Буферный раствор Михаэлиса

При буферном методе, так же как и при методе Михаэлиса, предварительно следует подобрать соответствующий индикатор, к зоне перехода которого может быть отнесено значение pH исследуемого раствора, а также соответствующую для этого буферную систему. Предварительное определение pH обычно производится также при помощи универсального индикатора. [c.67]

Если константа диссоциации индикатора известна, то измерение глубины окраски, отвечающей отношению а/(1—а), позволяет определить pH раствора. Этот метод часто называют методом Михаэлиса. Чтобы уменьшить солевую ошибку, следует пользоваться формальной константой диссоциации индикаторной кислоты, соответствующей ионной силе исследуемого раствора. При определении значений формальных констант диссоциации индикаторов полезно применять буферные растворы, pH которых измерено электрометрическим методом (стр. 134). [c.144]

В зависимости от типа приборов электрофорез на бумаге обычно длится от 4 до 16 ч. Если используется общераспространенный буферный раствор Михаэлиса, то белки сыворотки дают 5 четко разграниченных фракций. После фиксации полоски бумаги можно легко обработать красителями, специфичными для белков, липо- или гликопротеидов. Окрашенные полоски можно хранить или, разрезав на участки, элюировать для фотометрического определения каждой фракции. Электрофорез на бумаге хорошо себя зарекомендовал в повседневной работе клинической лаборатории. [c.12]

Буферный раствор Михаэлиса очень удобен для иммуно-электрофоретического анализа белков сыворотки крови. Однако можно использовать и другие буферные растворы. В этих случаях, разумеется, следует готовить агаровый гель на том же буферном растворе, в котором проводится электрофорез. [c.140]

Фосфатные буферные растворы по Михаэлису [c.385]

Боратные буферные растворы по Михаэлису (рН=7,6—12,3) [c.385]

Метод Михаэлиса очень прост, поэтому он находит широкое применение, хотя ряд Михаэлиса охватывает меньший интервал pH, чем рассмотренный выш ряд буферных растворов. [c.469]

Зависимость констант ]Михаэлиса кз и Км от pH может быть весьма сложной. Поэтому для исследования зависимости от pH среды требуется использование буферных растворов. При этом нередко оказывается, что между компонентами буферного раствора (особенно НРО ) и ферментом имеется определенное взаимодействие. Кроме того, влияние на активность белка и активность субстрата также оказывает ионная сила раствора, что еще в большей степени усложняет интерпретацию процесса в буферном растворе. Этот факт не всегда принимался во внимание. Во всех уравнениях, применявшихся в этом разделе, концентрации должны быть заменены на активности. Когда концентрация субстрата меняется в широком диапазоне, то поправка на активность может быть весьма существенной. Например, изучение скорости реакции уреаза — мочевина в диапазоне концентрации мочевины от 0,0003 до 2,0 М показало, что при высоких концентрациях мочевины скорость реакции падает [112]. Это может быть связано с изменением активности, а не механизма реакции. [c.564]

Работа № 34 а. Буферный метод определения pH. Работа № 34 б. Свойства буферных растворов. . Работа № 35. Безбуферный метод определения pH (по Михаэлису).................. [c.336]

Каломельный электрод сравнения легко проверяется по методу Михаэлиса по отношению к водородному электроду в стандартном ацетатном буфере [108]. Стандартный ацетатный буфер готовят смешением 100 мл 1 М гидроокиси натрия с 200 мл 1 М уксусной кислоты и разбавлением до. 1 л полученной смеси водой, не содержащей двуокиси углерода. pH этого раствора 4,64 при 25° С [22]. Кларком приведен перечень других стандартных буферных растворов, которые также могут быть использованы. (Между прочим, необходимо отметить, что не следует использовать боратные буферы с фенолами и спиртами, так как при этом возможно образование эфиров.) [c.121]

Существуют два основных колориметрических метода определения концентрации ионов водорода буферный и безбуферный. Точность этих методов не превышает 0,1 pH. Наиболее распространенным методом безбуферного определения pH является метод Михаэлиса, основанный на применении стандартных рядов, полученных с одноцветными индикаторами групп нитрофенола в растворах с различным значением pH (см. табл. 20). По методу Михаэлиса может быть определено pH растворов в широком диапазоне от 2,8 до 8,4. Для выяснения, с каким же из указанных индикаторов следует производить определение pH, предварительно при помощи универсального индикатора узнают примерное значение pH исследуемого раствора, а затем производят окончательное определение pH с одним из индикаторов. [c.88]

В макроварианте вырезают полоски мембраны шириной 4 см и увеличивают объем наносимой сыворотки до 0,05—0,06 мл. В этом случае электрофорез продолжается 4—5 ч при напряжении 200 В или 1,5—2 ч при напряжении 400 В. Ионную силу буферного раствора Михаэлиса при этом уменьшают, разбавляя его дистиллированной водой в соотношении 3 2. В остальном макрометод ничем не отличается от микрометода. [c.72]

Приготовление буферного раствора. Иммуноэлектрофореа белков проводят обычно в буферном растворе Михаэлиса, имеющем pH 8,2 и ионную силу 0,05. [c.138]

Буферный раствор Михаэлиса готовят следующим образом 47,6 г диэтилбарбитурата натрия растворяют в 3000 мл дистиллированной воды, имеющей pH 7, и подкисляют сначала примерно до pH 8,4 65 мл 1 н. НС1, а затем осторожно до pH 8,2. После этого добавляют дистиллированную воду до конечного объема 4265 мл. Если необходимо получить буферный раствор меньшей ионной силы, производят дальнейшее разбавление. [c.138]

Как правило, для определения pH достаточно от одной до трех капель 0,1—0,5% раствора индикатора на 10 мл исследуемого раствора или вспомогательного буферного раствора. Если индикатор слабо растворим в воде, то удобно применять его водорастворимую соль можно также растворить кислотную форму индикатора в разбавленном щелочном растворе или 50%-ном этаноле. Следует г- чательно избегать избытка щелочи. Кольтгоф рекомендует следующие составы растворов одноцветных индикаторов Михаэлиса (сь табл. VI. 2) пикриновая кислота и динитрофенолы— 0,04% водиле растворы солей натрия мононитрофенолы— 0,1% водный рас-хвор фенолфталеин — 0,04% раствор в 30%-ном этаноле салицю.ювый желтый — 0,1% спиртовый раствор для pH 10—11 и 0 025% раствор для pH 11—12. [c.132]

Для определения pH воды и разбавленных водных растворов колориметрическим методом выпускаются специальные наборы и аппараты, в частности аппараты Михаэлиса ММ-1 для проб объемом 0,5 мл ММ-2 — для проб объемом 5 мл. Индикаторами служат а-динитрофенол (pH = 2,8ч-4,4) у-динитрофенол (pH = 4,0 5,4) п-динитрофенол (pH = 5,4 н- 7,0) и л-динитрофе-нол (pH = 6,8 + 8,4), а также универсальный индикатор для предварительного определения pH в пределах 3—8. К универсальному индикатору прилагается цветная шкала. Каждому индикатору соответствует серия окрашенных буферных растворов, причем pH каждого раствора отличается от предыдушего на 0,2 единицы pH. [c.359]

Ацетатный буферный раствор по Михаэлису pH = 4,618 при 18° С (50 мл 1 н. раствора NaOH -f + 100 мл 1 н. уксусной кислоты -f - - 350 мл воды). [c.133]

После приближенного производят точное определение pH посредством сравнения цвета исследуемого раствора с цветами заранее приготовленных растворов. Для этого применяют а) буферные растворы с известным значением pH, б) растворы с определенным соотношением кислотной и щелочной форм индикатора (по Гиллеспи) или в) растворы с переменным содержанием индикатора в одной форме (по Михаэлису). В первом случае способ определения pH называется буферным, в остальных—безбуфер-ным. [c.227]

Хотя буферные растворы вскоре стали широко использоваться, новая единица измерения кислотности интересовала только небольшую группу ученых, и в том числе лишь считанных химиков. Практическую важность этой характеристики первыми оценили биохимики. Большинство работ, посвягценных этому вопросу, было выполнено в Карлсбергской лаборатории в Дании, а в 1914 г. была опубликована первая монография, озаглавленная О концентрации. водородных ионов ( Die Wasserstoffionkon-zentration ). Ее автор, Л. Михаэлис, утверждал, что хи-мик-физиолог должен четко представлять себе, что такое pH. В качестве примера, наглядно показывающего, к каким ошибкам может привести пренебрежение этой величиной, он демонстрирует работу некоего автора, изучавшего эффективность инвертазы. Установив, что эффективность ослабляется при введении сыворотки крови, данный автор сделал вывод, что сыворотка содержит какие-то антагонисты инвертазе. На самом же деле снижение активности обусловлено изменением pH при введении сыворотки крови, и аналогичный эффект будет наблюдаться при введении любого раствора с тем же, что и у сыворотки, значением pH. [c.232]

Таким образом, устойчивые и воспроизводимые показания индикаторных мектродов могут быть получены в растворах многих обратимых редокс-си-стем, но свойства электродов можно охарактеризовать, только при условии усложнения методики поверки, связанной с использованием растворов малой буферности [208]. Общепринятого решения названного противоречия нет. Представляется, что испытание электродов на заводе-изготовителе должно быть в определенной мере компромиссным 2— контрольных раствора, один из которых малобуферный, измерения в нем являются решающими для оценки качества изготовления. Растворы системы [Ре(СМ)бР- в силу исключительной устойчивости, доступности реактивов и простоты обращения для этих целей наиболее пригодны. Они хорошо изучены, в том числе и как поверочные растворы (при концентрации компонентов 10 М—10 М) и носят в литературе название растворы Михаэлиса или растворы Зо Белла [209-211]. [c.117]

Катаяма и Икеда [18] разработали методику двумерного разделения стрептомицинов, сочетающую ТСХ на силикагеле и последующий электрофорез. Полного разделения всех компонентов удалось достичь методом ТСХ в четыре этапа, используя 1) насыщенный водой бутанол, содержащий по 2 % 1-толуол-сульфокислоты и пиперидина (растворитель 81), с последующим электрофорезом в 1 %-ном тетраборате натрия 2) ТСХ с 3 %-ным ацетатом натрия (растворитель 89) с последующим электрофорезом в 1 %-ном тетраборате натрия 3) ТСХ с 5г с последующим электрофорезом в буфере Михаэлиса—Веронала, pH 8,0, и 4) тех с 82 с последующим электрофорезом в 0,04 М буферном растворе формиата аммония, pH 3. Соединения обнаруживали реактивом Т-239. [c.534]

Полученные результаты находятся в согласии с данными Михаэлиса и Мицутани [2]. Как в нашем, так и в их случае прибавление около 50 объемных процентов этилового спирта к буферным растворам со слабыми кнс,лотами ведет за собою повышение, составляющее около 1 единицы pH. [c.145]

Главный недостаток, которым страдали ранние работы по ферментативной кинетике, состоял в том, что в них не придавали значения влиянию на ферментативный катализ Н" -ионов. В водных растворах концентрация Н -ионов может меняться от 1 М до приблизительно М. Этот огромный интервал обычно сжимают до разумных размеров введением логарифмической шкалы pH = —lg[H ]. Свойства всех ферментов очень сильно зависят от pH, и механизм их действия невозможно понять, если не ввести как непременное условие проведения любого серьезного исследования контроль pH, что и было сделано Михаэлисом и его сотрудниками. На самом деле первый шаг в этом направлении сделал несколькими годами ранее Сёренсен 11341, который ввел представление о шкале pH и описал использование буферных растворов в своей классической работе, показавшей, насколько важна концентрация водородных ионов в исследованиях ферментов. Несмотря на разногласия при интерпретации рН-эффектов в ферментативной кинетике, совершенно ясно, что любая попытка провести кинетическое исследование без соответствующего контроля pH бессмысленна. [c.142]

Метод безбуферного определения pH (по Михаэлису), В этом методе используют чаще одноцветные индикаторы, нитро- и дини-грофенолы, у которых кислотная форма бесцветна, а щелочная окрашена. В этом методе в отличие от буферного шкала готовится на растворах щелочи, в которых весь прибавленный в пробирку и1Дикатор полностью диссоциирован п интенсивность окраски можно считать пропорциональной количеству прибавленного индикатора. [c.58]

Б. Для колориметрического определения pH в отличие от предыдущего случая индикаторы с очень узкими интервалами pH перехода окрасок мало пригодны. Наибольшее применение имеют двуцветные индикаторы, которые в достаточно широких интервалах pH перехода своих окрасок показывают заметные изменения оттенков при колебаниях pH на 0,1—0,2. Применяют и одноцветные индикаторы (по Михаэлису), цвет которых с изменением pH становится более или менее интенсивным при сохранении своего оттенка. В обоих случаях определяют цвет, который принимает индикатор в растворах с разными pH, приготовляя серию соответствующих стандартных буферных раст оров и проверяя их pH электрометрическим способом. [c.288]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология