Ошибки измерения интенсивности флуоресценции

Статистическая обработка результатов показала, что относительная ошибка измерений интенсивности флуоресценции в любой точке кривой спектра не превышает 3,5%. При этом наименьшие отклонения приходятся на экстремальные точки кривой. [c.185]

В. ОШИБКИ ИЗМЕРЕНИЯ ИНТЕНСИВНОСТИ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ [c.135]

Относительная ошибка 15%. Продолжительность определения 4 часа. Возбуждение флуоресценции производится светом Я = 436 ммк. Измерение интенсивности флуоресценции при Я = 550 ммк. [c.222]

Наиболее распространенными приборами для измерения интенсивности флуоресценции перлов являются фотоэлектрический люминесцентный фотометр ЛЮФ-57 и визуальный полевой люминесцентный фотометр ЛФС-54. Первый из них предназначен для определения концентрации урана в твердых образцах по их флуоресценции, однако с успехом может быть использован для измерения интенсивности флуоресценции перлов или кристаллофосфоров, особенно если цвет их флуоресценции зеленый или желто-зеленый. Для измерения интенсивности флуоресценции могут быть применены перлы диаметром 3—4 мм или диски диаметром 10—12 мм и толщиной 1—2 мм. Ошибка при определении интенсивности флуоресценции на этом приборе составляет 5% от измеряемой величины. [c.200]

Представляет интерес решение вопроса, какая ошибка (Ау) возникает при определении процентного содержания примеси в анализируемом веществе (у) вследствие того, что при измерениях интенсивностей флуоресценции анализируемого раствора (/ ), анализируемого раствора с добавкой микропримеси (/дс) и холостого раствора (/q) вносятся ошибки А/ , Ah и Д/ . [c.228]

В качестве источника ультрафиолетового света применена лампа ДРШ-250 с двойным светофильтром из УФС-3 и раствора сульфата меди. Измерение интенсивности флуоресценции каждого образца проводилось один раз с применением светофильтра, выделяющего часть спектра, начиная с 750 ммк, и второй раз с интерференционным светофильтром, имеющим максимум пропускания около 700 ммк. Отношение этих интенсивностей резко зависит от содержания хрома в образце, что позволяет построить калибровочную кривую и определять по ней содержание хрома в рубине от десятых долей процента до 1—2%. Метод дает возможность определять хром в рубинах любой формы и практически любых размеров с ошибкой около 5% от определяемой величины. [c.366]

Описанные цилиндрические кюветы можно использовать для освещения под прямым углом, фронтального освещения или освещения в линию. При измерениях под прямым углом цилиндрические стенки кюветы закрывают отрезком черной полиэтиленовой трубки с прямоугольным отверстием размером 1 X 1,5 см для пропускания люминесценции. Кювету освещают через одну из плоских стенок, а люминесценция наблюдается через отверстие на цилиндрической поверхности. Если сравнивать интенсивности флуоресценции двух растворов, находящихся в различных кюветах, то будут возникать ошибки из-за различной кривизны. Но такое сравнение редко приходится делать при измерении фосфоресценции или замедленной флуоресценции, поскольку интенсивность последней можно сравнить с обычной флуоресценцией того же раствора при идентичных условиях. Кювету с длинной трубкой, показанную на рис. 90, можно удобно разместить в сосуде Дьюара для измерений при высоких и низких температурах. [c.228]

Чувствительность регистрирования скорости реакции с участием флуоресцирующих реактивов при заданной относительной ошибке измерения зависит от того, увеличивается или снижается интенсивность флуоресценции раствора во время реакции. Чувствительность реакций, конечные продукты которых флуоресцируют, а исходные не флуоресцируют, и в интегральном, и в дифференциальном вариантах выше, чем чувствительность цветных реакций с таким же каталитиче- [c.39]

Могут возникать большие ошибки при определении эффективности флуоресценции, если возбуждающий свет содержит несколько частот, которые по-разному поглощаются реагентом. Например, при 2537 А антрацен поглощает в 100 раз сильнее, чем при 3130 А. Если возбуждающий свет, помимо 3130 А, содержит только 1% излучения 2537 А, то наблюдаемая интенсивность флуоресценции будет на 100% больше, чем ожидаемая интенсивность флуоресценции для чистого света 3130 А, и полученное значение ф/ будет в 2 раза больше истинного [1126]. Чистота возбуждающего света должна проверяться наполнением ячейки слегка мутным нефлуоресцирующим раствором и измерением с помощью спектрофотометра спектра рассеянного света. [c.640]

Рассеяние света и флуоресценция образца. Большие ошибки в измерении поглощения может внести рассеяние света молекулами растворенного вещества. Оно прямо пропорционально размеру частиц и поэтому проявляется при изучении спектров макромолекул в растворе, суспензий и взвесей. Интенсивность рассеяния изменяется с длиной волны как 1Д и поэтому особенно сказывается в области коротких длин волн. Типичный спектр вещества с большой-степенью рассеяния и тот же спектр за вычетом рассеянного света представлены на рис. 10. [c.21]

Так же как и спектрофотометрические исследования, исследование спектра флуоресценции можно использовать как для определения структуры и идентификации соединений (флуоресцентная спектрометрия), так и для определения концентрации люминесцирующих веществ (флуоресцентная фотометрия, или флуорометрия), однако в последнем случае необходима специальная техника. Необходимо тщательно следить, чтобы измерять интенсивность флуоресцентного излучения и не измерять одновременно часть непоглощенного возбуждающего излучения. Это достигается прежде всего тем, что непоглощенную часть возбуждающего света задерживают, помещая на пути луча света после пробы вторичный фильтр флуоресцентное излучение большей длины волны полностью пропускается этим фильтром. Однако лучше всего измерять флуоресцентное излучение в направлении, перпендикулярном направлению возбуждающего излучения, так как в этом случае благодаря геометрии системы возбуждающий свет не может попасть в приемник флуоресцентного излучения. Если же флуоресцентное излучение пробы заметно сорбируется вновь, то лучше всего измерять флуоресцентное излучение под острым углом к направлению возбуждающего света, поместив кювету под углом к источнику первичного излучения. При этом необходимо тщательно следить, чтобы флуоресцентное излучение, проходя через поверхность облучения, попадало в монохроматор и, следовательно, в приемник излучения. При использовании такого метода часть первичного излучения, отраженного от расположенной под углом стенки кюветы, может попасть в приемник излучения, так что и в этом случае рекомендуется при особенно точных измерениях дополнительный защитный фильтр. Результаты всех трех методов могут искажаться за счет отражения флуоресцентного излучения от мениска жидкости, поскольку очень редко удается компенсировать эту ошибку. Наиболее воспроизводимы измерения в кюветах с крышками, которые могут быть заполнены без образования воздушного пузырька. [c.430]

Высокая оптическая плотность растворов приводит к ошибкам двух типов 1) реабсорбции энергии флуоресценции, заметно снижающей выход флуоресценции, и 2) неодинаковой интенсивности иа передней излучающей поверхности в приборах, в которых регистрация производится под прямым углом. Это происходит в результате изменений интенсивности возбуждающего света, обусловленных высокой оптической плотностью измеряемого раствора при длине волны возбуждения. Поэтому оптическая плотность пе должна превышать 0,2 и независимые измерения оптической плотности стандартных растворов и исследуемых образцов следует проводить при длинах волн возбуждения и излучения. [c.180]

Метод основан на измерении интенсивности флуоресценции комплекса алюминия с салицилаль-о-аминофеноло.м. Определение алюминия проводят после смывания остатка от выпаривания воды или кислоты ацетатным буферным раствором с pH 5,8—6,0. В качестве холостого используют буферный раствор. Определение выполняют методом добавок. Относительная ошибка определения составляет от 15 до 20%. [c.234]

Метод основан на измерении интенсивности флуоресценции кристаллофосфора 2Li20 Mg0 1,26 УОз-Мп. Спектр флуоресценции этого кристаллофосфора представляет собой бесструктурную полосу с максимумом при длине волны 668 нм. Кристаллофосфоры получают прокаливанием шихты указанного выше состава при 850 °С в течение 30 мин. Чувствительность определения 0,001 мкг Мп в 100 мг основы. Остальные ионы в количестве до 2 мкг практически не мешают определению. Ошибка определения составляет 30%. [c.236]

Метод основан па измерении интенсивности флуоресценции кристаллофосфора sl-Tl. ЧуЕСтвительность определения — 0,002 мкг таллия в 100 мгС 1. Кристаллофосфор получают кристаллизацией водных растворов иодистого цезия и таллия. Определению таллия в этих условиях не мешают 100-кратные количества марганца, никеля и висмута при 100-кратном избытке частично ослабляют люминесценцию таллия железо, медь, кобальт и хром. Поэтому определение таллия выполняют методом добавок. Продолжительность определения 15—20 мин, ошибка определения 30%. [c.242]

Метод основан иа измерении интенсивности флуоресценции кристаллофосфора PbS04- e0.2(Sm). В качестве аналитической используют полосу с максимумом 575 нм. Кристаллофосфоры получают, прокаливая двуокись церия с сульфатом свинца и самарием при температуре 850 °С в течение 30. чин. Большинство РЗЭ, а также железо, медь, кобальт и хром уменьшают интенсизность люминесценции кристаллофосфора, поэтому определение выполняют методом добавок. Продолжительность определения 30 мин. Чувствительность определения составлет 0,02 мкг самария в 100. мг основы. Ошибка 30, о. [c.244]

Рассеяние света под углом 90° к направлению падающего излучения изучалось с помощью экспериментальной установки, описанной в работе [3]. Хлороформ и 1,2-дихлорэтан обеспыливались обычным способом [3], все растворы и триоксан — фильтрованием через керамические фильтры ГИКИ-Ф11 с максимальным размером пор <0,9 ц. Отсутствие пыли проверялось визуально — наблюдением под малыми углами в интенсивном сходящемся пучке света. Вклад флуоресценции растворов и чистого триоксана исключался монохрома-тизацией падающего пучка света интерференционным светофильтром или светофильтром /-5 с максимумами пропускания для / = 5460 А и регистрацией рассеянного света этой же длины волны. Средняя случайная ошибка измерения интенсивности релеевской линии составляла 3—5%, степени деполяризации 5%. Термостатирование осуществлялось термостатом Вобзера с точностью 0,05°. [c.435]

Другим преимуществом расположения в линию является то, что оно позволяет сравнивать интенсивность флуоресценции (или замедленного испускания) растворов, содержащихся в разных цилиндрических кюветах, ири условии, что оптическая толщина кювет одинакова. Наблюдения при освещении таких кювет под прямым углом могут привести к ошибкам, так как люминесценция наблюдается через искривленную поверхность, а геометрия последней обычно неодинакова для разных кювет. Это несущественно при освещении в линию, где используются только два плоских окошка кюветы. Цилиндрические кюветы удобны в тех случаях, когда перед измерением нужно вакууми-ровать раствор (см. раздел III, И, 2), так как они выдерживают замораживание лучше, чем прямоугольные кюветы. Применение освещения в линию при определении квантового выхода образования триплетов описано в гл. IV. [c.220]

При измерении относительных выходов флуоресценции необходимо избегать ошибок за счет эффектов внутреннего фильтра, немонохроматичности возбуждающего света, флуоресценции кювет, тущения кислородом и фоторазложения. Ошибки, обусловленные первыми двумя факторами, в принципе легко устранимы, но на практике на них часто не обращают внимания. Уравнение (21) применимо лишь в том случае, если доля возбуждающего света, поглощаемая раствором, пренебрежимо мала. Оптическая плотность 0,01 (см. раздел 111,3,2) будет давать ошибку 2,3% в интенсивности наблюдаемой флуоресценции. Поэтому по возможности оптическая плотность не должна превышать этой величины. Если выход флуоресценции и чувствительность прибора малы и приходится использовать большие оптические плотности, необходимо вводить поправку на поглощение возбуждающего света (раздел П1,3,2) или, что лучше, подбирать одинаковые оптические плотности двух растворов. Оптическая плотность не должна превышать 0,4 на 1 см, если используется кювета толщиной 1 см, а свет отбирается из ее центра (т. е. эффективная оптическая плотность равна 0,2). Однако при современных чувствительных приборах такие оптические плотности приходится использовать редко. [c.248]

Для вычисления квантового выхода наблюдаемую интенсивность надо перевести в число квантов. Для этого требуется знать спектральное распределение света и спектральную чувствительность приемника. Боуэн и Соу-телл [58] описали метод, не имеющий этих недостатков. Кусок уранового стекла или иной флуоресцирующий экран, помещенный перед фотоумножителем, преобразует падающий свет с одной и той же постоянной эффективностью независимо от длины волны в их собственные полосы флуоресценции. Свет, который попадает на приемник, имеет при этом всегда одно и то же спектральное распределение, будь то свет от исследуемого образца или от стандартного образца, используемого для сравнения. Таким образом, отношение наблюдаемых интенсивностей дает прямое отношение квантовых выходов. Этот метод применим только в случае длин волн, лежащих в пределах полосы поглощения счетчика квантов, т. е. обычно в голубой и ближней ультрафиолетовой областях. Однако его можно было бы распространить на случай более длинноволнового излучения, если использовать такие вещества, как рубрен, который дает высокий выход флуоресценции и сильно поглощает в зелено-голубой области спектра. В качестве такого счетчика квантов удобен родамин В, флуоресцирующий в красной области спектра. Если флуоресценция поляризована, то ее угловое распределение неоднородно. В подобных случаях измерения при неизменном заданном угле приводят к ошибкам. Чтобы устранить эти ошибки, надо собрать весь испускаемый свет с помощью интегрирующей сферы, покрытой окисью магния. Образец или стандарт помещают в центр сферы, освещают через одно небольшое отверстие, а измерения проводят с помощью приемника, помещаемого у другого отверстия [93]. [c.92]

Визуальное сравнение флуоресценции дает менее точные результаты, чем измерения на флуорофотометрах, но изредка используется и эта методика. Для определения таких элементов, как бериллий, алюминий и галлий, по методам, описанным в соответствующих разделах, не требуется очень интенсивный источник ультрафиолетового света. Как на удовлетворительный источник при визуальных работах можно указать на ртутную лампу для прожекторного освещения с баллоном из пурпурного стекла корекс . Эта лампа дает достаточно интенсивное излучение. Производя сравнение, пробирки (стр. 84) или другие сосуды, содержащие анализируемый и один из стандартных растворов, держат рядом вертикально над самой лампой в темной комнате. Важно, чтобы видимый свет от источника был сведен к минимуму. При наблюдении пробирки следует менять местами, чтобы исключить ошибку из-за неодинакового освещения. При оптимальной концентрации (.ср. стр. 85) можно заметить разницу в интенсивности флуоресцен- [c.109]