Тонкослойная хроматография ТСХ градиентная

Для достижения более полного разделения пользуются градиентной тонкослойной хроматографией (градиентное элюирование) — применение элюирующей системы с меняющейся концентрацией солей (градиент концентрации), меняющимся отношением полярных и неполярных растворителей (градиент полярности), меняющимся значением pH (градиент pH) [221,238]. [c.102]

В тонкослойной хроматографии можно получать также и двумерные или круговые хроматограммы. Для градиентного элюирования применяют специальные камеры, в которых пластины помещаются на сетки. Выше сетки имеется отвод для смеси растворителей, снизу подается второй растворитель. [c.360]

Стадии схемы разделения показаны на рис. 1.3 и рассмотрены в разд. 1.2.3. Прежде чем переходить к крупномасштабному препаративному разделению, связанному с затратами на материал и рабочую силу, разделение, если это вообще возможно, следует предварительно оптимизировать и испытать в малом масштабе. Наилучшую методологию для этих целей дает аналитическая ЖХ, В некоторых ситуациях может быть также с успехом использована тонкослойная хроматография (ТСХ). Для правильного последующего масштабирования система малого масштаба должна иметь как молено больше общих параметров с системой большего масштаба, которая будет использована. Соответствие параметров особенно важно в распределительной и градиентной хроматографии. Оно несколько менее строго в случае простых разделений с помощью адсорбционной хроматографии, [c.56]

Отражено современное состояние работ в области тонкослойной хроматографии (ТСХ) - распространенного и эффективного метода исследования органических и неорганических соединений. Рассмотрена теория хроматографического процесса в тонком слое. Описаны подходы к эффективности метода в зависимости от влияния различных факторов, подходы к оптимизации процесса, новые приемы в технике работы, аппаратура, сорбенты, растворители и их свойства. Большое внимание уделено градиентным методам и переносу условий разделения смесей в ТСХ на колоночный вариант хроматографии, а также количественной оценке тонкослойных хроматограмм. [c.2]

Система с градиентным элюированием обладает рядом преимуществ по сравнению с методом тонкослойной хроматографии. Во-первых, сводится к минимуму возможность ошибки, поскольку разделение идет в стандартных условиях, а полученные результаты можно контролировать методом ТСХ. Во-вторых, этот метод позволяет выявлять необычные аминокислоты или устойчивые к гидролизу пептиды, что в некоторых случаях представляет большой интерес. Как показано на рис. 33.8, на одной колонке удается разделить все обычные аминокислоты, а при соблюдении стандартных условий провести и количественный анализ. Однако эти преимущества достигаются благодаря применению более сложного оборудования и больших количеств веществ (по крайней мере, вдвое по сравнению с ТСХ). [c.377]

Градиентная хроматография. В последнее время в тонкослойной хроматографии все шире начинает использоваться метод градиентной жидкостной хроматографии [9]. По сравнению с обычными условиями хроматографии использование различных видов градиента позволяет значительно улучшить разделение анализируемой смеси и расширяет возможности этого метода. [c.31]

Применение метода градиентной хроматографии в значительной мере расширяет возможности хроматографии в тонких слоях. Дальнейшее развитие тонкослойной хроматографии возможно пойдет в этом направлении по пути разработки и применения соответствующей техники и аппаратуры. Однако следует отметить, что этот метод более сложен. [c.33]

Жидкостная колоночная хроматография по сравнению с другими методами разделения имеет ряд преимуществ мягкие условия опыта (комнатная или близкая к ней температура), возможность регулирования селективности разделения с помощью различных элюентов, использование методов ступенчатого и градиентного элюирования, отсутствие влияния окружающей атмосферы на сорбент и разделяемую смесь (в отличие от бумажной и тонкослойной жидкостной хроматографии). В результате использования высокоскоростной жидкостной хроматографии при давлениях у входа в колонку в десятки МПа и разработки современных моделей жидкостных хроматографов этот метод стал успешно конкурировать с газовой хроматографией. [c.32]

Выбор методики анализа фракций определяется природой анализируемого материала причем выбрать методику анализа, а в некоторых случаях и испытать необходимо перед началом хроматографирования. Применяют физические, химические и биологические методики. Чаще всего измеряют показатель преломления. Пользуются также различными колориметрическими методами, а также тонкослойной или бумажной хроматографией и электрофорезом. Идеальным способом является детектирование радиоактивных изотопов. Измеряя pH и электропроводность отбираемых фракций, можно контролировать условия элюирования. Именно такой контроль позволяет воспроизводить условия градиентного элюирования. В ряде случаев очень полезно комбинировать несколько методов детектирования. Полезны также непрерывное автоматическое детектирование (с достаточно высокой чувствительностью) разделенных соединений и регистрация хроматограмм (см. разд. 8.6, 8.7). Результаты измерений записывают в виде кривой зависимости измеряемой величины от объема элюата или номера фракции. Исходя из распределения пиков на хроматограмме некоторые фракции можно объединить. При этом необходимо следить, чтобы объединялись совершенно чистые фракции, не содержащие примесей других компонентов, иначе потребуется повторное хроматографирование. Фракции, предназначенные для количественных анализов, хранят в темноте и на холоду с тем, чтобы не допустить нежелательных реакций. Фракции соединений, окисляющихся на воздухе или поглощающих диоксид углерода, следует хранить в герметически закрытых сосудах. [c.281]

Менее важные факторы (температура, pH, толщина слоя и т.д.) рассматриваются в главах VII и VIII. Обсуждаются и теоретические, и практические аспекты градиентных вариантов тонкослойной хроматографии (XI). [c.25]

В зависимости от сорбционных свойств разделяемых компонентов и их соотношений в разделяемой смеси применяются разные методы тонкослойной хроматографии [5] а) хроматография с элюентом постоянного состава б) хроматография с элюентом переменного состава при фронтальном разделении многокомпонентного элюента на активном слое (полизональная хроматография) в) градиентная элюция г) хроматография в условиях поперечного размывания пятен д) двумерные комбинированные методы тонкослойной хроматографии. [c.86]

Фотометрические детекторы для жидкостной хроматографии являются, как правило, двухдучевыми. С их помощью определяют разность поглощения света в измерительной и сравнительной кюветах, через которые, соответственно, пропускают элюат с колонки и растворитель. Может быть использован и принцип двухволновой фотометрии, когда детектор имеет только одну кювету, через которую движется элюат с колонки. Фотометрирование проводят на двух длинах волн. При этом на одной длине водны поглощает как хроматографируемое вещество, так и растворитель, а на другой — только хроматографируемое вещество. Таким образом, можно выделить поглощение света анализируемым веществом. Однако для этого необходимо знать соотношение мольных акстинкций растворителя на обеих длинах волн. Преимуществом метода двухволновой фотометрии является возможность более точного учета изменения оптической плотности растворителя при градиентной элюции и фотометрии оптически неоднородных объектов, например при сканировании хроматографических капиллярных колонок или сканировании пластинок в количественной тонкослойной хроматографии, где необходимо определить оптическую плотность фона и поглощения хроматографического вещества в одной точке пространства. [c.95]

УП. 4. Полизональная и градиентная тонкослойная хроматография [c.265]

Полиэтиленгликольадипаты с молекулярными массами 370, 740, 980 и 2240 разделены на силикагеле АСК в метилэтилке-тоне [156]. Олигомерные полиэтиленгликольтерефталаты разделяли градиентным элюированием на окиси алюминия [157]. Используя колоночную и тонкослойную хроматографию, удалось разделить полиэфиры, пластифицированные маслами [158]. Сефадекс ЬН-20 примепяли для разделения олигомерных модельных смесей, состоящих из продуктов взаимодействия ди-фенилкарбоната и бисфенола-А [159]. [c.304]

Для проведения тонкослойной хроматографии методом градиентной элюции в комплекте КТХ-01 предусмотрены автоматическое устройство для создания градиента (автоград) с капиллярными резервуарами для хранения градиентных растворов 4 и проточная камера 5. [c.20]

Хроматографическое разделение веществ в ТСХ может осущест-Гвляться различными способами. Тонкослойная хроматография, в том числе и неорганическая, в зависимости от ряда условий (соот-й ение компонентов в разделяемой смеси, их сорбционные свойства и т. д.) может осуществляться в различных методических ва-%мнтах хроматография с элюентом постоянного и переменного состава, градиентная хроматография, двумерная и повторная хро- л ография, хроматография в условиях поперечного размывания пятен и др. [c.17]

Рис. 5.19. Разрез нижней части камеры для тонкослойной хроматографии с применением градиентного элюирования [167] (с разрешения авторов и Birkenhaeuser Verlag).

Как видно из рис. 187, прн повышении степени предварительного насыщения последовательно снижаются отмечаемые значения Rf, но увеличивается скорость перемещения визуально обнаруживаемого фронта демонстрационная пластинка, помешенная в камеру Vario-KS, была подвергнута насыщающему воздействию дихлорметана в течение различных периодов времени (для соседних дорожек такое градиентное изменение степени предварительного насыщения оказалось ступенчатым). При выдержке 1-2 ч достигалось сорбционное насыщение. Значения Rf для Жирорастворимого желтого красителя (самое верхнее пятно) снижались от 0.71 (при отсутствии предварительного насыщения) до 0.32 (при предварительном насыщении в течение 2 ч). Основным последствием предварительного насыщения однокомпонентной подвижной фазой является пропорциональное снижение значений Rf. Это справедливо и для случая разделения на тонкослойных пластинках с обращенной фазой, и для классического варианта твердожндкофазной хроматографии (при употреблении относительно слабых растворителей), и для работы с сильными растворителями, когда содержание влаги мало (иначе попавшая в слой вода вытесняется растворителем, что обсуждается в следующем разделе). [c.124]

Проявление тонкослойных или бумажных хроматограмм может осуществляться путем восходящего, нисходящего, горизонтального или радиального движения растворителя. При восходящей хроматографии ослол непия, связанные с образованием каналов при движении растворителя, сводятся к минимуму. При непрерывном проявлении растворитель продвигается до конца бумаги или тонкого слоя в одном опыте. При многократном проявлении после того, как фронт растворителя достигает края листа, растворителю дают испариться и повторяют проявление при том же направлении движения растворителя. Ступенчатое проявление включает проявление на пластинке в неполярном растворителе, испарение растворителя и второе проявление в более полярном растворителе. При двухмерном проявлении также последовательно применяют два растворителя сначала проводят хроматографирование в одном направлении, затем высушивают пластинку для испарения первого растворителя, поворачивают пластинку на 90° и проводят проявление вторым растворителем. При градиентном элюировании состав растворителя меняется в ходе проявления [94]. Эта методика, однако, сложна, в ней теряется простота тонкослойной или бумажной хроматографии. [c.553]

Метод тонкослойной гельфильтрации может быть использован также для приблизительного определения молекулярного веса веществ, имеющихся в небольшом количестве ( 0,1 мг белка) [36, 37]. Виланд и Детерманн [38] применили градиентную хроматографию на слое ДЕАЕ-сефадекса для разделения энзимов молочнокислых дегидрогеназ и испытания их однородности. [c.317]

На рис. 9.6 доказана выпускаемая фирмой Phaгma ia камера для нисходящего хроматографирования [2], предназначенная для тонкослойной гель-хроматографии. Для горизонтального элюирования ири различных, но точно устанавливаемых условиях предварительного насыщения слоя сорбента можно использовать К5-жамеры (рис. 9.7). Оптимальные условия разделения в этих камерах можно быстро установить. Другие типы камер, используемые для специальных методов, например проточного (непрерывного) элюирования, градиентного элюирования или круговой хроматографии, описаны в монографиях по ТСХ ([2Э, [c.95]