Аминокислоты хроматографией на бумаге

Рис. 159. Сравнение тонкослойной хроматографии с хроматографией на бумаге. Двумерные хроматограммы в 0,57 натуральной величины. а — 10 аминокислот на бумаге ватман № 1, время анализа около 2—2,5 час б — 14 аминокислот на силикагеле Г, время анализа 1,5—2 час.

Фиг. 38. Расположение аминокислот на бумаге при нисходящей хроматографии в бутанольной системе.

С помощью распределительной хроматографии легко осуществляется разделение аминокислот и определение их в-смеси. Метод заключается в том, что каплю смеси аминокислот или гидролизата белка наносят на полоску фильтровальной бумаги, конец которой опускают в подходящий органический растворитель. Растворитель насасывается полоской фильтровальной бумаги и увлекает за собой нанесенные на бумагу аминокислоты. Скорость перемещения аминокислот на бумаге зависит от химического строения аминокислот и от их способности растворяться в подвижном и неподвижном растворителе. В качестве подвижного растворителя употребляют, например, водонасыщенный фенол (или н. бутиловый спирт, амиловый спирт и др.). Неподвижным растворителем является вода, пары которой насыщают фильтровальную бумагу (внешне бумага остается сухой). Чем меньше растворимость аминокислот в воде и чем больше их растворимость в феноле, тем быстрее они движутся вслед за фронтом органического растворителя. [c.21]

Для разделения, например, смеси из 16 аминокислот хроматографию в тонком слое, как и хроматографию на бумаге, необходимо проводить в двух направлениях. Это снижает ценность метода, так как двумерные хроматограммы довольно трудно оценивать, особенно когда в пробе имеется больше 16 аминокислот. К тому же при хроматографии в двух направлениях для каждой пробы необходима отдельная пластинка, а это создает дополнительные сложности, связанные с рабочим местом, обработкой хроматограмм и т. д. [c.243]

Метод бумажной хроматографии (БХ) был открыт А. Мартином и Р. Синджем в 1944 г. и впервые применен для анализа смесей аминокислот. Хроматография на бумаге (и родственная ей [c.238]

Распределительная хроматографий аминокислот на бумаге [c.27]

Рис. 19. Установка для хроматографического разделения аминокислот на бумаге (нисходящая хроматография)

В 1944 г. Мартин и др. [7] предложили заменить инертный носитель фильтровальной бумагой, заложив тем самым экспериментальные основы распределительной хроматографии. Бумага удерживает в порах молекулы воды, сорбируя их из воздуха (неподвижный растворитель). При соприкосновении подвижного растворителя с бумагой, на которую нанесены хроматографируемые вещества, последние переходят в подвижную фазу и перемещаются с различными скоростями, вследствие чего и происходит их разделение. В настоящее время распределительная хроматография на бумаге нашла широкое применение для разделения различных веществ аминокислот, белков, углеводов, антибиотиков, неорганических веществ и др. [2, 3, 4, 7—10]. [c.74]

ХРОМАТОГРАФИЯ ДНФ-АМИНОКИСЛОТ НА БУМАГЕ [c.268]

Подготовка бумаги. Для разделения аминокислот используют бумагу для хроматографии № 1 или 2, предварительно обработанную раствором 8-оксихинолина или раствором трилона Б для удаления следов катионов металлов. Листы бумаги, соответствующие по размеру хроматографической камере, помещают в 0,1 %-ный раствор 8-оксихинолина (раствор 0,1 г 8-оксихинолина в 100 мл смеси, состоящей из н-бутилового спирта, ледяной уксусной кислоты и воды в объемном соотношении 4 1 1). Через 1—2 мин бумагу вынимают, подсушивают, помещают в хроматографическую камеру для нисходящей хроматографии, закрепляют один конец в кювете с подвижным растворителем — смесью н-бутилового спирта, уксусной кислоты и воды (4 1 5 по объему). [c.110]

Хроматография аминокислот на бумаге 161 [c.161]

РАСПРЕДЕЛИТЕЛЬНАЯ НИСХОДЯЩАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ АМИНОКИСЛОТ НА БУМАГЕ [c.127]

В каждом конкретном случае выбор системы растворителей для разделения ДНФ-аминокислот на бумаге в значительной мере определяется особенностями решаемого вопроса. Чтобы получить хорошее разделение, необходимо соблюдать в основном те же предосторожности, о которых уже упоминалось в связи с хроматографированием самих аминокислот. Кроме того, существует одно весьма важное условие разделение ДНФ-аминокислот необходимо проводить в темноте. Большое значение имеет также предварительное приведение бумаги в равновесие с парами растворителя и поддержание постоянной температуры. Многие из испытанных сортов бумаги оказались в равной мере подходящими для хроматографии обнаружение разделенных компонентов после хроматографирования является простой задачей. Для локализации полезно использовать сильное поглощение ДНФ-аминокислот в ультрафиолете. [c.152]

Для хроматографии аминокислот на бумаге применяют специально обработанную фильтровальную бумагу, а также прорезиненную фильтровальную бумагу, в которой набухший каучук играет роль неподвижного растворителя . [c.157]

В состав зольных элементов бумаги входят ионы меди, легко образующие комплексные соединения с ионами аминокислот. Хотя количество их и очень невелико, однако образование медного комплекса можно заметить в виде розового выступа впереди пурпурного пятна аминокислоты на бумаге. Образование этих комплексов можно предупредить, добавляя к растворителям вещества, осаждающие ионы меди или образующие с ней более прочные комплексные соединения. В качестве таких веществ были использованы сероводород, цианистый водород, аммиак и специальный реактив на медь, купрон (а-бензоиноксим). Можно также предварительно обработать применяемую для хроматографии бумагу разбавленным раствором K4[Fe N)g]. [c.158]

Методы хроматографии аминокислот на бумаге получили многочисленные применения в биохимии животных и растений, в микробиологии и медицине. Для количественного анализа аминокислот наиболее удобен все же способ, использующий образование комплексных соединений с медью. Содержание аминокислоты определяется по количеству меди в таком комплексе. Этот метод можно применять к смесям аминокислот, разделенных в одномерной хроматограмме. [c.161]

Принцип распределительной хроматографии основан на различии в коэффициентах распределения аминокислот между водой и органическим растворителем. Особенность метода распределительной хроматографии на бумаге по сравнению с обычной экстракцией ам.инокислот из водного раствора органическим растворителем заключается в том, что одну из фаз, чаще всего водную, помещают на какой-нибудь инертный твердый носитель, а органический растворитель — подвижная фаза,— проходя через первую, извлекает и распределяет аминокислоты на бумаге в соответствии с их коэффициентами распределения. Положение аминокислот на бумаге определяют по отношению скорости движения аминокислоты скорости движения фронта растворителя и обозначают Rf. Величина за висит в первую очередь от строения аминокислоты, затем от системы растворителей, pH среды и сорта бумаги, Чем полярнее аминокислота, тем меньше она растворяется в органических растворителях и тем меньше ее R . Увеличение длины углеродной цепи повышает . Введение в молекулу полярных групп, например, гидроксильной, аминной или карбоксильной понижает Rf Так, Rf фенилаланина в системе фенол/вода = 0,85, а тирозиит 0,51. Другие примеры изменения в зависимости от строения аминокислоты представлены на рис. 3 и 4. Подбирая соответствующие смеси растворителей, можно провести достаточно тонкое разделение аминокислот. Наиболее часто пользуются для такого разделения системами вода — фенол — аммиа вода — бутапол — уксусная кислота бутанол — аммиак — коллидин и т. д. Разделение можно проводить на одномерной или двумерной хроматограммах. Можно пользоваться также различными типами распределительной хроматографии на бумаге — нисходящей, восходящей и радиальной. Величины Rt для каждой из систем растворителей оказываются постоянными при соблюдении [c.479]

Через несколько часов, когда можно ожидать разделения аминокислот, бумагу вынимают из ванночки и растворитель удаляют высуи иванием. После этого для лучшего разделения аминокислот лист бумаги поворачивают на 90° и снова помещают в ванночку и по бумаге пропускают другой растворитель. После вторичного пропускания растворителя бумагу обрабатывают каким-либо реактивом, дающим окрашивание при взаимодействии с аминокислотами, чаще всего нингидрином или изатином. На бумаге появляются окрашенные пятна, соответствующие отдельным аминокислотам. По месту положения пятен и интенсивности их окраски судят о наличии и содержании в гидролизате белка тех или иных аминокислот. Фотография хроматограммы показана на рисунке 21. Метод распределительной хроматографии на бумаге позволяет быстро и точно определить содержание аминокислот. В последние годы хроматографические методы успешно применяются для разделения и определения сахаров, органических кислот и ряда других соединений. [c.218]

В настоящее время методы бумажной хроматографии продолжают совершенствоваться. Описана хроматография аминокислот на бумаге, пропитанной ионообменными смолами или модифицированной химическим путем (например, ДЭАЭ-целлюлозная бумага) [c.70]

Подготовка бумаги. Для разделения аминокислот используют бумагу для хроматографии Ki 1 и № 2. Бумагу тщательно отмывают 0,3 н. раствором НС1, затем 0,5 н. раствором щелочи, избытш< [c.299]

Общая методика разделения оргяничйских неществ на бумаге огисана выше (см. Распределительная хроматография аминокислот на бумаге ). [c.172]

Метод двухмерной хроматографии в плоском слое был предпсжен в 1944 г. Кондсено, , Гордоном и Мартином [91]. Им удалось разделить 15 из 22 аминокислот на бумаге в течение (27+48) ч. С того времени появилось свыше 200 публикаций о применении такого двухмерного метода. Тем не менее в усовершенствовании этого подхода еще не сделано каких-то крупных достижений. Основная причина обусловлена тем. что положению веществ в двухмерном слое относительно трудно дать числовую оценку не могут [c.274]

Относительную чувствительность аминокислотных остатков в инсулине к "[-излучению исследовали Дрейк и его сотрудники [69]. Как указывалось ранее, интенсивное исследование инсулина особенно желательно, поскольку он является единственным белком, строение которого полностью известно. На основании результатов определений концевых групп, изучения спектров поглощения и хроматографии аминокислот на бумаге в образцах, подвергнутых облучению дозами до 40 мегафэр, были сделаны выводы 1) что цистин, тирозин, фенилаланин, пролин и гистидин обладают высокой радиочувствительностью 2) что лейцин, изолейцин, валин, лизин и аргинин заметно разрушаются при наиболее высоких дозах и 3) глицин и фенилаланин, Н-концевые аминокислоты (т. е. имеющие свободные а-аминогруппы) дезаминируются. [c.227]

Созданию современной аналитической хроматографии аминокислот предшествовало два очень важных события — разработка методов получения химически гомогенных белков (школа Норт-ропа, середина 30-х годов [1]) и организация промышленного производства ионообменных смол с последующим развитием ионообменной хроматографии (50-е годы). В промежуточный период были разработаны адсорбционная и распределительная хроматографии аминокислот (на бумаге и на колонках с сорбентами), оказавшиеся, однако, непригодными для решения практических задач. Так колоночная хроматография не нашла применения, главным образом, из-за несовершенства имеющихся в то время сорбентов, в основном природного происхождения. Тем не менее благодаря тщательному подбору условий анализа В. Стейну и С. Муру, лауреатам Нобелевской премии за 1972 г., удалось добиться вполне удовлетворительного разделения смеси аминокислот [2]. Однако этот метод оказался слишком трудоемким и также не нашел широкого применения, поскольку требовалась тщательная стандартизация крахмала, хроматографические свойства которого зависят от источника выделения и метода получения. [c.305]

Реактивы и аппаратура для бумажной хроматографии. Бумага. Фильтровальная бумага должна быть ровной, достаточно плотной, чтобы растворитель двигался не слишком быстро н не слишком медленно, химически чистой и достаточно чувствительной. Бумага не должна адсорбировать аминокислот. Эти.м свойствам удовлетворяют некоторые сорта ватманской фильтровальной бумаги — № 1, № 2, № 4, а также мунктелевская быстрая бумага Л Ь 0. ОВ. Обычная фильтровальная бумага хорошего качества может употребляться, если после испытания она будет давать-четкие пятна (не растянутые и без [c.391]

Хроматография на бумаге. — Этот метод, введенный Мартином и Синджем в 1944 г., используемый теперь iBo всех областях химии, применим, в частности, для идентификации компонентов смеси аминокислот с ди- и трипептидами, получаемой при частичном гидролизе белков и полипептидов. Компоненты гидролизата распределяются между одой, адсорбированной на целлюлозе и являющейся неподвижной фазой, и органическим растворителем, подвижной фазой (например, водный этиловый спирт, бутиловый спирт, фенол), которая движется вдоль листа вверх или вниз, — восходящий или нисходящий способы. Более липофильные аминокислоты сильнее увлекаются органическим растворителем, более гидрофильные —проявляют большую тенденцию связываться с неподвижной водной фазой. Гомологичные соединения, отличающиеся даже на одно метиленовое звено, движутся с различной скоростью и легко могут быть разделены. По окончании хроматографии бумагу высушивают н опрыскивают нин-гидрином для проявления аминокислот в виде окрашенных пятен. Нингидрин (2-гидрат индантриона-1,2,3) окисляет аминокислоты до R HO, NHa и СОг. Образующееся дигидросоединение при взаимодействии с аммиаком образует соответствующий пигмент [c.636]

Термостатируемая разделительная колонка имела во всех опытах длину 1150 мм и диаметр 9 мм. К этой хроматографической колонке была подключена еще короткая (80 мм) колонка, которая содержала нейтральную форму саркозиновой смолы. При использовании метода Херинга (ср. разд. 7.4) вторая колонка предназначается для количественного разложения ожидаемых в элюате раствореннных аминокислотных комплексов, которые мешают обнаружению аминокислот хроматографией на бумаге, и для задержки ионов металлов на нейт- [c.215]

Принцип цетода. Свободные аминокислоты экстрагируют из вегетативных органов растений спиртом, а из семян водой. Экстракты очищают и определяют в них содержание аминокислот хроматографией на бумаге. [c.37]

Техника получения бумажных хроматограмм была уже изложена в общих чертах выше. При хроматографировании аминокислот на бумаге было замечено (Консден и др., 1944), что аминокислоты вступают в реакцию с металлами (например, медью), которые способны образовывать соли с аминокислотами. Это обстоятельство мешает получению достаточно четких хроматограмм. Для устранения указанного дефекта к растворителям добавляют в небольшом количестве такие соединения, которые осаждали бы подобные металлы или образовывали с ними комплексные соедипепия. Такими добавками могут служить HgS, H N, NHg, а-бензоиноксим (купрон). Можно также предварительно обработать бумагу слабым раствором K4Fe(GN)g. Наиболее употребительными растворителями для бумажной хроматографии аминокислот и пептидов являются фенол и коллидин, предварительно насыщенные водой. [c.147]

В связи с быстрым развитием химии белка и белкового обмена потребовались новые, точные методы определения аминокислот с затратой очень небольших количеств исследуемых объектов и времени. Метод распределительной хроматографии на колонке не всегда удовлетворял этим требованиям. Используемый инертный носитель, чаще всего силикагель, проявлял адсорбционные свойства, что оказывало неблагоприятное влияние на разделение аминокислот, а методика таких работ была очень трудоемкой. В 1943 г. А. Мартин, Р. Синдж, Р. Консден и А. Гордон использовали для анализа малых количеств аминокислот фильтровальную бумагу. В этом случае фильтровальная бумага явилась носителем неподвижной водной фазы. Для разделения смеси веществ они наносили на полосу фильтровальной бумаги маленькую каплю исследуемого раствора, на небольшом расстоянии от края. Затем каплю раствора подсушивали, и этот конец бумаги помещали в растворитель так, чтобы нанесенная капля была несколько выше поверхности растворителя. Растворитель (обычно органический растворитель смешанный с водой) под действием капиллярных сил поднимался вверх по полосе бумаги как только подвижная фаза подходила к месту нанесения смеси веществ, происходило распределение отдельных компонентов смеси мел ду подвижной и неподвижной фазами, основанное на различии их коэффициентов распределения. Все вещества, у которых величина коэффициентов распределения различалась хотя бы незначительно, образовывали отдельные зоны (пятна) на полоске бумаги за счет многократного повторения акта распределения дтежду двумя фазами. [c.79]

В СВЯЗИ с развитием химии белка потребовались новые, быстрые н точные методы определения аминокислот с использованием малых количеств исследуемого вещества. Для этих определений методика распределительной хроматографии на колонке оказалась слишком трудоемкой. На разделении аминокислот неблагоприятно сказывались адсорбционные свойства используемого инертного носителя, чаще всего силикагеля. В 1943 г. Мартин, Консден и Гордон использовали для анализа малых количеств аминокислот фильтровальную бумагу в качестве носителя неподвижной водной фазы, а в качестве подвижной фазы смесь органического растворителя с водой. Для разделения смеси веществ на полоску фильтровальной бумаги наносили маленькую каплю исследуемого раствора и этот конец полоски помещали в растворитель, так чтобы нанесенная капля была несколько выше поверхности растворителя. При этом отдельные компоненты смеси распределяются между подвижной и неподвижной фазами соответственно различию значений их коэффициентов распределения. Даже при незначительных различиях коэффициентов распределения разделяемые вещества образуют отдельные зоны (пятна) на полоске бумаги. [c.53]

Подготовка бумаги. Для разделения аминокислот используют бумагу для хроматографии № 1 и № 2. Бумагу тщательно отмывают 0,3 н. раствором НС1, затем 0,5 н. раствором щелочи, избыток NaOH отмывают дистиллированной водой до отрицательной реакции по фенолфталеину, обрабатывают 0,1%-ным фосфатным буферным раствором (pH = 7,0—7,5) и высушивают. [c.329]

Разделение может быть достигнуто путем образования неустойчивого соединения из устойчивого рацемата и устойчивого оптически активного разделяющего агента [52]. Можно привести следующие примеры разделения этого типа разделение основания Трегера путем хроматографирования па колонке с лактозой [61] разделение миндальной кислоты на колонках с амилозой или крахмалом [62], металлоценов на колонке с ацетилцеллюлозой [63], разделение аминокислот хроматографией на целлюлозе бумаги [64], гликолей путем экстракции хиральными растворителями [65], аминокислот на хиральных ионообменных смолах [66] и трифтор-ацетильных производных аминокислот с помощью газо-жидкостной хроматографии на хира.льпой стационарной фазе [67]. [c.29]

Ун е создатели распределительной хроматографии аминокислот на бумаге (Консдеп с сотрудниками) указывали на семь факторов, обусловли-нающих различия в величинах Л при применении одной и той же систем1.1 [c.143]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология