Электрофоретический анализ на бумаге

Для выполнения электрофоретического анализа применяли камеру (рис. 1), представляющую собой ванночку из винипласта, разделенную винипластовой перегородкой на две сек-лии (/ и II). Между секциями установлен держатель 1 со стеклянными перекладинами 2 для бумаги. В одной секции 250 [c.250]

Электрофоретический анализ используют для исследования сыворотки крови, смесей белков, нуклеиновых кислот и т, д. Широкое применение получил для изучения биохимически важных объектов вариант электро ретического исследования — метод электрофореза на бумаге. Каплю исследуемого раствора наносят в определенную точку на полоску специальной фильтровальной бумаги, увлажненную буферным раствором (бумага играет роль своеобразного сосуда) концы полоски находятся в контакте с электродами. Подвергнутые электрофорезу составные части, обладающие различной электрофоретической подвижностью, переносятся на различные расстояния. После опыта бумагу высушивают и прокрашивают красителем, проявляя компоненты смеси. [c.207]

Электрофоретический анализ на бумаге [751, 752] [c.99]

Оси. работы посвящены исследованию адсорбции и электрофореза. Создал (1931 —1935) метод фронтальной адсорбционной хроматографии, с помощью которого смог анализировать качественно и количественно смеси, содержащие аминокислоты, пептиды, углеводы. В результате проведенных им (с 1935) исследований электрофореза разработал метод электрофоретического анализа биоколлоидов с его различными модификациями (микроэлектрофорез, электрофорез на бумаге, иммуноэлектрофорез). Применил электрофоретический метод для решения ряда прикладных задач биохимии — исследования и разделения нормальной и патологической сывороток, изучения чистых белков и их смесей, ферментов, нуклеопротеидов, нуклеиновых и аминокислот и др. С помощью иммуноэлектрофореза заложил основы изучения белковой структуры нормальной сыворотки крови, выделив из нее три различных белка (теперь их обнаружено более 20). [c.428]

Наиболее полное разделение смеси белков на индивидуальные компоненты достигается с помощью электрофоретических методов. Как уже обсуждалось в разд. 5.2, проведение препаративного электрофореза, несмотря на то что он обладает значительными теоретическими преимуществами, сопряжено с большими трудностями. Поэтому он используется не часто. В аналитическом же варианте электрофорез — это один из наиболее широко применяемых методов исследования. Действительно, чтобы охарактеризовать очищенные препараты белков, их теперь почти обязательно подвергают электрофоретическому анализу. Для проведения аналитического электрофореза в гелях требуется всего 5—25 мкг белка это обычно не слишком значительная часть полученного препарата. До того как были предложены гелевые системы, электрофоретический анализ проводили в аппарате Тизелиуса методом движущейся границы. Хотя для этого приходилось расходовать десятки миллиграммов белка, разделения очень сходных белков не достигалось и анализ каждого образца требовал больших усилий и внимания. Затем был разработан аналитический электрофорез на бумаге и других целлюлозных материалах, используемых в качестве носителей, что исключило два из указанных выше недостатков метода Тизелиуса количество необходимого для анализа белка значительно сократилось и проводить электрофорез стало намного легче, так как для этого метода требуется только простое оборудование. Однако разрешение осталось примерно таким же, как н прежде, даже при использовании обладающих хорошими качествами современных ацетатцеллюлозных пленок это объясняется тем, что разделение компонентов смеси происходит в соответствии только с приблизительной величиной отношения заряд/размер и многие белки движутся вместе в виде одной зоны (ср. с разд. 5.2). [c.316]

Разделение белков методом электрофореза на бумаге. В последнее время при исследовании белков, кроме фракционирования высаливанием, широко начали применять электрофоретическое разделение белкового комплекса, а также количественное определение отдельных фракций белков. Нередко электрофорез объединяют с хроматографией. В настоящее время есть множество приемов электрофоретического и хроматографического анализа белковых веществ, в связи с чем разработано много различных аппаратов для электрофоретического разделения белков. [c.44]

Электрофоретический метод анализа и разделения растворимых в воде промежуточных продуктов и красителей рекомендуется вести на бумаге (250—400 в и 3—6 ма) в 0,1—0,05 н. соляной кислоте (pH до 1,75), фосфатных и фосфатно-цитратных (pH 2,35— 8,7) и боратных буферах (pH до 9,7). В отдельных случаях электрофорез рекомендуется вести в 3%-ном водном аммиаке (pH 11,4). [c.277]

Анализ по спектрам отражения проводят при количественных определениях адсорбированных веществ, а также веществ, полученных после хроматографического или электрофоретического разделения на бумаге [237]. [c.178]

Весьма эффективным является использование микрофильтров на основе ацетатов целлюлозы в качестве стационарной фазы для электрофоретического разделения белков сыворотки крови и других высокомолекулярных веществ. Использование микрофильтров вместо бумаги в электрофоретических методах анализа позволяет в 15—20 раз ускорить проведение анализа. Их существенным преимуществом также [c.219]

Адсорбция на носителе. При работе с пористым носителем поверхность раздела фаз очень велика и даже сравнительно слабая адсорбция может привести к полной неудаче при электрофоретическом разделении. Причины адсорбции не всегда достаточно ясны. По-видимому, силы неэлектростатического происхождения играют большую роль по отношению к белкам, чем к малым ионам. Адсорбция последних (пептидов, аминокислот и т. д.) связана с наличием ионизованных групп на поверхности носителя. Установлено, что в целлюлозе и крахмале, например, имеется значительное количество карбоксильных групп. Так как эти группы заряжены отрицательно, опасность адсорбции относительно мала для отрицательных ионов, но велика для положительных. Делались попытки уменьшить заряд бумаги этерифи-кацией карбоксилов диазометаном. С белками рекомендуется работать при pH выше их изоточки, тогда электростатическое отталкивание препятствует адсорбции. Этот эффект можно усилить, используя ионообменную бумагу, в которой с поверхностью целлюлозных волокон химически связано значительное число ионизированных групп с зарядом, противоположным заряду исследуемого иона. Для уменьшения адсорбции белков применялись также детергенты иногда помогает предварительная обработка носителя раствором исследуемого белка. Хотя в некоторых случаях эти меры приносят желаемый эффект, адсорбция часто (для белков — почти всегда) наблюдается в той или иной степени при электрофорезе на твердом носителе. Обратимая адсорбция проявляется в уменьшении скорости движения и в образовании хвостов у движущихся зон, что ухудшает разделение и затрудняет количественный анализ. Необратимая адсорбция приводит к тому, что на всем пути зоны остается равномерный след — адсорбированный белок, а количество вещества в зоне постепенно уменьшается. Если это количество мало, зона может вообще исчезнуть по дороге. Иногда адсорбция сопровождается денатурацией белка, частичной или полной потерей его биологической активности. [c.81]

Для анализа белковых гидролизатов разработаны очень удобные хроматографические методы. Тем не менее электрофорез, особенно электрофорез на бумаге, очень часто применяют, когда смеси не очень сложны и когда имеющиеся в смеси аминокислоты значительно отличаются по кислотно-основным свойствам. Пример успешного разделения довольно сложной смеси приведен на рис. 16. Электрофоретическое разделение аминокислот можно провести очень быстро, особенно если применить высоковольтный электрофорез. Проявление электрофореграмм осуществляют с помощью нингидрина. [c.105]

В настоящее время широко распространен достаточно точный нингидриновый метод определения аминокислот при помощи хроматографического разделения на бумаге. Однако разделение некоторых аминокислот обычной хроматографией на бумаге требует большой затраты времени например, для разделения основных аминокислот, необходимо минимум 4— 5 суток. Применение электрофоретического разделения позволило сократить время разделения лизина, аргинина и гистидина до 3 часов и за счет этого сократить общее время, необходимое для количественного анализа этих аминокислот, с 5—б дней до 6—7 часов. [c.254]

Электрофоретический анализ на бумаге. Для анализа препаратов арсеназо III методом электрофореза синтезируют эталонный образец арсеназо III и свидетели — возможные примеси моно- и бисазосоединения. Эталонный образец и свидетели очищают до такого состояния, чтобы на электрофТ>реграмме наблюдалась одна зона или в зоне содержалось не менее 907о основого вещества. [c.56]

Электрофоретический анализ продуктов распада фосфатов был исследован в работах [430—432, 652—655]. В 0,01 М растворе молочной кислоты при 80 в см за 1 ч на бумаге Ватман 3 мм были идентифицированы следующие фосфаты в порядке уменьшения подвижности триполифосфат > пирофосфат > изогипофосфат > гипофосфат > ортофосфат > дифосфит > фосфит > гипофос- [c.199]

Гексаквородий(1П) перхлорат [Rh (Н20)в] ( 104)3 [18а]. Согласно Шукла, это соединение получается при растворении гидрата окиси родия в 1 N хлорной кислоте. Желтый раствор выпаривают в вакууме при обыкновенной температуре до появления кристаллов. Кристаллы, высушенные между листиками фильтровальной бумаги, имеют форму желтых игл около 3 мм длины. Они очень гигроскопичны и легко растворяются в воде, давая светло-желтый раствор. В растворе хлорной кислоты гексаквородий(П1) перхлорат устойчив в течение нескольких месяцев. Анализ твердого продукта позволил установить формулу [РЬ(Н20)б1(СЮ4)з. Светло-желтый водный раствор при электрофорезе дает единственную подвижную катионную полосу родия. Судя по электрофоретической подвижности, комплекс, образовавшийся в растворе хлорной кис- [c.49]

Теория и техника электрофореза на бумаге описаны в не--скольких монографиях [16, 124, 125]. Методы электрофоретического разделения основаны на различной подвижности заряженных частиц в электрическом поле. Из различных методов для исследования красителей наиболее приемлем электрофорез на бумаге. При анализе очень сложных смесей необходимо сочетание электрофореза с хроматографией. Для анализа красителей элек- [c.97]

В некоторых случаях тонкослойный электрофорез превосходит электрофорез на бумаге и тонкослойную хроматографию. Так, например, предложенный в работе [102] метод дает гораздо меньший разброс результатов при анализе РЗЭ, чем электрофорез на бумаге и ТСХ. В упомянутой работе авторами было показано, что на тонких слоях ацетилцеллюлозы (0,24—0,30 мм), предварительно в течение 1 часа пропитанных 0,2—0,4 М раствором а-оксиизомасляной кислоты, электрофоретическим методом хорошо разделяются все РЗЭ и особенно тяжелые (сила тока 8,2—8,7 ма, градиент потенциала 40— 80 б1см). Пятна РЗЭ тем компактнее, чем меньше количество нано- [c.128]

Для разделения канамицинов были использованы методы бумажной хроматографии [39, 52—55], ТСХ [39, 54], электрофореза [56], ГЖХ [57] и ВЭЖХ [58]. Производные канамицина и его биосинтетические продукты были разделены с помощью бумажной хроматографии [59, 60] и ТСХ [60—63]. Для разделения компонентов неомицина и его N-ацетилпроизводных были применены разнообразные системы бумажной хроматографии. [39, 60, 64—75]. Для этой же цели пригодны тонкослойные пластинки с силикагелем [75—79], углем [80], оксидом алюминия [81, 82], целлюлозой MN-300 [76, 83] и с кизельгуром [76]. Электрофоретическое разделение неомицинов осуществлено на ацетате целлюлозы [84, 85], на бумаге ватяан № 3 ММ [46] и в полиакриламидном геле [86]. Описан также газохроматографический анализ неомицинов [87, 88]. [c.147]

Агаровый или агарозный гель является наиболее подходящей средой для иммунодиффузии, В классическом варианте иммуноэлектрофореза и электрофорез, и иммунодиффузию осуществляют в одном и том же геле. Однако во многих случаях иммунодиффузию приходится проводить уже после того, как макромолекулы были разделены в другой среде, менее подходящей для иммунодиффузии. Паулик [1027] еще в 1852 г. применил иммунодиффузию для анализа антигенов, разделенных с помощью электрофореза на бумаге. Хотя иммунодиффузию можно осуществлять и на ацетате целлюлозы (см. ниже), Кон [695] предложил переносить антигены с ацетата целлюлозы в агаровый гель вместо того, чтобы проводить весь иммуноэлектрофо-ретический анализ на ацетате целлюлозы. Пленку из ацетата целлюлозы, на которой антигены подвергали электрофорезу, разрезают на две половинки одну из них окрашивают, а из другой вырезают полоску шириной 1 см (на расстоянии 1 см от центральной линии) и помещают ее на поверхность заранее приготовленного агарового геля, следя за тем, чтобы под ней не образовывались пузырьки воздуха. Можно также быстро окрасить одну половинку полоски, а вторую разрезать на кусочки, так чтобы каждый из них содержал отдельную электрофоретическую фракцию. Эти кусочки пленки помещают на поверхность агарового геля, оставляя между ними промежутки в несколько миллиметров. Пропитанные соответствующей антисывороткой полоски фильтровальной бумаги шириной 2 мм кладут на гель параллельно кусочкам пленки и на оптимальном расстоянии от них. Это расстояние определяется теми же факторами, что и в случае иммуноэлектрофореза в агаровом геле. После завершения иммунодиффузии с поверхности геля удаляют полоски бумаги и кусочки пленки, а затем фотографируют полученную картину преципитации. Для приготовления стабильных препаратов гель высушивают и окрашивают по методике, предназначенной для иммуноэлектрофореграмм в агаре. Удаление лишних белков перед высушива1нием геля, как правило, не является обязательным. [c.243]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология