Снова нуклеиновые кислоты

ПЕРВЫЕ ПОПЫТКИ Снова нуклеиновые кислоты [c.307]

Однако Жан не мог сказать мне, верна или нет а-спираль Лайнуса. Он не был специалистом по рентгеновской кристаллографии и не мог профессионально оценить эту модель. Впрочем, некоторым его более молодым друзьям, занимавшимся структурной химией, а-спираль показалась очень изящной. А поэтому они склонялись к мнению, что Лайнус прав. Но это означало, что он снова решил проблему исключительной важности и первым высказал правильное предположение о структуре макромолекулы, играющей такую важную роль в биологии. Вполне вероятно, что он также разработал сенсационно новый метод, который окажется возможным применить и к нуклеиновым кислотам. Правда, Жан не запомнил никаких специальных приемов. Он мог лишь сообщить, что описание о-спирали должно быть опубликовано в ближайшее время. [c.29]

Нуклеиновая кислота и белок нуклеопротеидов легко отделяются друг от друга и соединяются снова. Это подтверждает, что связи между ними слабы и не могут являться ковалентными. Тем не менее, по крайней мере в случае вирусов, эти компоненты, по-видимому, сосуществуют в определенных соотношениях друг с другом, что позволяет рассматривать нуклеопротеиды как реальные соединения. [c.22]

Теперь рассмотрим стационарно растущую и синтезирующую клетку, в которую мы подали внезапно на период времени, малый по сравнению с временем генерации, импульс какого-либо радиоактивно меченного компонента среды (это может быть, например, лимитирующая аминокислота). Меченая составная часть вовлекается в процессы синтеза белков, нуклеиновых кислот и т. д. Если время контакта культуры клеток с радиоактивным компонентом велико, то снова достигается стационарное состояние и вещества, синтезируемые клеткой, окажутся равномерно помеченными. Но если время контакта мало, то распределение радиоактивного компонента в веществах клетки станет весьма неравномерным. Таким образом, не нарушая по существу стационарности клеточных синтезов, мы с помощью кратковременного импульса радиоактивности изучаем явление нестационарно и измеряем скорости отдельных парциальных процессов. Таков первый вариант кинетического эксперимента. [c.452]

Собирают нуклеиновую кислоту с помош,ью центрифугирования при 12 ООО об/мин в течение 10 мин. Сливают супернатант, промывают осадок 1 мл 70%-ного этанола и снова собирают нуклеиновые кислоты центрифугированием (12 000 об/мин, 10 мин). [c.78]

Нуклеинонокислый натрий — белый или желтоватый порошок, растворяется в воде с образованием опалесцирующих растворов. Не растворим в спирте и хлороформе. Из водного раствора осаждается соляной или уксусной кислотой. При кипячении с минеральными кислотами вначале выделяется осадок нуклеиновой кислоты, который затем снова растворяется и ностепеиио гидролизуется с обрачоваиием фосфорной кислоты, рибозы. пуриновых и пиримидиновых оснований. [c.188]

Очистку плазмидной ДНК от примеси РНК (после осаждения ДНК бактерии-хозяина из просветленного лизата ) можно осуществлять в препаративном варианте на колонке оксиапатита и без участия бромистого этидия, но в присутствии 8 М мочевины, что обеспечивает сохранение однонитевой структуры РНК. Окси-апатит (1 г на 1 л лизата бактерий) суспендировали в 0,2 М Na-фосфатном буфере (pH 6,8) с добавлением до 8 М мочевины и заполняли им широкую колонку. Освобожденный от ДНК хозяина лизат без какой-либо дополнительной очистки разбавляли в соотношении 9 1 0,27 М Na-фосфатным буфером (pH 6,8) с 9 М мочевиной и 0,9% ДДС-Na и вносили в колонку. Ее промывали сначала тем же раствором, но без ДДС-Na, потом 0,01 М Na-фосфатным буфером без мочевины (при этой промывке сорбент один раз взмучивали и снова давали ему осесть). Все белки и РНК выходили из колонки в ходе промывок. Плазмидную ДНК элюировали 0,3 М Na-фосфатным буфером. По данным авторов, ее выход сильно варьировал от одной партии оксиапатита к другой. Из больших объемов бактериальных лизатов все нуклеиновые кислоты целесообразно сначала осадить этанолом. Показано, что разрывы в плазмидной ДНК в ходе очистки на оксиапатите не появляются [ olman et al., [c.239]

Прежде чем мы продолжим описание обычных взаимоотношений между фагами и бактериями, мы коротко остановимся на другой области изучения вирусов. Было показано, что у вируса табачной мозаики можно химическими методами разделить нуклеиновокислотный и белковый компоненты вирусной частицы, а затем вновь соединить их вместе, в результате чего снова получится настоящий вирус. Первоначально полагали, что способность фага вызвать заражение соверщенно исчезает при таком разрушении, однако позднее было показано, что даже одна нуклеиновая кислота вирусной частицы способна вызывать заражение, т. е. образование новых вирусных частиц, которые также содержат белки, типичные для данного вируса. Таким образом, одна нуклеиновая кислота способна передавать растению-хозяину такую информацию, что его клетки начинают продуцировать не только специфичную для вируса нуклеиновую кислоту, но также и те белки, которые обычно содержатся в вирусных частицах. Хотя для этого в принципе достаточно присутствия одной только нуклеиновой кислоты, заражение вызвать гораздо легче при помощи целых вирусных частиц, т. е. частиц, содержащих также и белки. У вируса табачной мозаики эти белки образуют оболочку вокруг центрального стержня нуклеиновой кислоты. [c.252]

Нуклеиновые кислоты представляют собой полимерные соединения, которые различными способами могут быть расщеплены на люнонуклеотиды. Для удобства полимеры мононуклеотидов будут называться олигонуклеотидами, когда число мономерных единиц в молекуле составляет от 2 до 7 (приблизительно), и полинуклеотидами, когда это число превышает 7 . Как и в случае многих макромолекул, понятие дюлекула становится довольно неопределенным при очень больших молекулярных весах вследствие процессов агрегации и дезагрегации, которые могут происходить с большей или меньшей легкостью. И снова для удобства молекулами следует называть только структуры, образованные целиком ковалентными связями макромолекула — это очень большая одиночная молекула (которая, кроме ковалентных связей, может содержать вторичные внутримолекулярные связи) агрегаты должны быть описаны отдельно и люгут быть определены, когда это известно, как ди-, три- или полимолекулярные, указывая число молекул или тяжей, образующих комплекс. [c.363]

Методы, используемые для экстракции рибонуклеиновых кислот, частично зависят от природы органа или организма. В одном из ранних методов, использованном Левиным 11], к густому тесту из дрожжей добавляли щелочь, смесь перемешивали с пикриновой кислотой, фильтровали и нуклеиновую кислоту осаждали из фильтрата добавлением соляной кислоты. Такая довольно жесткая обработка приводила к тому, что полученная нуклеиновая кислота значительно отличалась от нативной рибонуклеиновой кислоты. Для выделения рибонуклеиновых кислот, приближающихся по структуре к нуклеиновым кислотам живой клетки, необходимо избегать применения жестких условий (pH, тедтература) в то же время необходимо, насколько возможно, затормозить ферментативный распад. Широко применялась экстракция рибонуклеопротеидов изотоническим раствором хлористого натрия [2,3]. Белки от нуклеиновых кислот могут быть отщеплены различными методами, такими, как обработка смесями хлороформа с октиловым спиртом [4], додецилсульфатом натрия [5], нитратом стронция [6] или спиртом [7], а также расщепление белковой фракции трипсином [8]. И снова эффективность каждого метода определяется природой рибонуклеопротеида. Для инактивации ферментов в процессе экстракции полезно применение хлоргидрата гуанидина (денатурирующего агента) [9] для выделения рибонуклеиновых кислот и нативных рибонуклеопротеидов из дрожжей был применен метод. [c.364]

Нуклеиновая кислота, о которой здесь идет речь,— это РНК, и притом фаговая РНК. Спигелман работал с РНК фага Q , который заражает штамм Hfr Es heri hia oli Q13 (теперь все эти обозначения уже кое-что говорят читателю в крайнем случае он может снова заглянуть в гл. 2, с тем чтобы вспомнить все, что мы говорили о бактериофагах и о штаммах Hfr). Эту РНК удалось при помощи весьма сложных методов выделить и очистить. Таким образом, в руках исследователей оказался полный геном фага (а не отдельные гены ). [c.396]

Для того чтобы сознательно изучать структуру нуклеиновых кислот, необходимо сказать несколько слов об их функциях в организме. Процесс жизни требует непрерывного потока энергии, веществ и информации. Поток энергии и веществ целиком определяется функциями белков, о чем подробно говорилось в предыдупщх главах. Что же касается потока информации, то, как уже говорилось во введении, в каждой клетке и в каждой частице вируса запечатлена информация о том, какие вещества необходимо синтезировать и в каком порядке собрать их в организованную структуру, чтобы клетка могла выполнить свою главную задачу — воспроизвести самое себя. При выполнении этой задачи информация, заключенная в клетке, не лежит мертвым грузом, а передается из органа, где она запасена — ядра, —к рабочим орудиям, где идет синтез компонентов будущей дочерней клетки. Следовательно, осуществляется непрерывный поток информации. В конце концов нри делении дочерней клетке снова передаются все необходимые кальки , по которым будет построена следующая клетка, и так этот поток информации никогда не прерывается, пока идет жизнь. [c.200]

Так, при низких концентрациях противоионов переходосуществляетсяпрннизкой температуре и имеет большую ширину, тогда как при более высоких содержаниях противоионов температура плавления возрастает, и переход становится более резким. Плавление гомогенйнх молекул нуклеиновых кислот является обратимым процессом, поскольку при медленном охлаждении раствора цепи нуклеиновых кислот,объединяясь, образуют снова двойную спираль. [c.60]

Аденозинтрифосфат является донатором фосфатных остатков. Образую- гаяся при этом аденозиндифосфорная кислота служит акцептором фосфора при переносе фосфатных групп от дальнейших продуктов распада фосфори-лированного углерода. При этом она снова переходит в аденозинтрифосфор-ную кислоту (строение аденозиптрифосфорной кислоты см. в главе о нуклеиновых кислотах, стр. 330). [c.378]

Из разрушенного смесью фенол — вода нуклеопротеина TMV Анде-рер [55] смог иыде.лить белок TMV (из фенольного раствора). Выделенный белок снова соединялся с нуклеиновой кислотой TMV с образованием кристаллического нуклеопротеина TMV. Это показывает, что белок не денатурируется в жидком феноле необратимо. Кикхефен [56] недавно показал, что различные ферменты — рибонуклеаза, химотрипсин, трипсин, лизоцим и др.— после растворения в жидком феиоле можно количественно выделить сходным способом без потери ими ферментативной активности. Некоторые ферменты даже выдерживают нагревание в фенольном растворе до 80—100°. [c.331]

Когда с помощью соответствующих методов удалось выделить РНК ВТМ, ее нанэзли на листья чувствительных к ВТМ растений. Вскоре на этих листьях появились поражения, которые нельзя было отличить от типичных вирусных поражений. Более того, из пораженных участков можно было снова выделить инфекционный вирус. Таким образом было показано, что инфекционность РНК-содер-жащего вируса обусловлена его РНК. Когда для этих исследований был использован очищенный препарат вирусной нуклеиновой кислоты, содержащий при оптимальных условиях очистки менее 1 субъединицы белка на 20 молекул РНК (см. ниже), впервые удалось неопроверн<имо доказать, что инфекционность вируса присуща исключительно его нуклеиновой кислоте. Затем при помощи тех же методов инфекционная РНК была выделена из большей части вирусов растений. Однако степень чистоты этих препаратов РНК обычно устанавливали не так тщательно, как в случае РНК ВТМ. [c.172]

Успешную реконструкцию изометрических вирусов удалось осуществить лишь в последние годы. Некоторые мелкие вирусы растений (вирус мозаики костра безостого, вирус хлоротичной пятнистости коровьего гороха, вирус крапчатости бобов обыкновенных) диссоциируют при повышении концентрации солей до 1 М. Образующиеся при этом белки могут снова агрегировать с образованием вирусоподобных частиц в присутствии нуклеиновой кислоты при понижении концентрации солей путем диализа [26, 27, 202, 536]. Таким образом, условия, необходимые для реконструкции этих вирусов, резко отличаются от условий, необходимых для реконструкции ВТМ, причем реконструкция протекает даже значительно быстрее и не требует повышенной температуры (1 ч при 0°). Но в среде обязательно должны присутствовать тиоловые соединения (типа дитиотреитола), чтобы защитить от окисления ЗН-группы белка. [c.221]

О том, насколько неожиданным было это открытие, можно судить хотя бы по тому, что тогда еще не знали даже, что ДНК входит в состав пневмококков, хотя уже в течение нескольких десятилетий было известно, что ДНК является основным компонентом эукариотической хромосомы. Описывая методику выделения ДНК, Эйвери отмечает Когда концентрация спирта достигает примерно 9/10 объема, отделяется волокнистое вещество, которое при помешивании наматывается на стеклянную палочку, как нитка на катушку, тогда как другие примеси остаются в растворе в виде гранулированного осадка. Волокнистое вещество затем снова растворяют и процедуру повторяют несколько раз. Оказалось, что это вещество обладает высокой реакционной способностью и при элементарном анализе совпадает по свойствам с очищенной ДНК. (Кто бы мог догадаться ) Насколько мне известно, этот тип нуклеиновой кислоты пока не был обнаружен у пневмококков, хотя она была найдена у других бактерий . [c.22]

Экстрагируйте один раз смесью фспол/хлороформ и один раз хлороформом, как описано в п. 4 табл. 9.4, затем осадите нуклеиновые кислоты из последней водной фазы двумя объемами изопропанола. Выдержите при —20 °С по меньшей мере 2 ч и осадите нуклеиновые кислоты центрифугированием. Ресуспендируйте осадок в буфере ТЭ >, добавьте ацетат натрия до 0,3 М и снова осадите нуклеиновую кислоту двумя объемами изопропанола. [c.302]

Природа пользуется еще одним, совершенно отличным химическим языком, который также довольно единообразен. Генетическую информацию любого организма содержит в себе одно из двух близко связанных семейств гигантских цепочечных молекул, нуклеиновых кислот ДНК и РНК, подробнее описанных в главе 5. Каждая молекула имеет безмерно длинный остов с регулярной, повторяющейся структурой. И снова боковая группа присоединена через равные промежугки, но в этом случае существует только четыре типа у генетического языка только четыре [c.36]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология