Жидкостная хроматография при высоких давлениях ввод проб

По последовательности операций ФЖХ похожа на обычную ГЖХ. В приборе устанавливается нужный газовый поток, в хроматографическую колонку вводится проба исследуемой смеси и выходящие из колонки компоненты смеси детектируются или собираются. Работа ведется на насадочных колонках, при этом возможно применять весьма тонкодисперсный набивочный материал, так как газы, сжатые даже до высокого давления, имеют более низкую вязкость, чем жидкости, применяемые в жидкостной хроматографии. В табл. 57 дано сравнение некоторых физических свойств подвижных фаз, используемых в различных методах хроматографии. [c.93]

Система ввода пробы посредством шприца через самоуплотняющуюся резиновую прокладку аналогична применяющейся в газовой хроматографии. Однако при высоких давлениях такие устройства начинают давать течь. Поэтому в установках для жидкостной хроматографии в уплотняющей резину гайке делается отверстие, соответствующее диаметру иглы шприца. В этом случае резиновая прокладка выдерживает значительно большее давление. Главным достоинством ввода пробы посредством шприца является возможность подачи пробы непосредственно на насадку, что существенно уменьшает первоначальное размывание зоны вещества. Шприц позволяет легко регулировать объем вводимой пробы. Наконец, этот способ весьма прост в конструктивном отношении. Однако при достаточно высоких давлениях способ становится непригодным, так как проба через неплотности в поршне шприца может проникать в обратном направлении. [c.84]

Так, разделить большие количества на аналитическом хроматографе с колонкой диаметром 10—14 мм можно при увеличении продолжительности его работы, чего можно достигнуть путем автоматизации процесса ввода и сбора образца. Для этого хроматограф должен быть оснащен коллектором фракций, автоматическим устройством ввода пробы и компьютером, управляющим их работой. Для некоторых жидкостных насосов предусмотрена возможность установки специальных препаративных головок, иногда с рециклом разделенных фракций, позволяющих использовать эти насосы с колонками диаметром 20—25 мм (при производительности до 20—30 мл/мин) или 35—50 мм (до 100 мл/мин). Соответственно петлевой инжектор должен иметь достаточно широкие внутренние каналы и возможность установки петли размером до 10 мл. Конструкция и геометрия петли должны быть такими, чтобы обеспечивалось минимальное размывание образца при вводе пробы длинные петли малого диаметра без резких изменений геометрии потока предпочтительней коротких и большого диаметра. Нередко удается заметно улучшить разделение, одновременно уменьшив размывание образца при вводе пробы путем ввода пробы без инжектора, установив вместо него тройник малого Ир объема и вводя пробу вспомогательным насосом высокого ржавления, работающим короткий отрезок времени. Менее удобным способом, дающим сходный результат, является ввод больших проб на колонку шприцем с использованием инжектора с прокалываемой резиновой мембраной, или краном малого объема, однако при этом ввод пробы (из-за ограниченного давления, которое можно создать шприцем даже хорошего качества около 5 МПа для шприца емкостью 1 мл и около 1 МПа—для шприца емкостью 10 мл) осуществляют при остановке потока (выключении основного насоса). [c.60]

Длина колонок, применяемых в высокоэффективной жидкостной хроматографии, составляет обычно от 0,15 до 9 м. Длину колонки выбирают в соответствии с требованиями разделения, ограничениями по давлению либо по времени и величине анализируемой пробы. Так, колонки, позволяющие вводить небольшие пробы, часто работают с перегрузкой из-за недостаточной чувствительности детектора, в связи с чем для сохранения требуемого коэффициента разделения увеличивают длину колонки. Высокая скорость разделения достигается при использовании колонок такой минимальной длины, которая позволяет еще обеспечить требуемое разделение. [c.52]

Хроматограмма на рис. 12.12 иллюстрирует применение жидкостной хроматографии высокого разрешения для анализа поглощающих в УФ-области компонентов (таких, как составляющие нуклеиновые кислоты) мочи. Хроматографирование проводилось на колонке с сильноосновной анионообменной смолой (размер частиц 12—15 мкм) при градиентном элюировании. В качестве стартового элюента использовался 0,015 М раствор ацетата натрия с pH 4,4. К нему добавляли градиентную смесь 6,0 М ацетата натрия с pH 4,4. Линейный градиент создавался через 30 мин после ввода пробы и поддерживался первые 24 ч. После этого от 24 до 30 ч подавался неградиентный элюент конечной концентрации 6,0 моль/л. Объемная скорость подвижной фазы составляла 8 мл/ч при давлении на входе от 70 до ПО атм. Первые 4 ч в колонке поддерживалась температура 25 °С, затем ее повышали. С помощью петли для образца р колонку вводилось 200 мкл необработанной мочи и за 30-часово [c.311]

Ввод пробы. В системе хроматографа для ГПХ должны быть предусмотрены кран с петлей и приспособление для прямого ввода образца. Кран с петлей необходим в случае вязких образцов. Большинство полимерных образцов следует вводить в виде 0,25— 1%-ных растворов. При больших концентрациях высокая вязкость раствора приводит к увеличению перепада давления и к неизбежному уширению пика из-за вязкого течения хвостовой части пика. Типичная система колонок для определения молекулярновесового распределения методом ГПХ имеет размеры 4,8X9 мм. Таким об-)азом, объем образца колеблется в пределах от 0,25 до 2 см Лз-за больших размеров образца и высокой вязкости раствора такие образцы не могут быть введены в находящуюся под высоким давлением систему обычным микролитровым (жидкостным) шприцем. Однако при стандартной аналитической работе с небольшими молекулами (т. е. невязкими в концентрированных растворах) образцы могут быть введены обычным способом с использованием микролитрового шприца. Ввод с помощью крана с петлей — стандартный метод введения больших образцов в препаративной работе. [c.196]

В разд. 4.2.1 уже говорилось, что адсорбенты, применяемые в ЖХВД, отличаются от адсорбентов, предназначенных для обычной хроматографии, структурой, а также размером и формой частиц. Адсорбенты для ЖХВД можно разделить на две большие группы поверхностно-пористые и полностью пористые. Поверхностно-пористые адсорбенты получают следующим образом на твердые, непористые, сферические ядра наносят пористый слой собственно адсорбента толщиной 1—2 мкм (см. разд. 4.2.1 и рис. 4.1,6). Благодаря такому строению все типы этих адсорбентов-носителей — шарики с регулируемой поверхностной пористостью, шарики, покрытые пористыми слоями, шарики, покрытые пленкой,— достаточно прочны и не разрушаются при высоких давлениях, применяемых при хроматографическом разделении. Хотя глубина адсорбционного слоя у таких адсорбентов значительно уменьшена, в адсорбентах типа корасил (табл. 4.7) имеется довольно много очень маленьких пор, что значительно расширяет адсорбционную зону, а производительность колонки сильно зависит от скорости течения. Ввиду относительно малой величины адсорбционной поверхности (1— 15 м /г) в такие колонки нельзя вводить пробы большого объема, так как перегрузка колонки приводит к снижению ее разделительной способности. Средняя емкость колонки — порядка 0,1 мг пробы на 1 г адсорбента. Малая емкость является недостатком, если используются малочувствительные детекторы, например рефрактометр. Однако сильнополярные вещества, вероятно, лучше разделяются на адсорбентах этого типа, потому что их легче можно элюировать. Кроме того, колонки с такими адсорбентами легче приготовить, подвижная фаза легче проникает в эти адсорбенты, в результате повыщается средняя скорость течения (но одновременно снижается высота, эквивалентная теоретической тарелке, ВЭТТ). На этих адсорбентах можно как и на адсорбентах других типов, закреплять жидкие фазы и использовать их также для жидко-жидкостной хроматографии. В табл. 4.7 дан список некоторых адсорбентов вместе с их характеристиками. [c.177]

Ошибки, с вязаиные с вводом пробы, могут возникать за счет утечек, фракционирования пробы и размывания пиков. Ввод пробы представляет существенные трудности в связи с наличием высокого давления в системах жидкостных хроматографов. Методика ввода пробы в жидкостной хроматографии имеет важное значение в связи с -возможностью гидравлического разрушения слоя наполнителя колонки либо размывания пика. Различие в удельных весах анализируемой пробы и подвижной фазы может вызвать размывание пика. Фракционирование пробы в жидкостной хроматографии как источник погрешности имеет меньшее значение по сравнению с газовой хроматографией, так как не производится испарения вводимой пробы и исключено фракционирование в шприце. Размывание пиков в устройстве для ввода пробы обычно проявляется в образовании хвостов, которые приводят к частичному перекрыванию и ошибкам при детектировании пиков. [c.176]

Перед устройством для ввода пробы 4 в жидкостных хроматографах помещают приспособление для сглаживания пульсаций давления, чем обеспечивается постоянная скорость истока. Проба анализируемого вещества должна равномерно распределяться ио поперечному сечению колонки. Поэтому ее следует вводить точно в центр иоперечного сечения слоя сорбента. Следует следить также за тем, чтобы во время ввода пробы в поток жидкости не попали пузырьки воздуха и другие загрязнения. Чаще всего пробу вводят с помощью шприца через специальную самоуплотняющуюся мембрану. В храматографах, работающих при высоких давлениях, применяют специальные шприцы в хроматографах, работающих при средних давлениях, применяют обычные шприцы с длинными иглами. Сейчас сконструированы устройства 4 с направляющими каналами, которые точно направляют иглу шприца в центр слоя сорбента и обеспечивают плотное обжатие мембраны. Материал мембраны должен быть стойким к водным и органическим средам и не набухать. [c.77]

Системы ввода пробы. Пробы вводятся, как и в газовых хроматографах, чаще всего микрошнрицем через резиновое уплотнение до давления 3,0—3,5 МПа [19—21] (имеются шприцы фирмы Hamilton до 40 МПа). В жидкостных хроматографах предъявляются более строгие требования к прокладкам из полимерных материалов, которые не должны набухать в растворителях. В этом отношении хороши фторированные эластомеры [21]. При высоких входных давлениях пробы вводятся шприцем без резинового уплотнения при остановке потока. Без остановки потока пробы могут вводиться специальными кранами [19]. Более совершенное дозирование без резиновых уплотнений описано в работах [22, 23]. [c.201]