Первичные клетки и трансформация

Первичный отбор гибридных клонов значительно упрощается, если в векторной молекуле предусмотрена специальная фенотипическая система селекции. При трансформации клеток чаще всего используют векторные молекулы ДНК, несущие гены устойчивости к антибиотикам и антиметаболитам. Поэтому на среде с определенным антибиотиком или антиметаболитом будут расти только клетки трансформантов. Особенно хорошо данная система селекции отработана для бактерий, так как получены векторные плазмиды, детерминирующие устойчивость трансформированных клеток сразу к нескольким антибиотикам. Если векторная плазмида определяет устойчивость к двум антибиотикам и при встройке в нее экзогенного фрагмента ДНК нарушается одна из генетических детерминант устойчивости к антибиотикам, то клоны клеток, содержащих такие гибридные ДНК, легко отличить от трансформантов, включающих исходный вектор, на средах с каждым антибиотиком в отдельности. [c.34]

Центральной проблемой в изучении процессов трансформации энергии в клетке является механизм образования первичного высокоэнергетического продукта (интермедиата Х У) [14], синтез которого непосредственно сопряжен с трансформацией энергии, освобождающейся при окислении. Предложено несколько гипотез для объяснения энергетического сопряжения [3, 14]. [c.409]

J. Первичные клетки и трансформация [c.18]

Остановимся теперь на количественном исследовании инициирования трансформации, понимая под этим первичное действие трансформирующей ДНК на клетку. [c.349]

Радиационный и фотохимический процессы распада перекисей протекают различным образом в зависимости от условий проведения экспериментов, температуры, концентрации, агрегатного состояния. В замороженных системах (при —196°) распад перекисей в разбавленных растворах под действием света и ионизирующего излучения приводит к образованию пар радикалов [75—77]. Это явление связывается с эффектом клетки. При повышении температуры наблюдается трансформация сложных спектров ЭПР в спектр перекисного радикала [78]. Образование радикалов НОг происходит за счет взаимодействия первично образующихся радикалов КО с молекулами гидроперекисей [c.399]

Способность чужеродного вещества подвергаться первичной биохимической атаке и последующей трансформации зависит от генетических особенностей живой клетки. Установлено, что в природе постоянно появляются новые комбинации генетического материала. В генетическом потоке возможен случайный обмен генетическим материалом как только происходит удачная перестановка, новый микроорганизм получает селективное преимущество. Благодаря обмену генами микроорганизмы могут быстро приобретать свойства, необходимые для деструкции новых для них веществ. [c.314]

Транспорт эндосом от плазмалеммы к центру клетки, где происходит их трансформация, протекает быстро, в течение короткого времени. Образовавшиеся эндосомы как в случае фагоцитоза, так и пиноцитоза, сливаясь друг с другом или с некоторыми лизосомами, преобразуются в эндоцитозные вакуоли. В эндо-сомах и вакуолях начинается первичное разложение захваченного материала. [c.16]

Если низкий уровень цАМФ ассоциирован с малигнизацией и (или) трансформацией, то должна быть возможной реверсия трансформированного фенотипа к нормальному путем повышения внутриклеточного уровня цАМФ. Однако следует помнить, что опухолевые клетки, обычно используемые в эксперименте, гораздо сложнее первично трансформированных вследствие появления нескольких дополнительных мутаций в системе цАМФ или в других локусах. Поэтому в данной опухолевой ткани только определенная часть клеток полностью или частично способна к реакции на повышение уровня цАМФ. Ниже обсуждаются типы опухолевых клеток, способных экспрессировать нормальный фенотип после повышения уровня цАМФ. [c.225]

При определении размеров YA всей клонотеки было обнаружено, что часть первичных трансформантов содержит не один, а несколько YA (2-4), отличающихся по молекулярной массе. Этот факт отмечен в публикациях и других авторов, которые считали его следствием проникновения в клетку при трансформации нескольких рекомбинантных структур одновременно. Однако выявлена и другая причина несколько YA в одной клетке могут явиться результатом структурной перестройки одного и того же [c.75]

Необходимость применения фидерного слоя при культивировании ЭС клеток связано с продукцией LIF клетками первичных эмбриональных фибробластов, которые обеспечивают достаточный уровень концентрации этого фактора в непосредственной близости от ЭС клеток. Попытка стабилизировать плюрипотентные свойства ЭС клеток мыши линии R1 путем трансформации их геном lif подтверждает его участие в процессах раннего развития и дифференцировки. [c.298]

Рис. VI—6. Схема последовательности формирования радиациоииого поражения иа различных уровнях биологической интеграции. Уровни биологической интеграции А — молекулы, Б — субклеточные структуры, В — клетки, Г — ткане. вые системы, Д физиологические системы, Е-т организм. 1 — период времени, необходимый для развития максимального количества повреждений за счет первичной биохимической трансформации и усиления поражения, составляющих основу эффективной дозы лучевого воздействия. Б низко-метаболизирующих объектах максимум повреждений может быть значительно отдален по времени от конца облучения (эффект хранения сухих семян иа воздухе). В организме млекопитающих ti совпадает с окончанием облучения или близок к нему. 2 — период наибольшего развития в тканях клеточной депопуляции. — время наибольшего развития наблюдаемых изменений на уровне организма, период клинического разгара болезни. 1 — период начинающегося разрешения лучевого поражения организма по Акаеву, Максимову, Малышеву, 1972)

Вирусы можно также внести в культуру вместе с загрязненным трипсином, но главным источником вирусного загрязнения культуры оказываются сами клетки, и особенно первичные клетки. Поскольку многие виды животных могут страдать латентной вирусной инфекцией, не сопровождаемой явными симптомами, то и многие культуры первичных клеток могут нести в себе эти вирусы. Проблема усложняется еще и тем, что многие клетки первично получаются из опухолей, возникших в результате вирусной трансформации, а следовательно могут нести в себе весь вирусный геном или его часть в той или иной форме. Манипуляции с клетками при установлении первичной культуры могут привести к индукции вируса и соответствующему цитопатогенному эффекту. Проблема оказывается более серьезной, если видимого цитопатогенного эффекта не наблюдается, но вирус при этом продолжает реплицироваться с низкой скоростью или только в части клеток. Так, первичные культуры клеток от детей с лимфомой Бёркитта не обнаруживают никаких признаков присутствия вируса Эпштейна-Барр в течение нескольких пассажей, после чего некоторые клетки начинают обнаруживать положительную иммунофлуоресценцию (Неп-1е, Henle, 1966). [c.121]

Возникновение онкогенных мутаций - стадия инициации канцерогенеза (превращения нормальной клетки в опухолевую), а вызывающие канцерогенез агенты наз канцерогенами-инициаторами. Дальнейшие изменения клетки на пути злокачеств. превращения вызывают промоторы канцерогенеза, к-рые обусловливают нарушения межклеточного взаимод., клеточного обмена, приводят клетку в состояние фенотипически выраженной опухолевой трансформации и к развитию опухоли. Первичный опухолевый узел прогрессирует в осн в результате клеточного отбора, изменяя свои св-ва в зависимости от разл воздействий (гормональных, химиотерапевтических) чаще всего в [c.306]

Культивируемые клетки, инфицированные некоторыми онкогенными вирусами, могут претерпевать злокачественную трансформацию. Наиболее существенные морфологические и биохимические изменения, связанные с трансформацией, приведены в таблице 57.5. Изменения затрагивают форму клеток, их подвижность и рост, адгезивность к культуральной подложке, а также ряд биохимических процессов. Речь идет о первичных процессах, вызывающих превращение нормальной клетки в опухолевую, а также о вторичных—обусловленных этим превращением. Большое значение в исследованиях канцерогенеза имеет представление, согласно которому трансформация клеток сопряжена с приобретением ими особых свойств. Однако изменения клеток, известные под общим названием трансформация , все-таки не делают трансформированные клетки идентичными опухолевым клеткам in vivo. [c.357]

Первичная атака Биохимические превращения ксенобиотика, доступного для ферментных систем клетки, начинаются с его первичной атаки. Последующая последовательная трансформация органического ксенобиотика в одно из соединений, вступающего затем в основные (центральные) пути катаболического или анаболического обмена, происходит в ходе так называемого подготовительного (периферийного) метаболизма. Микроорганизмы под воздействием ферментов переводят природные и синтетические вещества в так называемые ключевые соединения (фосфорилиробан-ные углеводы, пируват, глюконат, интермедиаты цикла трикарбоновых кислот, жирные кислоты, аминокислоты, пуриновые и пиримидиновые основания, пирокатехин и др.) - вещества, из которых синтезируются необходимые компоненты клетки и извлекается необходимая энергия. Превращение синтетического соединения с помощью ферментов, не относящихся к ферментам подготовительного метаболизма, - крайне редкое явление. [c.312]

Следовательно, сам факт переноса клеток в культуру заставляет их приобретать определеиные первоначальные черты, приближающие их к злокачественной трансформации (изменение формы клеток и их поверхности, появление способности размножаться в условиях, в которых ранее они не размножались, изменение чувствительности к росторегулирующим веществам и др.). Клетки, размножающиеся в культуре,— это клетки, уже вступившие на путь, ведущий к трансформации. Надо быть очень осторожным при попытках использовать данные, полученные в культуре, для исследования первичных механизмов злокачественной трансформации клеток в организме. [c.19]

Гистологическая картина образования активных антителопродуцентов. Одной из характерных черт организации лимфоидной ткани является наличие так называемых центров размножения, которые представляют собой место пролиферации, трансформации и селекции В-клеточных клонов (рис. 9.21). В-Лимфоциты, активированные хелперными Т-клетками в тимусзависимой зоне лимфоидной ткани либо сразу дифференцируются в плазматические клетки, продуцирующие ранние, суммарно низкоаффинные антитела, либо перемещаются в первичные фолликулы и образуют там центры размножения. Здесь они, во-первых, подвергаются селекции на наличие высокоаффинных антигенраспознающих иммуноглобулиновых рецепторов и, во-вторых, завершают дифференцировку в плазмоциты, продуцирующие высокоаффинные антитела. Часть В-клеток с высокоаффинными рецепторами трансформируется в клетки памяти. [c.251]

При трансфекции компетентных клеток адсорбция ДНК фага и ее поглощение, видимо, происходят так же, как и при трансформации хромосомной ДНК- В процессе поступления в клетку фаговая ДНК фрагментируется. Затем наступает этап так называемой первичной рекомбинации, когда фрагменты фаговой ДНК воссоединяются, дополняя друг друга (N. Notani, 1973). Этот процесс требует присутствия в клетке нескольких молекул ДНК, дублирующих друг друга, поскольку некоторые участки одной молекулы могут быть повреждены при фрагментации. Например, для образования одной инфекционной частицы фага Hl Вас. subtilis требуется, чтобы в клетку поступило 4—5 нативных молекул-геномов ДНК. [c.118]

Какие события ответственны за измеримое повышение внутриклеточной концентрации Na, обнаруживаемое в трансформированных клетках Shen и сотрудники (1978) связывают изменение транспорта Na с неопластической трансформацией эпителия молочной железы мышей. Авторы измеряли проницаемость апикальной мембраны клеток первичной культуры молочной железы мышей в середине беремен-ностИд а также при пренеопластическом и неопластическом состояни- [c.378]

Сама же ответная реакция, в том числе и при первичном заражении, развивается за счет превращения другой части потомства активированных В-клеток в плазмациты. Увеличивается объем цитоплазмы, ядро оттесняется в сторону, разрастается ретикулярная система, появляются все компоненты, необходимые для массированного синтеза и секреции белков. Шероховатые мембраны с сидящими на них полисомамн окружают внутренние мешочки и каналы, по которым новосинтезирован-ные антитела переходят в хорошо развитый аппарат Гольджи и с его помощью выводятся наружу. Начинается поступление в кровь специфических антител — первичный иммунный ответ. Каждый плазмацит секретирует до двух тысяч антител в секунду. Это происходит уже не в кровотоке, а в лимфатических узлах, где плазмациты оседают, но начальный толчок трансформации в плазмацит дает первая встреча прародительской пассивной В-клетки с активировавшим ее чужеродным агентом. Эта встреча происходит в кровеносном русле, в тканевой жидкости или в русле одного из лимфатических каналов. Отметим попутно, что, помимо антигенов, обнаружены и другие, неспецифические активаторы деления лимфоцитов — митогены растительного происхождения (фитогемагглютинин, конканавалин А) и некоторые бактериальные экстракты. [c.87]

При введении в первичные эмбриональные фибробласты крысы онкогенов, принадлежащих к тому или другому классу, фокуды морфологической трансформации получить не удается. Однако введение различных онкогенов методом котрансформации с доминантными маркерами устойчивости позволяет определить, какие признаки привносятся в нормальную клетку тем или иным онкогеном. Так, [c.226]

Трансформация эмбриональных фибробластов крысы двумя онкогенами. При введении двух онкогенов в первичные эмбриональные фибробласты крысы возможен отбор трансформантов по фокусам морфологической трансформации без введения доминантных маркеров устойчивости. Процедура получения морфологических трансформантов при обработке клеток кальцийфосфатным преципитатом ДНК такая же, как описано выше. Смесь двух плазмид, которыми трансформируют первичные эмбриональные фибробласты, растворяют в буфере Б и формируют преципитат, которым обрабатывают клетки. Суммарное количество ДНК на 60 мм чашку, в которой находится 3 10 клеток, не должно превышать 20 мкг. Через сутки клетки рассевают и, меняя каждые 3 сут среду, ожидают появление фокусов морфологической трансформации, которые формируются через 18—21 сут после обработки клеток преципитатом плазмидной ДНК. Затем фокусы выделяют с помощью титановых цилиндров и после размножения клеток определяют гибридизацией по Саузерну присутствие двух онкогенных последовательностей, вводимых в составе различных плазмидных векторов. Выделенные трансформантные клоны можно использовать для изучения различных аспектов канцерогенеза (in vitro и in vivo). [c.230]

Следует отметить, что при использовании как кальций-фосфатного, так и ДЭАЭ-декстра-нового методов эффективность проникновения молекул ДНК в клетки животных существенно зависит от линии клеток. Кроме того, обнаружилось, что, хотя фосфат кальция успешно применяют для генетической трансформации перевиваемых культур клеток, он обычно непригоден для введения молекул ДНК в дифференцированные клетки первичных культур. Так, первичная культура клеток нормального эпителия бронхов лизируется преципитатами фосфата кальция, у других первичных культур наблюдаются ингибирование роста, нарушения клеточного цикла. В лаборатории Т. Хариса (1987 г.) уцалось преодолеть данное затруднение, используя стронций-фосфатное соосаждение экзогенной ДНК на монослой такой высокочувствительной к катионам кальция первичной культуры, какой является культура клеток нормального эпителия бронхов. [c.336]

Кяеткы-хозяева. Для трансформации с помощью рекомбинантных ДНК и для изучения экспрессии генов чаще всего используют животные клетки, выращенные в культуре клеток (или, менее строго, культуре тканей). Подходящую среду для эффективной экспрессии многих клонированных генов, в том числе и генов млекопитающих, обеспечивают также ооциты Xenopus (гл. 7). В последние годы были разработаны методы введения клонированных последовательностей ДНК в эмбрионы животных на ранних стадиях развития и даже в зиготы млекопитающих. ДНК способна встраиваться в геном таких эмбриональных клеток, вызывая их стабильную трансформацию. Получено жизнеспособное потомство, причем в тех случаях, когда в геноме первичных половых клеток введенная ДНК стабильно сохраняется, новые генотип и фенотип наследуются в последующих поколениях по законам Менделя. В случае плацентарных млекопитающих развитие нового потомства зависит от эффективности имплантации трансформированных ранних эмбрионов в матку матери. Системы для такой модификации первичных половых клеток от [c.257]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология