Аминокислоты на бумаге

Распределительная хроматографий аминокислот на бумаге [c.27]

Положение аминокислот на бумаге можно установить и без проявления, рассматривая хроматограмму в ультрафиолетовых лучах. Пятна отчетливо флуоресцируют в ультрафиолете. [c.28]

ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТ НА БУМАГЕ [c.242]

Весьма наглядно двумерное разделение аминокислот на бумаге —метод отпечатков пальцев . В этом случае сорбентом [c.72]

Фиг. 38. Расположение аминокислот на бумаге при нисходящей хроматографии в бутанольной системе.

ХРОМАТОГРАФИЯ ДНФ-АМИНОКИСЛОТ НА БУМАГЕ [c.268]

Рис. 159. Сравнение тонкослойной хроматографии с хроматографией на бумаге. Двумерные хроматограммы в 0,57 натуральной величины. а — 10 аминокислот на бумаге ватман № 1, время анализа около 2—2,5 час б — 14 аминокислот на силикагеле Г, время анализа 1,5—2 час.

РАСПРЕДЕЛИТЕЛЬНАЯ НИСХОДЯЩАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ АМИНОКИСЛОТ НА БУМАГЕ [c.127]

Рис. 19. Установка для хроматографического разделения аминокислот на бумаге (нисходящая хроматография)

Техника эксперимента. Методика нанесения растворов аминокислот на бумагу, аппаратура и техника эксперимента описаны на стр. 112, 115. [c.146]

С помощью распределительной хроматографии легко осуществляется разделение аминокислот и определение их в-смеси. Метод заключается в том, что каплю смеси аминокислот или гидролизата белка наносят на полоску фильтровальной бумаги, конец которой опускают в подходящий органический растворитель. Растворитель насасывается полоской фильтровальной бумаги и увлекает за собой нанесенные на бумагу аминокислоты. Скорость перемещения аминокислот на бумаге зависит от химического строения аминокислот и от их способности растворяться в подвижном и неподвижном растворителе. В качестве подвижного растворителя употребляют, например, водонасыщенный фенол (или н. бутиловый спирт, амиловый спирт и др.). Неподвижным растворителем является вода, пары которой насыщают фильтровальную бумагу (внешне бумага остается сухой). Чем меньше растворимость аминокислот в воде и чем больше их растворимость в феноле, тем быстрее они движутся вслед за фронтом органического растворителя. [c.21]

Положение аминокислот на бумаге можно обнаружить при помощи цветной реакции с нингидрином. Реакцию производят путем опрыскивания из пульверизатора высушенной [c.21]

Фиг. 5. Схема двухмерной хроматограммы аминокислот на бумаге [159].

Эта цветная реакция с успехом применяется при хроматографическом анализе аминокислот на бумаге (стр. 247). [c.241]

Хроматографическое разделение аминокислот на бумаге, а) Растворы аминокислот 5 мг аминокислоты (глицина, аланина, валина, лизина, фенилаланина) растворяют в 5 мл 10-процентного изопропилового спирта, подкисленного соляной кислотой. [c.227]

Разделение аминокислот на бумаге электрофоретическим путем имеет большое преимущество перед разделением хроматографическим, так как происходит значительно быстрее. Мы определяли ряд аминокислот, в частности аланин и глицин, разделяя их методом электрофореза. [c.150]

Растворы аминокислот на бумагу наносят на отдельном столе. Бумагу кладут на предварительно тщательно вымытое стекло. Под нижний край бумаги подкладывают стеклянную пластинку или тетрадку так, чтобы та часть бумаги, где нарисованы кружки, оставалась на весу и не касалась поверхности стекла. Капиллярами, специально приготовленными для каждого раствора, на бумагу в кружки последовательно наносят капли растворов исследуемых смесей аминокислот и свидетелей . Надо так напрактиковаться, чтобы наносимая капля не распространялась за пределы нарисованного кружка. Раствор на [c.99]

В каждом конкретном случае выбор системы растворителей для разделения ДНФ-аминокислот на бумаге в значительной мере определяется особенностями решаемого вопроса. Чтобы получить хорошее разделение, необходимо соблюдать в основном те же предосторожности, о которых уже упоминалось в связи с хроматографированием самих аминокислот. Кроме того, существует одно весьма важное условие разделение ДНФ-аминокислот необходимо проводить в темноте. Большое значение имеет также предварительное приведение бумаги в равновесие с парами растворителя и поддержание постоянной температуры. Многие из испытанных сортов бумаги оказались в равной мере подходящими для хроматографии обнаружение разделенных компонентов после хроматографирования является простой задачей. Для локализации полезно использовать сильное поглощение ДНФ-аминокислот в ультрафиолете. [c.152]

Для хроматографии аминокислот на бумаге применяют специально обработанную фильтровальную бумагу, а также прорезиненную фильтровальную бумагу, в которой набухший каучук играет роль неподвижного растворителя . [c.157]

В состав зольных элементов бумаги входят ионы меди, легко образующие комплексные соединения с ионами аминокислот. Хотя количество их и очень невелико, однако образование медного комплекса можно заметить в виде розового выступа впереди пурпурного пятна аминокислоты на бумаге. Образование этих комплексов можно предупредить, добавляя к растворителям вещества, осаждающие ионы меди или образующие с ней более прочные комплексные соединения. В качестве таких веществ были использованы сероводород, цианистый водород, аммиак и специальный реактив на медь, купрон (а-бензоиноксим). Можно также предварительно обработать применяемую для хроматографии бумагу разбавленным раствором K4[Fe N)g]. [c.158]

Методы хроматографии аминокислот на бумаге получили многочисленные применения в биохимии животных и растений, в микробиологии и медицине. Для количественного анализа аминокислот наиболее удобен все же способ, использующий образование комплексных соединений с медью. Содержание аминокислоты определяется по количеству меди в таком комплексе. Этот метод можно применять к смесям аминокислот, разделенных в одномерной хроматограмме. [c.161]

Для каждой аминокислот1з1 характерна своя величина рТ, которая определяется строением боковой цепи К (ср. табл. 20). Вследствие этого в буферном растворе с постоянным pH разные аминокислоты несут неодинаковые по величине (а иногда — и по знаку) заряды, что сказывается на скорости и направлении их движения в электрическом поле. Это явление используется для электрофоретического разделения аминокислот на бумаге или на крахмале (электрофорез на носителях). Различия в зарядах аминокислот оказывают также влияние на их способность обмениваться с другими ионами. В сочетании с эффектом [c.350]

Общая методика разделения оргяничйских неществ на бумаге огисана выше (см. Распределительная хроматография аминокислот на бумаге ). [c.172]

Принцип распределительной хроматографии основан на различии в коэффициентах распределения аминокислот между водой и органическим растворителем. Особенность метода распределительной хроматографии на бумаге по сравнению с обычной экстракцией ам.инокислот из водного раствора органическим растворителем заключается в том, что одну из фаз, чаще всего водную, помещают на какой-нибудь инертный твердый носитель, а органический растворитель — подвижная фаза,— проходя через первую, извлекает и распределяет аминокислоты на бумаге в соответствии с их коэффициентами распределения. Положение аминокислот на бумаге определяют по отношению скорости движения аминокислоты скорости движения фронта растворителя и обозначают Rf. Величина за висит в первую очередь от строения аминокислоты, затем от системы растворителей, pH среды и сорта бумаги, Чем полярнее аминокислота, тем меньше она растворяется в органических растворителях и тем меньше ее R . Увеличение длины углеродной цепи повышает . Введение в молекулу полярных групп, например, гидроксильной, аминной или карбоксильной понижает Rf Так, Rf фенилаланина в системе фенол/вода = 0,85, а тирозиит 0,51. Другие примеры изменения в зависимости от строения аминокислоты представлены на рис. 3 и 4. Подбирая соответствующие смеси растворителей, можно провести достаточно тонкое разделение аминокислот. Наиболее часто пользуются для такого разделения системами вода — фенол — аммиа вода — бутапол — уксусная кислота бутанол — аммиак — коллидин и т. д. Разделение можно проводить на одномерной или двумерной хроматограммах. Можно пользоваться также различными типами распределительной хроматографии на бумаге — нисходящей, восходящей и радиальной. Величины Rt для каждой из систем растворителей оказываются постоянными при соблюдении [c.479]

Метод двухмерной хроматографии в плоском слое был предпсжен в 1944 г. Кондсено, , Гордоном и Мартином [91]. Им удалось разделить 15 из 22 аминокислот на бумаге в течение (27+48) ч. С того времени появилось свыше 200 публикаций о применении такого двухмерного метода. Тем не менее в усовершенствовании этого подхода еще не сделано каких-то крупных достижений. Основная причина обусловлена тем. что положению веществ в двухмерном слое относительно трудно дать числовую оценку не могут [c.274]

Электрофорез ведут 2 ч. Аминокислоты на бумаге распределяются в следующем порядке дикарбоновые кислоты передвигаются к аноду (при этом аспарагиновая кислота передвигается быстрее, чем глютаминовая), нейтральные и щелочные аминокислоты (моноаминомоно-карбоновые и диаминомонокарбоновые) — к катоду. [c.33]

Относительную чувствительность аминокислотных остатков в инсулине к "[-излучению исследовали Дрейк и его сотрудники [69]. Как указывалось ранее, интенсивное исследование инсулина особенно желательно, поскольку он является единственным белком, строение которого полностью известно. На основании результатов определений концевых групп, изучения спектров поглощения и хроматографии аминокислот на бумаге в образцах, подвергнутых облучению дозами до 40 мегафэр, были сделаны выводы 1) что цистин, тирозин, фенилаланин, пролин и гистидин обладают высокой радиочувствительностью 2) что лейцин, изолейцин, валин, лизин и аргинин заметно разрушаются при наиболее высоких дозах и 3) глицин и фенилаланин, Н-концевые аминокислоты (т. е. имеющие свободные а-аминогруппы) дезаминируются. [c.227]

Созданию современной аналитической хроматографии аминокислот предшествовало два очень важных события — разработка методов получения химически гомогенных белков (школа Норт-ропа, середина 30-х годов [1]) и организация промышленного производства ионообменных смол с последующим развитием ионообменной хроматографии (50-е годы). В промежуточный период были разработаны адсорбционная и распределительная хроматографии аминокислот (на бумаге и на колонках с сорбентами), оказавшиеся, однако, непригодными для решения практических задач. Так колоночная хроматография не нашла применения, главным образом, из-за несовершенства имеющихся в то время сорбентов, в основном природного происхождения. Тем не менее благодаря тщательному подбору условий анализа В. Стейну и С. Муру, лауреатам Нобелевской премии за 1972 г., удалось добиться вполне удовлетворительного разделения смеси аминокислот [2]. Однако этот метод оказался слишком трудоемким и также не нашел широкого применения, поскольку требовалась тщательная стандартизация крахмала, хроматографические свойства которого зависят от источника выделения и метода получения. [c.305]

Для открытия отдельных аминокислот на бумаге используют их специфические цветные реакции, позволяющие отличить одну аминокислоту от другой. Например, реакцией диазотирования можно открывать гисти- . [c.131]

Электрофорез аминокислот на бумаге. Каплю раствора, содержащего смесь глицина, аланина, глутаминовой кислоты, ли- [c.135]

Нанесение смеси аминокислот на бумагу. На полоске хроматографической бумаги делают пометку карандашом, отступя на 2,5 см от одного из ее концов (рис. 6, б). Затем в этом месте микропипеткой наносят каплю исследуемого раствора аминокислот. Достаточно нанести 0,002 — 0,005 мл раствора. Диаметр пятна, образовавшегося на бумаге, не должен превышать 5 мм. Необходимо помнить, что при всех манипуляциях бумажную полоску можно держать только за конец, противоположный пятну. Полоску после нанесения раствора сушат на воздухе или в сушильном шкафу (при 70—90° С), закрепив ее конец, удаленный от пятна, в штативе или просто прижав его грузом (рис. 6, г). [c.40]

На бумаге, пропитанной неорганическими ионообменниками, разделяли также и органические ссединения. Кателли [137] приводит значения Rf для двенадцати аминокислот на бумаге с фосфатом циркония, проявленных при псмсщи ацетатных буферов с различными pH. Он разделял смеси из двух или трех аминокислот. Подобные исследовании с алкалоидами проводили Кассио с сотр. [138]. [c.329]

Фишер и др. (Fis her, Parsons, Morrison, 1948) доказали одну очень важную закономерность, имеющую место нри хроматографировании аминокислот на бумаге. Оказалось, что площади пятен на хроматограммах находятся в линейной зависимости от логарифма концентраций аминокислот в первоначальной капле [c.83]

Техника получения бумажных хроматограмм была уже изложена в общих чертах выше. При хроматографировании аминокислот на бумаге было замечено (Консден и др., 1944), что аминокислоты вступают в реакцию с металлами (например, медью), которые способны образовывать соли с аминокислотами. Это обстоятельство мешает получению достаточно четких хроматограмм. Для устранения указанного дефекта к растворителям добавляют в небольшом количестве такие соединения, которые осаждали бы подобные металлы или образовывали с ними комплексные соедипепия. Такими добавками могут служить HgS, H N, NHg, а-бензоиноксим (купрон). Можно также предварительно обработать бумагу слабым раствором K4Fe(GN)g. Наиболее употребительными растворителями для бумажной хроматографии аминокислот и пептидов являются фенол и коллидин, предварительно насыщенные водой. [c.147]

Расположение аминокислот на бумаге после обработки нин-гидрином обнаруживается в виде отдельных окрашенных пятен. Скорость перемещения аминокислот на бумаге может быть выражена через весовое количество воды и растворителя на бумаге и через коэ4 фициент распределения соответствующей аминокислоты. Для этой цели удобно пользоваться полосками бумаги, подвешенными к лотку, содержащему растворитель, насыщенный водой. Прибор помещают в закрытый сосуд, воздух внутри которого насыщен парами воды и растворителя. Так были найдены отношения скорости перемещения полосы данной аминокислоты к скорости движения фронта жидкости для 23 различных аминокислот. Отсюда могут быть вычислены коэффициенты распределения. [c.156]

X роматоГ ра мма ци к.т иче-ских ангидриде аминокислот на бумаге [c.346]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология