условиях (0,01 N кислота в течение 10 мин.), выделить кристаллическую дезоксирибозу. Позднее она была получена также в виде дибензилмеркапталя при меркаптолизе ДНК действием дибензилмеркаптана. [c.187]

Для секвенирования крупных фрагментов ДНК (примерно 2000 п. н.) используют другие стратегии. Одна из них состоит в следующем. Встраивают этот фрагмент в соответствующий плазмидный вектор и строят его подробную рестрикционную карту. Идентифицируют перекрывающиеся фрагменты вставки длиной от 100 до 500 п. н., субклонируют каждый из них в ДНК М13, секвенируют и воссоздают нуклеотидную последовательность всего исходного фрагмента. Чтобы быть уверенным в правильности полученного результата и идентификации какого-либо нуклеотида, необходимо секвенировать обе цепи по нескольку раз. Секвенирование обеих цепей облегчается тем, что каждый из субкло-нированных фрагментов исходной ДНК может быть встроен в ДНК М13 в противоположных [c.92]

Выделение и идентификацию компонентов нуклеиновых кислот производят с помощью физико-химических методов. Очень важную роль в разделении сложных смесей играют хроматографические методы ( см. 15.1). Пиримидииовые и пуриновые основания, обладающие заметным поглощением около 260 нм, обычно идентифицируют с помощью УФ-спектроскопии (см. 15.3.1). Поскольку нуклеотиды имеют кислотный характер и способны находиться в ионизированном сосюя НИИ, то для идентификации их используют также электрофорез (см. 15.1). [c.444]

В девятом издании Определителя бактерий Берги все обнаруженные организмы, отнесенные в царство Prokaryotae, разделены на 33 группы. Признаки, по которым осуществляется разделение на группы, как правило, относятся к категории легко определяемых и вынесены в названия групп, например грамотрицательные аэробные палочки и кокки (группа 4), анаэробные грамотрицательные кокки (группа 8), грамположительные палочки и кокки, образующие эндоспоры (группа 13), скользящие бактерии, образующие плодовые тела (группа 24). Основная идея классификации по Берги — легкость идентификации бактерий. Для осуществления этого используют совокупность признаков морфологических (форма тела наличие или отсутствие жгутиков капсулы способность к спорообразованию особенности внутриклеточного строения окрашивание по Граму), культуральных (признаки, выявляемые при культивировании в лаборатории чистой культуры), физиолого-биохимических (способы получения энергии потребности в питательных веществах отношение к факторам внешней среды нуклеотидный состав и последовательность нуклеотидов в молекуле ДНК наличие и характер минорных оснований в ДНК нуклеотидный состав рибосомальной РНК последовательность аминокислот в ферментных белках с аналогичными функциями). [c.158]

При разделении защищенных нуклеозидов, например ано-мерных рибофуранозилпроизводных урацила, в качестве сорбента с успехом используют нейтральную окись алюминия, а в качестве элюента — смеси бензола и этилацетата в разных пропорциях [44, 45, 84, 85]. В табл. 37.6 приведены значения Ка основных нуклеозидов на колонке с сефадексом на основании этих данных можно оценить возможность разделения той или иной смеси методом гель-проникающей хроматографии при использовании элюентов различного состава [47, 48, 67—69]. Хорошие результаты дает разделение на обычных или специально фракционированных биогеле Р-2 [86, 87] и сефадексе 0-10 [88]. Показано, что эти два геля можно использовать для определения нуклеотидного состава нуклеиновых кислот (рис. 37.11). Биогель Р-2 применяют также для разделения нуклеозидов в присутствии большего количества нуклеотидов, которые в этом случае элюируются существенно быстрее, чем на сефадексе 0-10. Хроматографию на биогеле Р-2 или сефадексе 0-10 неоднократно использовали в качестве микроаналитического метода при определении нуклеозидного состава энзиматических гидролизатов ДНК [89—91] и идентификации концевых нуклеотидов [92]. Смесь рибо- и дезоксирибонуклеозидов разделяли на колонке с фракционированным биогелем Р-2 в буферном растворе (pH 10,1), содержащем тетраборат натрия (рис. 37.12) [87]. Для отделения тимидина от 5-бром- и 5-иоддезоксиуридинов предложено проводить хроматографию на сефадексе 0-10 в фос-фатноцитратном буферном растворе с pH 3,5 [93, 94]. [c.53]

Идентификация антикодона в тРНК проведена весьма убедительными экспериментами. Получены мутанты, содержаш,ие мутационную ошибку в самом антикодоне определенной тРНК. Затем путем полного химич. анализа цепи тРНК показано, какой именно нуклеотид оказался замененным. Здесь и находился антикодон. Связь кодон — антикодон осуществляется тремя нуклеотидами, а не длинной цепочкой. Поэтому возможность ошибок, или уровень шумов , в процессе трансляции (так называют синтез белка) выше, чем при редупликации ДНК или транскрипции РНК. Вероятность ошибки при наборе белковой цепи достигает 10 (вместо 10 при матричном синтезе дезоксирибонуклеиновой кислоты). [c.196]

Нуклеотиды являются низкомолекулярными фосфатами Ы-глюкозидов пуриновых и пиримидиновых оснований и обладают свойствами кислот. Эти свойства нуклеотидов в основном обусловливают методы их выделения, очистки и идентификации. Ниже приводится схема изучения свободных нуклеотидов, составленная на основе работ Берквиста [7] — [9], Шебеста и Шорма [13], [14] и апробированная нашей лабораторией. [c.46]

Идентификацию нуклеотидов осуществляют по следующим локазателям 1) по положению пика на кривой элюции и по величине отношения 260 275 2) по подвижности при электрофорезе в 0,05 М цитратном буфере, pH 3,8 в течение 1,5—2 часов при напряжении 40—50 в на I см в ССЦ 3) по хроматографической подвижности оснований (нисходящая хроматография на бумаге), полученных после гидролиза нуклеотидов концентрированной H IO4 при 100° в течение 1 часа в следующих системах изопропанол —НС1 —вода (170 41 39) метанол — НС1 — вода (70 20 10). [c.50]

Уже давно было обнаружено, что нуклеиновая кислота, полученная первоначально из дрожжей, содержит пентозу. Пользуясь не вполне безупречными методами, Левин [1] в 1909 г. идентифицировал эту пентозу как рибозу. В дальнейшем Гуланд [2] и его сотрудники с несомненностью установили, что пентоза в дрожжевой РНК представляет собой В-рибозу. Альдоновая кислота из сахара, полученного в результате гидролиза пуриновых нуклеотидов дрожжевой РНК, была превращена ими в соответствующий бензиминазол, легко поддающийся идентификации. [c.18]

Идентификация газа Гозио как триметиларсина, осуще стеленная К. Хиккинботтомом в университете в Лидсе, впервые позволила установить факт метилирования грибковыми культурами и открыла путь к дальнейшим исследованиям. Фундаментальные работы П. Хааза, посвященные химии водорослей, его наблюдательность, благодаря которой он обратил внимание на запах глубинных вод, а также экспериментальное искусство М. Симпсон привели к тому, что в Лидсе была впервые выделена природная сульфониевая соль и выявлено далеко простирающееся значение этих соединений в биохимии растений и животных. Мне очень приятно выразить сердечную признательность этим своим -коллегам и друзьям. Изучение кофермента А связало многие вопросы химии серы и природных нуклеотидов. Шестая глава написана в основном с позиций химика-органика, и, за исключением описания роли кофермента А в метаболизме жирных кислот, его дальнейшее биохимическое значение затронуто в незначительной степени. [c.7]

Довольно большая группа природных соединений, содержащихся в растительных и животных объектах, представлена азотсодержащими гетероциклическими соединениями, к числу которых принадлежат важнейшие в биогенетическом отношении нуклеиновые основания, нуклеотиды и нуклеозиды, а также желчные пигменты, бетацианиновые красители и многие мета-болитные производные.Естественно, что вопрос о методах их идентификации, разделения и даже выделения приобретает исключительно важное значение. Поэтому неудивительно, что в последнее время наметилась тенденция все более активного привлечения хроматографии на полиамиде для выделения и анализа метаболитов в биологических объектах, природных пигментов животного и растительного происхождения, а также синтетических производных. [c.103]

Используемые при разделении нуклеотидов сильноосновные анионообменные смолы (а в случае нуклеозидов и оснований — сильнокислые катионообменные смолы) не разрушаются при давлении 180—300 атм. Кроме того, чтобы можно было обеспечить быстрый массоперенос и быстрое установление равновесия, частицы смолы должны иметь малый диаметр — от 3 до 20 мкм или в случае ионообменников пленочного типа — очень тонкий слой смолы. Быстрый массоперенос также увеличивает скорость регенерации по окончании разделения способом градиентного элюлрования. В точности идентификации компонентов можно быть уверенным в том случае, если используемые смолы в течение длительного периода времени дают один и тот же удерживаемый объем для определенного соединения. [c.302]

Идентификацию и количественное определение Ц. проводят хроматографич. и спектральными методами. Ц.— природный нуклеозид, производное цитозина и рибозы, входпт в состав нуклеиновых к-т, нуклеотидов (см. Цитидинфосфорные кислоты). [c.440]

В первой и второй главах практикума даются краткие сведения общего характера о методах выделения, разделения, очистки и идентификации индивидуальных соединений. В препаративной части приведены эти методы в приложении к представителям отдельных классов, причем такие вещества, как белки, нуклеотиды, полисахариды и другие биополимеры, не включены в перечень работ. [c.10]

Нуклеиновые кислоты — составные части сложных белков клеточных ядер — нуклеопротеидов. Продуктами распада нуклеиновых кислот являются пурины, ниримидины и их производные (нуклеозиды, нуклеотиды). Бумажная распределительная хроматография может быть с успехом использована для разделения всех этих органических веществ. Методика разделения остается той же, что и для аминокислот и пептидов. Поэтому здесь можно остановиться лишь на рассмотрении способов идентификации. [c.169]

В течение многих лет считалось, что при щелочном гидролизе рибонуклеиновых кислот в мягких условиях образуется смесь только З -фосфатов аденозина, цитидина, гуанозина и уридина. Это ошибочное представление существовало главным образом из-за несовершенства методов классической органической химии применительно к идентификации и характеристике нуклеотидов. Многое в ранних работах Левина и его сотрудников, касающихся определения положения фосфорного остатка, противоречиво, вероятно, вследствие того, что нуклеотиды, с которыми они работали, представляли собой смеси 2 - и 3 -изомеров. Кроме того, они выделяли оптически неактивный рибнтфосфат в результате восстановления рибозофосфата, полученного из гуаниловой кислоты (через продукт дезаминирования — ксантиловую кислоту). Однако при использовании условий, в которых проходит миграция фосфорного остатка, такое выделение не имеет никакого смысла. Тем не менее уже это исследование показало, что именно 2 - или З -гидроксильная группа сахара в таких нуклеозидах этерифицирована фосфатом. Так, дезаминирование адениловой кислоты приводило к инозиновой кислоте, дающей при гидролизе гипоксантин и рибозофосфат, который не был рибозо-5-фосфатом [40]. Фосфорилирование 5 -0-три-тилуридина приводит к уридиловой кислоте, которая оказалась [c.126]

Физические методы также использовались для идентификации а - и -изомеров адениловой и цитидиловой кислот. Очень точными измерениями плотности водных растворов нуклеотидов было показано, что для любого нуклеотида раствор -изомера обладает более высокой плотностью (вследствие электрострикции), так как в динолярных ионах этих соединений имеется большее разделение заряда. Кроме того, известно, что отрицательно заряженная группа действует на аминогруппу таким образом, что значения рК амии-ной группы тем больше, чем меньше расстояние между этими заряженными группалш. Измерения констант диссоциации (табл. 3-1) аминогрупп, входящих в состав аденинового и цитозинового колец, подтверждают тот факт, что а -изомеры представляют собой 2 -фосфаты, а -изомеры — З -фосфаты [58]. [c.130]

Электрофорез на бумаге с последующей хроматографией на бумаге представляет удобный метод разделения присутствующих в рибонуклеазных гидролизатах нуклеотидов и олигонуклеотидов (вплоть до тетрануклеотидов) [163]. Разделение, идентификация и количественное определение этих фрагментов дает некоторую информацию [c.392]

В монографии дан подробный обзор фактического материала П1 использованию наиболее распространенных методов геносистематв ки нуклеотидного состава ДНК и степени гомологии в последова тельности нуклеотидов в целях таксономии микроорганизмов. По казано, что методы геносистематики заняли свое определенно место в исследованиях по классификации и идентификации микро организмов, что неизбежно повлечет за собой их более широко внедрение в микробиологическую практику. [c.2]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология