Гексокиназа из дрожжей

Выделение гексокиназы из пекарских дрожжей [c.217]

Таким образом, до того как глюкоза отложится в виде гликогена, она предварительно фосфорилируется. Необходимая для этого гексокиназа тесно связана с компонентами клеток и не переходит в раствор, т.е. в мышечный экстракт, подобно гексокиназе дрожжей. (О фосфорилазе будет сказано ниже.) [c.253]

Гексокиназа (дрожжи) Щелочная фосфатаза Плазмин [c.72]

Гексокиназа Дрожжи Глюкоза 1300 [c.71]

При помощи органических растворителей были очищены (и кристаллизованы) многие ферменты. Например, этанол применен для фракционной очистки гексокиназы из дрожжей, пепсин выделен и кристаллизован из водного этанола. С помощью ацетона были получены частично очищенные препараты ферментов из мышечного экстракта, а также очищена амилаза слюны. Применение диоксана (фракционирование различными его концентрациями) позволило очистить каталазу бычьей печени, а затем кристаллизовать ее прибавлением сульфата аммония. В растворах этанола различной концентрации удалось из экстрактов поверхностных культур плесневых грибов получить осадки, содержащие почти полностью разделенные фракции амилаз и протеаз. [c.146]

Фермент, катализирующий эту реакцию, гексокиназа, а также аденозинтрифосфорная кислота имеются в дрожжах. [c.246]

Дрожжи и ткани животных содержат несколько ферментов, катализирующих фосфорилирование или дефосфорилирование органических веществ. Фосфорилирование сопряжено, как известно, с реакциями окисления — восстановления, поэтому эти ферменты уже рассматривались в общих чертах вместе е оксидоредуктазами. Гексокиназа, катализирующая превращение [c.305]

Гексокиназа Дрожжи 96 Димер АДФ, НзРО, Глюкозо-6-фосфат, фосфоеноилпируват [c.247]

Поскольку гексокиназа растительного происхождения катализирует образование маннозо-6-фосфата, этот фермент и фосфоманно-изомераза, вероятно, обеспечивают связь между маннозой и основными путями окисления углеводов. В растениях найдена гуанозин-дифосфоманноза. Ее образование катализируют следующие ферменты, выделенные из дрожжей, но не из растений [c.144]

Гексокиназа (дрожжи, животные ткани) (нуждается в Mg ) Фруктокиназа (печень, мышцы, бактерии) (нуждается в К+) [c.806]

Реакцию, катализируемую гексокиназой, можно рассматривать как необратимую. По-видимому, гексокиназа специфична по отношению к АТФ гексокиназа из растений проявляет активность с глюкозой, фруктозой, маннозой и глюкозамином. Этот широкий диапазон специфичности аналогичен диапазону гексокиназы дрожжей полагают, что он не является следствием присутствия сложной смеси гексокиназ. Тем не менее в горохе содержатся две гексокиназы одна из них реагирует с глюкозой и фруктозой, а другая специфична для фруктозы. Для действия гексокиназы необходим магний. Изучение фермента из дрожжей показывает, что, как и другие киназы, он расщепляет связь Р — О, а не С — О. У растений гексо-киназная активность обнаружена и в растворимой фракции и в фракции структурных элементов клетки. [c.121]

Наиболее изучена с точки зрения специфичности гексокиназа дрожжей. Она относительно устойчива и была получена в очень чистом состоянии в виде белка с молекулярным весом 96 ООО (Kunitz, Ma Donald, 1946). По-видимому, она абсолютно специфична к фосфату-донору (АТФ), но передает фосфат от этого соединения любой из глюкоз, способных к брожению,—D-глюко-зе, D-маннозе и D-фруктозе. Из данных табл. 2 видно, что наиболее быстро фосфорилируется фруктоза, если энзим является насыщенным, но в то же время она обладает наименьшим сродством к энзиму. Поскольку сахара фосфорилируются в положении 6, резонно предположить, что субстратом является скорее фуранозная форма (X) фруктозы, чем ее пиранозная форма (IX). [c.622]

Многие ферменты стабилизируются коферментами, субстратами и специфическими неорганическими ионами. Например1, де-гидраза фосфоглицеринового альдегида, полученная из мышцы кролика, становится гораздо менее стабильной после удаления ее кофер мента — дифосфопиридиннуклеотида (ДФН) [103]. Было найдено, что гексокиназа дрожжей стабилизируется при очистке добавлением 1% субстрата — глюкозы [184]. Имеются указания на то, что ионы кальция предохраняют бактериальную протеиназу от термической денатурации они в то же время существенно важны для проявления максимальной ферментативной активности протеиназы [185]. Инвертаза, полученная недавно Фишером и его сотрудниками [171] в чистом виде из дрожжей, связана с полисахаридом. Удаление последнего адсорбцией на бентоните понижает стабильность этого фермента. [c.40]

Непосредственно из экстракта плазмолизовавных хлебопекарных дрожжей (во время выделения гексокиназы [249]) высаливанием сернокислым аммонием были получены в кристаллическом состоянии еще три белка. Правда, для этого перед конечным выделением и кристаллизацией самого фермента из раствора сернокислого аммония необходимо провести фракционированное осаждение этиловым спиртом. Гексокиназа дрожжей также была получена с помощью метода, основанного на осаждении этиловым спиртом, с последующей кристаллизацией из раствора сернокислого аммония [184]. Сейчас уже установлено, что один из трех упомянутых выше кристаллических белков представляет собой дегидразу фосфоглицеринового альдегида [250], которую прежде выделяли гораздо более сложным путем и кристаллизовали из раствора сернокислого аммония [174]. [c.58]

Хексокиназа распространена повсеместно. Особенно хорошо изучена гексокиназа дрожжей. Ее молекула (М = 96000) составлена из 4 субъединиц. Мультимер устойчив при pH 5. При снижении или повышении pH раствора молекула гексокиназы распадается на 4 протомера (М=24 ООО), лишенных фосфо-трансферазной активности. В соответствии с двойственной природой субъединиц в мультимерах обнаружено 5 изозимов гексокиназы. [c.124]

Гексокиназа индуцированное соответствие. Имеются веские данные в пользу того, что в гексокиназе дрожжей, которая фосфорилирует глюкозу с участием концевого фосфата молекулы АТР, достигается индуцированное соответствие между ферментом и субстратом. Согласно данным рентгеноструктурного анализа, связывание как сахара, так и нуклеотида вызывает существенные изменения в третичной структуре фермента. Кроме того, присоединение нуклеотида к одной из форм фермента облегчается связыванием сахара [24, 25]. Эти результаты согласуются с результатами более ранних исследований АТРазной активности этого фермента в растворе в отсутствие глюкозы. Гексокиназа фосфорилирует глюкозу в положении 6 с Утах = 800 мкмоль-мин- на 1 мг белка и/См для АТР 0,1 мМ. В отсутствие глюкозы АТР гидролизуется с Утах = = 0,02 мкмоль-мин- на 1 мг белка и /См = 4,0мМ. Добавление ликсозы, которая не может фосфорилироваться вследствие утраты оксиметильной группы в положении 6, приводит к увеличению Утах ДЛЯ реакции с участием АТРазы в 18 раз при этом величина /См для АТР уменьшается в 40 раз, т. е. до значения /См, характерного дая фосфорилирования глюкозы [26, 27]. Ксилоза вызывает изменения в кристаллической структуре фермента, аналогичные изменениям, индуцируемым глюкозой (рис. 10.10). [c.319]

Активные радикалы НО и, в меньшей степени, но атакуют аминокислотные остатки четырех субъединиц каталазы, что было обсуждено ранее, и снижают функциональные возможности фермента. Потеря каталазных свойств непременно сопряжена с диссоциацией каталазы, которая в УЗ-поле облегчается атакой радикалами аминокислотных остатков, поддерживающих четвертичную структуру белка. Диссоциация олигомерных ферментов при озвучивании их растворов неоднократно наблюдалась приведем в качестве примера сонолиз гексокиназы дрожжей, сопровождающийся распадом фермента на субъединицы [33]. [c.171]

Галактокиназа выявлена в препаратах из маша в противоположность гексокиназа, рассмотренной на стр. 121, она катализирует фосфорилирование кислорода альдегидной группы при 1-м атоме углерода. УДФ-глюкозо-пирофосфорилаза получена в частично очищенном виде из проростков маша она, по-видимому, специфична по отношению к глюкозо-1-фосфату. Имеются данные, что значительная часть активности этого фермента связана с клеточными стенками. Галактозо-1-фосфат-урндил-трансфераза катализирует легко обратимый перенос группы урндила между глюкозо-1-фосфатом и галактозо-1-фосфатом. Фермент выделен из животных тканей и из микроорганизмов недавно получены данные о его наличии в корнях сои. УДФ-глюкозо-4-эпимераза найдена в растениях маша подробно она изучена на препаратах, полученных из дрожжей и печени. В присутствии Т2О или НгО метка в нуклеотидах не появляется. Эти данные, а также потребность в НАД указывают на участие окислительно-восстановительного механизма. Однако выделить предполагаемый при действии этого механизма промежуточный продукт уридиндифосфо-4-кетогексозу не удалось. [c.143]

I — тироглобулин 2 — v-глобулин (из сыворотки крови человека или крупного рогатого скота) 3 — альбумин из сыворотки крупного рогатого скота (димер) 4 — лактат дегидро-геназы (из сердца свиньи) 5 — гексокиназа (из дрожжей) — спиргговая дегидрогеназа (из печени лошади) 7 — альбумин из сыворотки крови крупного рогатого скота 5 — овальбумин 9 — химотрипсиноген /0 — цитохром С 7/— трипсиновый ингибитор (из бобов сои) J2 — карбоксипептидаза А /3 — фосфоглицеромутаза 14 — глицеролфосфатде-гидрогеназа /5 — креатинкиназа /5 — глицерол-бР-дегидрогеназа (из дрожжей) 17 аспарагиназа /5 — алкогольдегидрогеназа /9 — альдолаза 20 — глюкозоксидаза. [c.131]

Мол. масса гексокиназы из дрожжей 96 ООО, содержит четыре полипептидные цеточки с 800 аминокислотными остатками. Гексокиназа мозга и других животных ткая существует в нескольких молекулярных формах (изоферменты). [c.99]

Группа французских иоследователей впоследствии представила результаты физико-химического изучения гексокиназы, которые в некоторой степени подтверждают их гипотезу об упорядоченном механизме. Им удалось показать, что фермент из дрожжей связывает глюкозу прочнее, чем МдЛТФ - [93]. Подробное исследование ингибирования фермента позволило Косоу и Роузу [94] заключить, что при некоторых условиях (малые или умеренные ингибирующие концентрации МдЛДФ ) продукты реакции выделяются в определенной последовательности — сначала глюкозо-6-фосфат, а затем АДФ. [c.682]

Ввиду неопределенности критериев и трудности определения чистоты белка целесообразно выбрать другой путь исследования, а именно сравнительный анализ. Этот метод позволяет обнаружить, какие группы определяют функцию одинаковых белков (например, инсулина) различных биологических видов. Такой метод исследования имеет большое преимущество, если его сочетать с изучением ингибирующего действия. Еще одним путем исследования может быть анализ белков, близких по выполняемым функциям. Например, вое ферменты гликолитического цикла являются более или менее исследованными для каждого последующего фермента субстратом является продукт, образующийся в результате действия предыдущей системы ферментов. Сравнение тех ферментов гликолитического цикла, которые катализируют перенос атомов водорода (например, изомераза) или фосфатных групп (например, гексокиназа, фосфогексокиназа и дифосфогли-церофосфокиназа), представляло бы особый интерес, потому что каждая такая группа ферментов может иметь много общих структурных особенностей. С этой точки зрения можно рассматривать также соответствующие ферменты гликолитического цикла в дрожжах и мышцах. [c.251]

Ферментативная методика. Многие исследователи показали, что гек-сокиназа из мозга или из дрожжей в присутствии АТФ катализирует превращение глюкозамина в его 6-фосфат [236—238]. Слейн [222] использовал этот метод для раздельного определения о-глюкозамина и о-галактозамина, поскольку фермент специфичен для производного глюкозы. После реакции Эльсона — Моргана смесь обрабатывают частично очищенной дрожжевой гексокиназой. Глюкозамин-6-фосфат осаждают сернокислым цинком и гидроокисью бария и вновь определяют оставшийся аминосахар. Однако Джонстон [239] показал, что глюкозамин-6-фосфат не осан дается количественно в этих условиях он модифицировал метод, применив отделение галактозамина перед определением на дауэксе-50. [c.217]

В противоположность ферментам из мозга и дрожжей, обладающим низкой специфичностью, гексокиназа (КФ 2.7.1.8), обнаруженная в глистах S histosonia mansoni, проявляла специфичность для в-глюкозамина, а три другие киназы из этого же источника проявляли специфичность при фос-форилировании в-глюкозы, в-фруктозы и в-маннозы соответственно [35]. [c.275]

РИС. 2.30. Третичная структура гексокиназы А из дрожжей, нарисованная на электростатическом графопостроителе с помощью ЭВМ. Показаны все атомы, кроме атомов водорода. Последние учитывали путем увеличения радиуса более тяжелых атомов, к которым они присоединены. А. Нативная гексокиназа и ее субстрат — глюкоза (цветная молекула). Б. Комплекс гексокиназы с глюкозой. Обратите внимание на изменение структуры фермента, вызванное связыванием глюкозы. Фермент так окружает молекулу глюкозы, что для освобождения связанного лиганда необходимы конформа-ционные изменения структуры фермента. (Рисунок предоставлен Т. Стейием.) [c.98]

Данные о симметрии весьма важны при описании субъединичных структур. Однако при очень подробном исследовании могут наблюдаться небольшие, но важные в функциональном отношении отклонения от строгой симметрии даже для номинально идентичных субъединиц. Это может проявляться в виде небольших трансляционных сдвигов одной из субъединиц в четвертичной структуре или в некоторых неэквивалентных изменениях в третичной структуре. Хотя большинство белков, состоящих из множества субъединиц, образует симметричную систему, мы не можем а priori установить, что для этого требуется. Например, гексокиназа, выделенная из дрожжей, состоит из двух тождественных субъединиц, образующих димер без точечной симметрии два ее мономера связаны друг с другом винтовой осью, но геометрия их такова, что спиральная цепочка из многих субъединиц не образуется (рис. 2.46). [c.129]

РИС. 2.46. Структура гексокиназы из дрожжей, полученная при низком разрешении. Две субъединицы связаны винтовой осью. Многогранник в правой субъединице представляет собой глюкозу. (Рисунок предоставлен Т. Стейцем.) [c.130]

Рис. 29.4. Гель-фильтрация 1 мл неочищенного экстракта дрожжей па ко/шике с ультрагеле.ч Ас А 44 элюент-0,2 М раствор Трис H l Л- 0,0133 М Mg 2, pH 7,8 скорость потока 0,75 мл/мин. Для анализа на ферментно.и термисторе с гексокиназой (пунктирная линия) выходящий из колонки поток смешива.т с раствором субстрата, содержащи.н 0,54 М глюкозы и 0,011 М АТР, скорость потока составляла 0,2 мл/мин [И]. (Приведено с разрешения издательства A ademi Press, Ор.гандо, Ф.юрида, США.)

В природе обнаружено более двух десятков индивидуальных фосфотрансфераз, переносящих остатки фосфорной кислоты с АТФ на те или иные моносахариды. Молекулы многих из них, как выяснено в последнее время, построены из 2 субъединиц. Так, гексокиназа из дрожжей при М = 102 ООО состоит из 2 субъединиц с М = 51000 каждая и обнаружено 2 ее изозима галактокиназа из эритроцитов человека при М = 53000—из 2 субъединиц по 27000 каждая рибулокиназа из кишечной палочки при М = 98 ООО—из 2 субъединиц по 50000 каждая и т. п. Изучение третичной структуры субъединицы [c.337]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология