Горизонтальное элюирование

К5-камеры служат для горизонтального элюирования. Пластинка располагается слоем сорбента вниз и служит как бы крышкой плоской камеры, содержащей необходимые растворители. Свободный объем камеры невелик. [c.357]

Выше описано разделение путем восходящего элюирования. Возможны иные варианты элюирования [244] нисходящее элюирование горизонтальное элюирование (круговая хроматография [250]) — пробу наносят по кругу на квадратную пластинку с тонким слоем сорбента (на пересечение диагоналей), в центр подают растворитель, вещества разделяются с образованием концентрических зон многократное элюирование одним и тем же растворителем (после элюирования пластинку высушивают и операцию повторяют со свежей порцией элюента) ступенчатое элюирование — многократное элюирование разными растворителями центрифужное элюирование — под действием центробежной силы движение потока растворителей ускоряется в 2—3 раза градиентное элюирование — состав элюента непрерывно изменяется. [c.103]

Описаны два способа выделения компонентов из слоя адсорбента путем использования дополнительного элюирования [154]. По первому способу после элюирования смеси в вертикальном направлении слой адсорбента сушат, часть адсорбента вокруг пятен (видимых в УФ-свете) удаляют и на адсорбент возле пятна помещают пятиугольник из беззольной фильтровальной бумаги. Пластинку с адсорбентом и бумагой покрывают стеклом и с помощью бумажного мостика проводят горизонтальное элюирование быстродействующим элюентом, который перемещает компонент из адсорбента в верхнюю часть бумажного пятиугольника. Часть бумаги с веществом отрезают и вещество экстрагируют соответствующим растворителем. [c.108]

Направление элюирования (восходящее элюирование, элюирование в горизонтальной камере). [c.27]

Профиль, показанный на рис. 17, был определен благодаря анализу, проводившемуся с помощью газовой хроматографии. Исследовалось содержание растворителя на полосках фольги, покрытых слоем силикагеля. Элюирование с таких тонкослойных пластинок проводили в ненасыщенных сэндвич-камерах без предварительного насыщения сухого слоя, если не считать нескольких миллиметров в области видимого фронта (такая область отчетливо обозначена на рисунке). При пользовании данными пластинками, изготовленными с употреблением фольги, не наблюдаются различия профилей градиента при элюировании в горизонтальной и вертикальной плоскостях. Когда элюирование проводили с двухчасовой передержкой, кривизна, обусловленная фронтальным градиентом, устранялась, слой сорбента оказывался равномерно насыщенным и отмечалось общее увеличение концентрации растворителя в слое на 6%. Последствием такой выдержки пластинки являлось то, что (если даже не учитывать повышенное насыщение всей поверхности) большее количество растворителя (в 1.8 раза) проникало в слой для сглаживания фронтального градиента (4й=1-08 см. уравнение 41а). [c.69]

Сложности, связанные с разделением полос (образование потеков, нарушение горизонтальности и т. п.), могут быть вызваны многими факторами, среди которых следует отметить применение недостаточно чистых растворителей, образование каналов в слое адсорбента из-за неравномерного заполнения колонки, загрязненный (например, влажный) адсорбент, разложение пробы в колонке и т. п. Если колонка заполнена адсорбентом слишком плотно, то скорость элюирования может ие достичь желаемой величины 1 капля в 1 с. [c.437]

Интегральная хроматограмма имеет вид ступени (рис. 12.8, б), что соответствует количественному элюированию компонента газовой смеси. Высоту ступени определяют расстоянием между двумя горизонтальными линиями кривой или их касательными. [c.214]

Заметим, что соединения отличаются числом эфирных связей (от О до 3 сверху вниз в каждой вертикальной колонке) и числом двойных связей (от 3 до О слева направо в каждом горизонтальном ряду). Тонкослойное хроматографическое разделение, основанное на числе эфирных связей, т. е. на полярности растворенного вещества, достигается хроматографией на силикагеле с элюентом, выбранным таким образом, чтобы наименее полярное вещество имело / 0,8. Для случая, изображенного на рис. 17-8, подвижной фазой служил 10%-ный (по объему) раствор диэтилового эфира в петролейном эфире (последний не является на самом деле эфиром его называют так только в связи с его большой летучестью, он представляет собой смесь легких углеводородов). Разделение по числу двойных связей проведено на силикагеле, пропитанном приблизительно 5% (по массе) нитрата серебра, а растворитель используют тот же, что и раньше. В этом случае два способа разделения были оригинально скомбинированы. При нанесении тонких слоев конструкцию наносящего устройства изменили таким образом, чтобы можно было одновременно наносить два рядом расположенных тонких слоя, один из которых содержал нитрат серебра, а второй нет. Как показано на рис. 17-8, первое хроматографическое разделение проводили элюированием пробы вверх на части пластинки, покрытой силикагелем. Второе же разделение в направлении, перпендикулярном первому, приводило к быстрому движению зон растворенных веществ на часть пластинки, содержащую нитрат серебра. Таким образом было легко достигнуто, как это показано, разделение соединений с разным числом двойных связей. Относительное положение зон растворенных веществ на пластинке соответствует расположению структур, показанному выше. Наименее полярные соединения (не имеющие эфирных связей) мигрируют быстрее всех на первой ступени проявления, а соединения, не имеющие двойных связей, мигрируют быстрее всего на второй ступени проявления. Для обнаружения зон пластинку опрыскивали 70%-ной серной кислотой, насыщенной бихроматом калия, и нагревали при 200 °С. [c.565]

Элюирование проводят восходящими, нисходящими и горизонтальными методами. Методики нанесения пятен и детектирования элементов аналогичны уже описанным для хроматографии на бумаге. Здесь также справедливы замечания об окрашенных реагентах для детектирования элементов. Тонкослойные хроматограммы следует сушить в сушильном шкафу, а не в струе воздуха, что достаточно при работе с бумагой. [c.464]

Детектор регистрирует присутствие каждого компонента и позволяет изме. рять его количество в потоке, выходящем их хроматографической колонки. Детекторы могут быть интегральные и дифференциальные. Сигнал интегрального детектора пропорционален общей массе вещества в элюированной полосе. Когда через детектор проходит чистый газ-носитель, на диаграммной ленте записывается горизонтальная прямая линия. При прохождении полосы компонента перо [c.38]

Дополнительно это проиллюстрировано двумя (почти) горизонтальными линиями, заключающими область оптимальных условий элюирования (1< <10). Очевидно, что невозможно найти единственную температуру, при которой все компоненты элюируются с колонки в оптимальных условиях. [c.318]

ПОМОЩЬЮ приспособления для нанесения тонких слоев быстро распределяют по чистой стеклянной пластинке. Можно обойтись без приспособления и разровнять массу на пластинке стеклянной палочкой. Пластинки высушивают на воздухе и наносят на них меченые вещества. Элюирование водой осуществляют либо как в восходящей хроматографии, либо при горизонтальном положении пластинки с использованием фитиля для подвода воды. [c.249]

На практике применяют различные виды элюирования восходящее, нисходящее, горизонтальное, круговое (центрифужное). При нисходящем хроматографировании следует тщательно уложить край бумаги в лоток и прижать ее тяжелой стеклянной палочкой или узкой пластинкой, чтобы бумага не могла соскользнуть в процессе элюирования. Во время работы не следует касаться бумаги пальцами, особенно если хроматографируются аминокислоты. Закрепленную в лотке полоску или лист бумаги помещают на подставку внутри камеры, закрывают камеру крышкой и выдерживают в атмосфере паров неподвижной фазы в течение определенного времени — от 5 мин до 16 ч, т. е. до следующего дня. При работе с сильно летучими растворителями типа растворителей Буша (см. разд. 3.5.6 Стероиды и терпеноиды ) бумагу следует выдерживать над неподвижной фазой не менее 3 ч, а лучше до следующего дня, если неподвижная фаза не наносилась на бумагу посредством одного из указанных выше методов. По окончании выдержки наливают в лоток подвижную фазу и дают ей передвигаться в бумаге под действием капиллярных сил почти до самого края. После этого осторожно вынимают хроматограмму из камеры, сразу же отмечают положение фронта растворителя и дают листку высохнуть. При работе с большими листами удобно пользоваться специальными широкими щипцами. [c.92]

Элюированные в летучих растворителях хроматограммы свободно подвешивают для сушки на воздухе, лучше всего в вытяжном шкафу или в токе воздуха под вытяжным колпаком. При использовании малолетучих растворителей (например фенола, коллидина) или бумаги, пропитанной формамидом или пропиленгликолем, лучше всего сушить хроматограммы в сушильном шкафу с циркуляцией воздуха. Если хроматографируемые вещества достаточно термостойки, хроматограммы можно сушить над нагревательной плиткой. Когда для обнаружения используют индикаторы, надо специально проследить, чтобы с бумаги испарился весь кислотный или основный растворитель, входящий в состав обнаруживающего реагента, а также чтобы сушка хроматограмм проводилась в нейтральной атмосфере. Соляную кислоту нельзя удалить с бумаги полностью. Удаление следов уксусной кислоты с хроматограмм можно ускорить, если подержать хроматограммы горизонтально над паром, идущим от плоской чашки с кипящей водой, или обдувать их горячим паром. [c.94]

В ТСХ адсорбент наносят на пластинку в виде тонкого слоя. Обычно для закрепления адсорбента на поверхности применяют связующий реагент, однако авторы ряда работ проводили разделение на адсорбенте, не содержащем связующего. В этих случаях применяют очень тонкий порошок адсорбента, который прилипает к пластинке и образует довольно мягкий слой. Мягкие слои характерны также для так называемой хроматографии на незакрепленном слое , когда адсорбент не закрепляется на подложке при этом элюирование приходится вести при горизонтальном или почти горизонтальном положении [c.21]

ТСХ с нисходящим элюированием применяют для анализа проб, компоненты которых очень медленно движутся по слою. Элюент в. этом случае подают иа пластину из специального устройства сверху. К, капиллярным силам добавляется сила гравитации. Таким образом в некоторых случаях удается дост (чь лучшего разделения по сравнению с первым вариантом. Для горизонтального элюирования используют пластины с незакрепленным слоем сорбента. Г1.яа-стину при этом закрепляют горизонтально, а растворитель подают с помощью фитиля из мягкой ткакк. Во всех случаях хроматограмма имеет нпд окрашенных пятен (рис. 28.10). [c.611]

На рис. 9.6 доказана выпускаемая фирмой Phaгma ia камера для нисходящего хроматографирования [2], предназначенная для тонкослойной гель-хроматографии. Для горизонтального элюирования ири различных, но точно устанавливаемых условиях предварительного насыщения слоя сорбента можно использовать К5-жамеры (рис. 9.7). Оптимальные условия разделения в этих камерах можно быстро установить. Другие типы камер, используемые для специальных методов, например проточного (непрерывного) элюирования, градиентного элюирования или круговой хроматографии, описаны в монографиях по ТСХ ([2Э, [c.95]

Мистрюков [64] использовал для горизонтального элюирования пластинок со свободным слоем адсорбента мелкую кювету с притертой стеклянной крышкой. Пластинка укреплялась на [c.136]

Луццато и Окое [172] и Стрикленд [173] использовали фитиль для подачи растворителя меняющегося состава на тонкослойную пластинку при нисходящем или горизонтальном элюировании. Растворители смешивали в специальном сосуде, снабженном магнитной мешалкой. Для получения смеси растворителей переменного состава предложено много различных [c.159]

Пробу наносят на пластинку, установленную горизонтально, после чего устанавливают пластинку под углом 10—20° к горизонтали и элюируют нисходящим потоком растворителя, регулируя его скорость углом наклона. Можно также использовать сэндвичевые пластинки или специальные держатели для пластинок фирмы Rharma ia. Яворек [226] и Джеймс и сотр. [227] приводят подробные схемы установок для гель-фильтрации, а также устройства для измерения оптической плотности разделенных фракций. При количественных исследованиях принимают специальные меры для получения однородных слоев адсорбента. Возможно и горизонтальное элюирование в этом случае скорость движения растворителя регулируют, поднимая или опуская сосуд, из которого он подается. Согласно данным работы [c.162]

Приводя данные о полученных значениях Rf, следует указать метод элюирования так, метод восходящего элюирования дает значения Rf, отличающиеся от значений, полученных мето-дохМ нисходящего или горизонтального элюирования. [c.310]

Вытекающий из колонки буферный раствор собирают в пробирки порциями по 1—3 мл. Регистрацию объема элюата, прошедшего через колонку, начинают с момента нанесения образца на колонку. Содержание белка во фракциях определяют спектрофотометрически при 280 нм. Оптическую плотность растворов, содержащих рибонуклеазу, определяют при 230 нм, голубой декстран — при 650 нм, цитохром с — при 412 нм. После окончания анализа колонку промывают несколькими объемами буферного раствора. Строят профиль элюирования отдельных белковых фракций. Для этого вычерчивают график, на горизонтальной оси которого откладывают номера пробирок (фракций) или объем прошедшей через колонку жидкости, а на вертикальной оси — величины оптической плотности фракций. [c.108]

В зависимости от положения пластинки и направления потока элюента различают восходящую, нисходящую и горизонтальную ТСХ. По технике работы выделяют фронтальный анализ (когда подвижной фазой служит анализируемая смесь) и обычно используемый элюционный вариант. Применяют также круговую (когда анализируемый р-р и р-ритель последовательно подаются в центр пластинки) и антикруговую ТСХ (когда анализируемый р-р наносится по окружности и элюент перемещается от периферии к центру пластинки), ТСХ под давлением (когда р-ритель под давлением пропускают через слой сорбента, покрытый плотно прижатой полиэтиленовой пленкой), а также ТСХ в условиях градиента т-ры, состава сорбента н т. п, В т. наз. двухмерной ТСХ хроматографич. процесс осуществляют последовате.чьно в двух взаимно перпендикулярных направлениях с разл. элюентами, что увеличивает эффективность разделения, С этой же целью применяют многократное элюирование в. одном направлении. [c.608]

Большинство коммерческих камер для тонкослойной хроматографии, дающих возможность реализации непрерывного элюирования, представляют собой горизонтальные камеры (например, камеры BN, Vario-KS) и являются разновидностью "ненасыщенных сэндвич-камер". При работе с такими камерами и при использовании многокомпонентных подвижных фаз из-за неизбежности расслоения подвижной фазы образец приходится вводить только тогда, когда уже прошел последний фронт, образовавшийся из-за разложения состава подвижной фазы. Интересная конструкция камеры для введения образца уже после начала элюирования была описана Дж.Э.Перри [108] (такая конструкция будет рассмотрена ниже). [c.232]

Можно было предполагать, что предварительное насыщение при пользовании обычными (N) камерами для разделений по методу адсорбционной ТСХ будет приводить к аналогичным эффектам, сказывающимся в расслоении многокомпонентных подвижных фаз. Зная об этом, Бреннер и Нидервизер сконструировали BN-камеру [84], являвшуюся предшественницей всех горизонтальных камер для ТСХ. В этой камере пары растворителя изолировались от слоя перед началом элюирования, что послужило основой для создания "двухзонных" и "многозонных" вариантов тонкослойной хроматографии [164]. (О краевых эффектах, возникающих в камерах разных типов, дает представление табл. 39). [c.108]

Когда образец наносится по диагонали, как показано на рис. 184, а элюирование производится в ненасыщенной сэндвич-камере, значения Кг оказываются одинаковыми (независимо от положения стартовой линии). Наиболее высоко поднявшиеся пятна (двояковыпуклые), с Кг 1, лежат на горизонтальной линии. Результат соответствует ожидаемому. Однако когда слой бьш предварительно насышен, вещество с Кг а 1 уже не перемещается с фронто.м. а значения Кг возрастают слева направо. Это объясняется следующим образом когда фронт проходит пятна на старте, находящиеся у [c.116]

Однако такой метод расчета слишком продолжителен. Поэтому были разработаны более простые методы расчета, основанные на том, что высокий симметричный пик имеет форму треугольника. На уровне, соответствующем половине пика, проводят горизонтальную линию, которая пересекает кривую в двух точках. Если соединить прямыми линиями вершину пика с точками пересечения и продлить их до пересечения с базовой линией, получают треугольник, площадь которого всего на 6% меньше площади пика [4]. Эта разница является величиной постоянной и в определенных условиях (например, в случае высокого симметричного пика) практически не влияет на точность расчета. Площадь треугольника определяют, умножая истинную высоту пика (т. е. высоту пика в единицах экстинкции минус среднее значение фоновой линии) на ширину пика на уровне половины чистой йысоты (Ш). Ширину пика определяют по числу интервалов между отдельными точками на кривой элюирования. При этом в расчет берут даже доли интервалов, отсеченные горизонтальной линией, установленные с точностью 10%. Площадь пика делят на константу данной аминокислоты С,-, найденную при анализе в аналогичных условиях стандартной смеси. В итоге получают содержание данной аминокислоты в микромолях. Этот несложный метод расчета находит повсеместное применение. Константы Сг можно использовать для расчета и по интеграль- [c.354]

Проявление тонкослойных или бумажных хроматограмм может осуществляться путем восходящего, нисходящего, горизонтального или радиального движения растворителя. При восходящей хроматографии ослол непия, связанные с образованием каналов при движении растворителя, сводятся к минимуму. При непрерывном проявлении растворитель продвигается до конца бумаги или тонкого слоя в одном опыте. При многократном проявлении после того, как фронт растворителя достигает края листа, растворителю дают испариться и повторяют проявление при том же направлении движения растворителя. Ступенчатое проявление включает проявление на пластинке в неполярном растворителе, испарение растворителя и второе проявление в более полярном растворителе. При двухмерном проявлении также последовательно применяют два растворителя сначала проводят хроматографирование в одном направлении, затем высушивают пластинку для испарения первого растворителя, поворачивают пластинку на 90° и проводят проявление вторым растворителем. При градиентном элюировании состав растворителя меняется в ходе проявления [94]. Эта методика, однако, сложна, в ней теряется простота тонкослойной или бумажной хроматографии. [c.553]

Высшие жирные кислоты можно хроматографировать в исходном состоянии, поскольку они нелетучи, используя обращен-но-фазные системы. Хроматограмму погружают в раствор ун-декана или керосина в бензоле с добавкой уксусной кислоты (соотнощение компонентов 14 18 1) избыток раствора удаляют, промокая хроматограмму с обеих сторон фильтровальной бумагой и затем подсущивая ее 5—10 мин на воздухе. Элюирование проводят 90—95%-ной уксусной кислотой. Результаты хроматографирования можно улучшить, применяя более плотную бумагу и нанося пробы в виде тонкой горизонтальной линии или полосы. Чтобы отделить насыщенные кислоты от ненасыщенных, Клячко-Гурвич и др. [66], добавляли к подвижной фазе нитрат серебра. [c.112]

Т-образной стеклянной стойке и край пластинки прижимался к фильтровальной бумаге другой стеклянной пластинкой. Растворитель поднимался из кюветы по фильтровальной бумаге и подавался на слой адсорбента. Хессе и Александер [65] для элюирования проб на пластинках с закрепленным слоем укрепляли их горизонтально, обратив слоем к кювете с растворителем — элюентом. Растворитель подавали па слой посредством полоски из фетра. [c.137]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология