Пептиды получение

После окончания синтеза пептидной цепи защитные группы удаляются как с С-, так и с М-конца. Наибольшую трудность в пептидном синтезе представляет выделение пептида, полученного на каждой стадии конденсации, причем это особенно осложняется с увеличением молекулярной массы синтезированного пептида. [c.381]

Для определения строения белков разработан ряд методов, которые еще 20 лет тому назад были неизвестны, — хро матография, противоточное распределение и ионофорез в неподвижной среде. Благодаря указанным методам удалось получить белки в чистом виде и выделить их составные части— пептиды, аминокислоты и их производные. Эти методы характеризуются не только высокой эффективностью, но позволяют работать с количествами вещества порядка нескольких микрограмм. Следующим этапом явилась разработка химических методов идентификации аминокислот и пептидов, полученных расщеплением полипептида [266, 277, 320]. [c.164]

ТАБЛИЦЫ ПРОМЕЖУТОЧНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ДЛЯ СИНТЕЗА ПЕПТИДОВ, ПОЛУЧЕННЫХ G ПОМОЩЬЮ СМЕШАННЫХ АНГИДРИДОВ [c.302]

Пептиды, полученные под действием пепсина [c.518]

Для предварительного разделения пептидов на фракции часто применяют так называемый четырех- или пятикамерный электрофорез. Он позволяет отделить основные, кислые н нейтральные пептиды друг от друга. Каждую из фракций можно подвергнуть затем разделению яри помощи ионообменной хроматографии, микропрепаративным электрофорезом на бумаге или противоточным распределением, ограничиваясь при этом несколькими миллиграммами вещества. В качестве примера представлена схема разделения химотрипсиногена, проведенная Шор-мом с сотрудниками (см. схему на стр. 517). Прекрасные результаты дает метод Хирса, Мура и Штейна— автоматическое разделение пептидов на смоле Дауэкс-50. Строение пептидов, полученных в результате разделения, устанавливают. описанными выше методами. [c.519]

Тринадцать основных пептидов, выделенных при гидролизе рибонуклеазы, содержат все аминокислотные остатки, входящие в состав этого фермента исследование осколков позволило точно определить количество остатков двух аминокислот [152]. Порядок соединения пептидов между собой в исходном белке был установлен по результатам исследования пептидов, полученных из рибонуклеазы под действием химотрипсина [154]. [c.191]

Окисленная рибонуклеаза. Действие химотрипсина на рибонуклеазу менее специфично, чем действие на этот субстрат трипсина. Об этом свидетельствуют более низкие выходы полипептидов при разделении гидролизата методом ионообменной хроматографии [154]. В выделенных полипептидах установлено наличие 151 аминокислотного остатка, в то время как в полипептидах, полученных в результате расщепления трипсином, обнаружено всего 124 остатка. По-видимому, это объясняется тем, что некоторые участки полипептидной цепи появляются более чем в одном из пептидных обломков. О более сложном составе гидролизата можно судить по небольшим количествам примесей (как правило, не выше 15%), присутствующих в большинстве основных фракций. Эти примеси не мешали определению аминокислотного состава фракций, но их присутствие еще раз подчеркивает трудности, которые встречаются при фракционировании смесей пептидов, полученных менее специфическими методами гидролиза. Гидролизаты рибонуклеазы были получены инкубированием в течение 24 час с ферментом при pH 7. При более кратковременном инкубировании гидролизат содержал дополнительно [c.204]

Среди других пептидов, полученных при кислотном гидролизе цепи А, обнаружены следующие [c.1068]

F. G > 3 другой — СВЯЗЬ. .. Н. I... Применим оба метода расщепления к нашей модели. Первый метод даст два пептида А. В. С. D. Е. F. и G. И. I. J. К. L. М. N. Второй метод даст также два пептида А. В. С. D. Е. F. G. И. и I. J. К. L. М. N. Последовательность исходного пептида определяют на основании анализа четырех полученных фрагментов. Для этого нужно определить их аминокислотный состав, а также N- и С-концевые группы. Аминокислотную последовательность этих малых пептидов удается определить путем поэтапного расщепления, дальнейшего частичного гидролиза и определения концевых групп получившихся более мелких фрагментов. При этом возникает возможность выявить перекрывающиеся последовательности пептидных фрагментов. Например, часть G. Н... пептида, полученного первым методом расщепления, имеет такую же последовательность, как и С-концевая часть фрагмента. .. F. G. Н.— одного из пептидов, полученных вторым методом. По принципу собирания мозаики мы может восстановить структуру исходного пептида на данном участке. [c.33]

Основное значение работ ученых в 1900—1910 гг. состояло в установлении цепеобразной структуры молекул бе угов, состоящих из множества остатков аминокислот. То обстоятельство, что полученные синтетически полипептиды в ряде случаев оказались тождественными природным пептидам, полученным при неполном гидролитическом расщеплении белков, не могло не привести к выводу, что полипептиды могут рассматриваться в качестве фрагментов сложных белковых молекул. Из работ Э. Фишера также следовало, что белки представляют собой особый класс органических соединений. [c.261]

Сложную смесь пептидов, полученных при расщеплении пепсином нативного лизоцима, разделяли в 1%-ной муравьиной кислоте на длинной колонке, заполненной сефадексом 0-25, При этом наблюдалось сильное удерживание фрагментов, содержащих остатки ароматических аминокислот [23] (рис. 34.4). [c.401]

Метод можно применить также к пептидам, полученным частичным гидролизом белков. [c.431]

Если пептидная цепь настолько длинна, что рассмотренные методы не позволяют полностью установить ее строение, полипептид осторожно гидролизуют (с применением специфических ферментов или другими методами), расщепляя его на небольшое число более коротких пептидов. Полученную смесь тщательно разделяют и анализируют выделенные пептиды, после чего устанавливают структуру исходного полипептида. [c.814]

Дициклогексилкарбодиимид ДЦК (24), при взаимодействии с карбоновыми кислотами дает аддукт (25), который служит эффективным ацилирующим агентом для спиртов и аминов. ДЦК, однако, довольно редко используют для получения эфиров [41], хотя щироко применяют в синтезе амидов и пептидов. Получение депсида (26) [42] служит одним из немногих примеров применения ДЦК в синтезе эфиров. [c.299]

Иногда второго расщепления полипептида на фрагменты оказывается недостаточно, чтобы найти перекрывающиеся участки для двух или более пептидов, полученных после первого расщепления. В этом случае применяется третий, а то и четвертый способ расщепления, что позволяет в конце концов получить набор пептидов, обеспечивающих перекрывание всех участков, необходимых для установления полной последовательности исходной цепи. При этом для расщепления полипептида можно использовать другие протеолитические ферменты, например химотрипсин или пепсин правда, эти ферменты расщепляют пептидные связи гораздо менее избирательно, чем трипсин (табл. 6-6). [c.152]

В табл. I—XXX приводятся промежуточные соединения для синтеза пептидов, полученные с помощью смешанных ангидридов. В каждой таблице рассматривается один тип смешанного ангидрида. Материал расположен в соответствии с возрастанием числа аминокислотных остатков в продуктах реакции. Пептиды с одинаковым числом остатков расположены в порядке возрастания числа остатков в ацилирующем агенте. Дальнейшее подразделение зависит от характера аминокислоты, которая образует ангидрид аминокислоты расположены в следующем порядке алифатические, ароматические, кислые, основные и неприродные. [c.302]

Изящная комбинация химической модификации с ионообменной хроматографией была использована для быстрого отбора из совокупности пептидов, полученных после трипсинового гидролиза, тех из них, которые содержат Met. Смесь трипсиновых пептидов растворяли в 30%-ной СН3СООН и обрабатывали радиоактивно меченным иодацетамидом. На атоме серы метионина возникал дополнительный положительный заряд, поэтому при хроматографии на сильном катионообменнике такие пептиды задерживались но сравнению с нормальным положением их элюции. По наличию метки со- [c.298]

Зная строение пептидов, полученных при гидролизе различными ферментами, можно установить первичную структуру белка, решая задачи типа кроссвордов. В настоящее время установлены первичные структуры тысяч белков. Их сводки систематически публикуются в атласе белковых структур. На рис. 2.2 и 2.3 изображены первичные структуры рибонуклеазы быка и миогло-бина кашалота. В первом случае имеются четыре дисульфидные связи, соединяющие друг с другом остатки Цис. [c.33]

Последовательность аминокислотных остатков в полипептид-,ной цепи называется ее первичной структурой. Определение пер.-вичной структуры производится путем частичного гидролиза белка с помощью специфических протеаз, катализирующих расщепление пептидной связи лишь между определенными остатками. Так, трипсин атакует лишь те пептидные связи, которые образованы СО-группами остатков основных аминокислот — Apr или Лиз. В результате образуется смесь коротких полипептидных цепей, олигомеров. Такие короткие цепи называются пептидами. Их исследование производится посредством химических и физико-химических методов (хроматография, масс-спектроскопия). Воздействуя другим ферментом, можно разрезать белок по другим связям, получить смесь других пептидов. N- и С-конце-вые остатки белка (см. стр. 68) определяются в результате их химической модификации, предшествующей частичному гидролизу. Зная строение пептидов, полученных при специфическом расщеплении различными ферментами, можно установить первичную структуру белка. Допустим, что белковая цепь имеет структуру [c.73]

Из методов неспецифического ферментативного расщепления чаще всего применяется гидролиз пепсином, папаином, бактериальными или грибковыми протеазами. Все три типа ферментов дают гидролизаты, представляющие собой сложную смесь мелких пептидов. В связи с этим их лучше использовать на конечных этапах расщепления крупных пептидов, полученных методами специфического гидролиза. Общий обзор методов ферментативного гидролиза сделал Хилл [34] подробные сводки о действии пепсина, папаина и бактериальных протеаз опубликовали Бовей и Янари [2], Смит и Киммель [781 и Хагихара [28] соответственно. [c.35]

Впервые хроматография на бумаге была предложена для качественного и количественного определения аминокислот и пептидов, полученных прн гидролизе белка. До настоящего времени этот способ пригодеь для разделения природных веществ — углеводов, липидов, нуклеотидов и др. [c.498]

В табл. 7.4 приведены структуры пептидов, полученных расщеплением рибонуклеазы с помощью трипсина и химотрипсина. Естественно, что, когда происходит разделение смеси пептидов трипсинового или химотрипсинового гидролиза- [c.273]

Очевидно, что N-концевые группы всех Т-пептидов отличаются от N oнцeвыx групп С-пептидов, поскольку использованные для расщепления ферменты действуют по разным точкам. Исключение составляют пептиды, полученные из 1S-конца исходной цепи, они должны иметь одинаковое начало. Из рассмотрения приведенных в табл. 7.4 структур видно, что таковыми являются пептиды Т-10 и С-5. При этом пептид Т-10 входит в состав С-5, который в дополнение к Т-10 содержит остаток F (фенилаланин). Следовательно, пептид серии Т, примыкающий с С-конца к Т-10, должен начинаться с фенилаланина. Таковым в приведенной серии является только пептид Т-4, т.е. последовательность трипсиновых фрагментов с N- toнцa молекулы Т-10, Т-4. Этот <двойной> Т-пептид содержит весь пептид С-5 и сверх того фрагмент ER. Следовательно, к С-5 должен примыкать пептид С-7, начинающийся с этих двух аминокислотных остатков. Следующая за аргинином основная часть пептида С-7 является N-концевой частью пептида Т-14, который примыкает в исходной структуре к Т-4. Восстановленная таким путем N-концевая последовательность рибонуклеазы приобретает вид Т-10, Т-4, Т-14. Последний содержит остаток тирозина (Y), т е. точку расщепления химотрипсином. Поэтому третий слева пептид группы С должен начинаться с последовательности NqMNK. Это позволяет записать блок С-пептидов на N-конце в виде G-5, С-7, С-9. Пептид С-9 содержит в своем составе сразу несколько Т-пептидов — [c.274]

Полусинтез (семисинтез, частичный синтез) — способ получе-ния соединений, заключающийся в комбинировании природных пептидов и белков или их фрагментов с пептидами, полученными полным синтезом или модификацией природных объектов. Полу-синтез можно рассматривать как методический прием, основанный на модификации природных соединений. [c.151]

Примерами могут служить пептиды, полученные изменением направления аци/1ирования в пептидной цепи — так называемые ретро-изомеры (рис. 84, пара б—г), аналоги, образованные полным обращением конфигурации всех аминокислотных остатков (энантио-изомеры) (рис. 84, пара а — б), и особенно аналоги, сконструированные комбинацией этих двух приемов (ретро-энан-тио-изомеры) (рнс. 84, пара а — г или а — в, рис. 85). Такого рода модификации касаются как циклических, твк и линейных пептидов, однако в последнем случае для топохимического подобия аналогов необходимо, чтобы N- и С-концевые группы были соответствующим образом блокированы (рис. 86). [c.174]

На рис 5-19 приведена хроматограмма смеси пептидов, полученная с применением термораспылительной системы для их определения Гексапептид, содержащий аргинин, и пептид, содержащий орнитин, разделялись на короткой колонке, на- [c.142]

При установлении структуры предполагают, что аминокислоты соединяются друг с другом только за счет а-амино- и -карбоксильных групп и поэтому пептиды, полученные при действии трипсина, должны иметь на С-конце пептида аргинин или лизин, а пептиды, полученные при действии химотрипсина, должны иметь в качестве С-концевой аминокислоты тирозин или фенилаланин. Другие исследователи [131], использовавшие гидролиз дипитрофенилиро-вапной рибонуклеазы трипсином, пришли к аналогичной структуре рибонуклеазы. [c.415]

Нормальный гемоглобин Р состоит из двух цепей а и двух цепей у- Первые тождественны цепям а гемоглобина А, в то время как при гидролизе цепей у образуются пептиды, отличающиеся от пептидов, полученных из цепей Р и обладающие гликокольным остатком у аминного конца. Один аномальный гемоглобин зародыша состоит из четырех цепей у. [c.433]

Рис. 10. Кривая разделения растворимых триптических пептидов, полученных из 10 мг гемоглооина, на колонке

Дополнительный теоретический анализ естественного градиента pH выполнен Свенссоном [9, 12] в 1961 и 1962 годах. Он предложил заменить многокамерный прибор градиентом плотности и описал свойства амфолитов-носителей, пригодных для формирования стабильного градиента pH. Свеиссон рекомендовал использовать низкомолекулярные амфолиты, обладающие буферными свойствами и- проводимостью в изоэлектрической точке . Поиски подходящих носителей показали [12, 13], что доступные амфолиты не вполне пригодны для работы, особенно при pH 4—7. Для этой цели более или менее пригодны смеси пептидов, полученные частичным гидролизом белков, однако их присутствие затрудняет анализ разделяемых смесей [13]. До настоящего времени наиболее удачными амфолитами оказались соединения, которые были специально синтезированы для этих целей. [c.301]

При иодировании тирозина последовательно образуются моно- и дииодтирозин (соответственно МИТ и ДИТ). Введение второго атома иода протекает с более высокой скоростью, по этому ДИТ является основным продуктом реакции. Степень замещения и распределение иодтирозина в пептидах, полученных после гидролиза белка, определяют по включению радиоактивной метки, а также методом дифференциальной спектрофото-метрии. [c.353]

Полипептидный гормон инсулин участвует в регуляции углеводного обмена. Молекула бычьего инсулина содержит 51 аминокислоту и состоит из двух цепей. Последнее подтвернедается присутствием двух N-концевых аминокислот — глицина и фенилаланина. Цепь с N-концевым глицином называется А-цепью и содержит 21 аминокислоту цепь с N-концевым фенилаланином называется В-цепью, и в состав ее входит 30 аминокислот. Сэнгер и его сотрудники окислили инсулин надмуравьиной кислотой и провели хроматографическое разделение двух цепей. После этого каждую цепь подвергли ферментативному и кислотному гидролизу. На фиг. 27 и 28 указаны главные пептиды, полученные при гидролизе каждой из цепей, и приведены полные структуры цепей, установленные на основе этих данных. Видно, что места, в которых трипсин, химотрипсин и пепсин расщепляют цепи, согласуются с тем, что мы знаем о специфичности этих ферментов в отношении синтетических соединений. Обнаружено также и несколько дополнительных мест расщепления, в частности при гидролизе, катализируемом пепсином. Особо следует обратить внимание на то, что перекрывающиеся пептиды, полученные при использовании разных гидролитических методов, дополняют друг друга и позволяют однозначно установить общую аминокислотную последовательность. Для каждого из главных пептидов, приведенных на фиг. 27 и 28, аминокислотная последовательность была определена путем неспецифического гидролиза кислотой, установления последовательности аминокислот в образовавшихся ди-, три- и тетрапептидах и объединения полученных данных в общую картину. Как указывалось выше, в настоящее [c.91]

Пептиды, полученные Гли-Илей-Вал-Глу-Глу-Цис ЗОзН-Цис 80зН-Ала-Сер-Вал-Цис ЗОзН-Сер-Лей Лей-Глу-Асп-Тир-Цис ЗОзН-Аси [c.92]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология