Тетрануклеотиды

Фиг. 14. Разрушение тетрануклеотида диэстеразой змеиного яда с образованием нуклеозида, содержащего основание Н1, нуклеозид-5 -монофосфатов, содержащих основания Кг и Кз, и нуклеозид-3, 5 -дифосфата, содержащего основание К4.

Рис. 26. Ферментативный я щелочной гидролиз тетрануклеотида

При помощи энзиматических препаратов, например из поджелудочной железы, а также путем осторожного гидролиза нуклеиновые кислоты можно расщепить до тетрануклеотидов, динуклеотидов и других низших продуктов распада. [c.1048]

Длина молекулы. С уменьшением молекулярного веса полинуклеотида величина его Гщ понижается >47-15 д от эффект исследовался на природных и синтетических полинуклеотидах и особенно четко проявляется в случае коротких олигомеров. Так, например, при взаимодействии поли-А и поли-и в присутствии ионов магния в ОгО при р07 тетрануклеотиды образуют комплекс с [c.264]

Рис. 15. Хроматографическое разделение фракций три- и тетрануклеотидов на целлюлозе [41] (рис. 20).

Фиг. 15. Щелочной гидролиз тетрануклеотида с образованием нуклеозид-3, 5 -дифосфа-та, содержащего основание Кь двух нукпеозид-З -монофосфа-тов, содержащих основания Кг и Кз, и нуклеозида, содержащего основание К4.

При изучении нуклеиновых кислот использовали главным образом протонный магнитный резонанс (ПМР), основанный на магнитных свойствах атомов водорода. В двух изящных работах Тсо и др. (Тso et ah, 1969, 1970) описано изучение ди- и тринуклеотидов при помощи спектроскопии ПМР. Полученные спектры свидетельствуют об очень сильном взаимодействии между магнитными полями соседних оснований, что позволяет получить информацию не только о последовательности, но и о конформации. Как и в случае ДОВ и КД, возможности ПМР, по всей вероятности, ограничены три- и тетрануклеотидами. [c.220]

Во избежание циклизации образующихся олигонуклеотидов в реакци-онную смесь добавляют определенное количество регулятора молекул лярной массы (см. с. 150) — нуклеотида с защищенной, например ацети-лированной, гидроксильной группой. Такой нуклеотид как бы обрывает реакционную цепь наращивания олигонуклеотидов и делает невозможной ее циклизацию. Таким образом были синтезированы различные олигонуклеотиды со степенью полимеризации 15. При конденсации не мононуклеотида, а ди- или тетрануклеотидов различного строения получаются блоколигонуклеотиды , построенные из блоков, каждый из которых содержит различные нуклеотиды. [c.366]

В 1928 г. на клетках Diplo o us pneumoniae были выполнены важные эксперименты, результаты которых показали, что генетическая информация, контролирующая свойства капсульных полисахаридов (гл. 5, разд. Г), может передаваться от одного штамма бактерий к другому. Согласно этим экспериментам, какое-то вещество, присутствующее в убитых клетках и бесклеточных экстрактах, стабильно изменяет свойства капсул, подвергнутых воздействию этого вещества. Данное явление, получившее название трансформация бактерий, много лет оставалось загадкой. В то время когда были выполнены эти эксперименты, не было даже и намека на генетическую роль нуклеиновых кислот, которые воспринимались всеми как довольно странный материал. Более того, к тому времени еще не была доказана ковалентная природа связей в нуклеиновых кислотах. Широко было принято представление о тетрануклеотиде как о повторяющейся единице какого-то регулярного полимера. Обычно считалось, что гены имеют белковую природу. [c.183]

Во-первых, при исследовании полимерной структуры ДНК были выяснены такие подробности, которые не могли быть объяснены гелеобразной агрегацией тетрануклеотидов. Ее физические свойства соответствовали свойствам, которые можно ожидать для палочкообразной молекулы, чья длина превышает толщину на фактор, значение которого возрастало от 300 до 700 по мере улучшения качества препаратов ДНК [26]. Гуланд обнаружил, что разнообразие биологической специфичности, проявляемой ДНК, требует большей вариабельности структуры нуклеиновой кислоты, чем та, которую можно обеспечить повторением тетрануклеотид-ного звена при варьировании только длины молекулы. [c.42]

Детальное исследование термодинамики переходов спираль — клубок проведено а простейших моделях — на олигорибоадени-ловых кислотах [111, 112]. При низких pH олигоаденины образуют двойные спирали, начиная с тетрануклеотида. Возможные модели спаривания тринуклеотидов, предложенные в работе [111], показаны на рис. 8.22. Вообш,е говоря, число разных двойных спиралей с п связанными парами при данной степени полимеризации N равно (N — п1) . Переходы изучались по гипохромному эффекту при 2650 А для М от 6 до 10. Образование двойной спирали из двух цепей характеризуется двумя константами—константой нуклеации р и константой роста спирали S. Константа s = exp(—AH/RT + kS/R). Константа равновесия для перехода две цепи двойная спираль равна [c.518]

Один из способов создания библиотеки ДНК состоит в обработке донорной ДНК рестриктазой, уз-наюшей тетрануклеотиды. Такой рестриктазой является БаиЗМ, которая вносит один разрыв примерно на 256 пар оснований. Гидролиз проводят в таких условиях, чтобы происходило лишь частичное расщепление, так что образуются фрагменты всевозможных размеров (рис. 4.10). Частичный гидролиз позволяет клонировать целые гены, однако, поскольку сайты рестрикции расположены не случайным образом, некоторые фрагменты могут оказаться слишком крупными для клонирования. В результате в распоряжении исследователя оказьшается неполная библиотека, что может затруднить или даже сделать невозможным обнаружение искомой [c.63]

Рис. 37.20. Рехроматография тетрануклеотидов, полученных в условиях, указанных на рис. 37.19.

К— постоянное число, выведенное на основании молекулярного веса пуринов (аденина и гуанина), миллимо-лярной экстинкции и их процентного содержания в молекуле условного тетрануклеотида /С= 11,32 (если для осаждения пуринов берут половину объема гидролизата). [c.39]

Подобно этому в результате пз,елочного гидролиза тетрануклеотида, изображенного на фиг. 15, образуется нуклеозид, содержащий с правого конца цепи. При помощи хроматографии этот нуклеозид мОуКно выделить из смеси нуклеотидов, также образующихся нри гидролизе. Таким путем можно качественно и количественно определить концевые группы и рассчитать длину цепи. Рассмотрим несколько более сложный пример. Рибонуклеа-за (стр. 84) действует на тетрануклеотид (фиг. 16), у которого концевой циклический пурин-2, З -фосфат связан через С-5 с предпоследним остатком пиримидиннуклеотида. При этом отщепляется циклический нуклеотид, который можно идентифицировать хроматографически. Такого рода циклические пурин-нуклеотиды в отличие от соответствующих пиримидиновых производных не подвергаются дальнейшему действию фермента. [c.51]

Стехелин и сотр. [162] частично деполимеризовали рибонуклеиновую кислоту из дрожжей при помощи рибонуклеазы поджелудочной железы. Затем пропускали образец через колонку длиной 30СМС диэтиламинозтилцеллюлозой и вымывали раствором бикарбоната аммония, постепенно повышая концентрацию аммиака. На элюентной кривой получается двадцать один пик не полностью разделенных компонентов. Первые тринадцать из них идентифицировали как нуклеотиды состава Ц, У, АЦ,, АУ, ГЦ, ГУ 4 ААЦ, ААУ, ГАЦ, АГЦ, ГАУ, АГУ, ГГЦ и ГГУ, где использованы следующие обозначения А — аденин, Г — гуанидин, У — уридин и Ц — цитидин. Последние восемь пиков на хроматограмме принадлежали, по-видимому, неидентифициро-ванным тетрануклеотидам. [c.335]

Одной из важных характеристик различных типов нуклеиновых кислот является состав входящих в них компонентов. Результаты многочисленных анализов состава нуклеиновых кислот, проведенных в конце сороковых — начале пятидесятых годов, послужили решающим аргументом, позволившим отбросить старое представление о нуклеиновых кислотах как тетрануклеотидах или полимерах, содержащих повторяющиеся тетрануклеотидные последовательности. Эти данные подготовили почву для создания современных представлений о макромолекулярной структуре ДНК. [c.58]

Сравнение их нуклеотидного состава и состава исходного олигонуклеотида позволяет однозначно заключить, что З -конец цепи ЬУ1И имеет структуру —ОрАрОри. Структура тетрануклеотида ЬХП может быть в данном случае однозначно написана на основании результатов определения З -концевой группы (см. стр. 44), так [c.67]

Для тринуклеотидов строение однозначно вытекает из определения концевых нуклеотидных остатков (см. стр. 44). Строение полинуклеотидов большей длины может быть в некоторых случаях установлено однозначно перекрестным расщеплением эндонуклеазой другой специфичности, как это показано ниже для одного из тетрануклеотидов, выделенного при расщеплении аланиновой тРНК пиримидил-РНК-азой [c.73]

Некоторые олигонуклеотиды наиболее удобно получать расщеплением соответствующих полимеров. Это относится к гомогенным олигорибонуклеотидам, легко получаемым кратковременным щелочным гидролизом соответствующих гомогенных полирибонуклеотидов, а также к олигорибонуклеотидам типа (Хр) Ур, которые легко получить, расщепляя продукт полимеризации ррХ и ррУ (под действием полинуклеотидфосфорилазы) нуклеазой, специфичной к остатку Ур. (Здесь X и V — остатки нуклеозидов.) Ряд ди-, три- и тетрануклеотидов может быть достаточно легко выделен из продуктов расщепления РНК под действием РНК-аз. [c.103]

Электрофорез на бумаге с последующей хроматографией на бумаге представляет удобный метод разделения присутствующих в рибонуклеазных гидролизатах нуклеотидов и олигонуклеотидов (вплоть до тетрануклеотидов) [163]. Разделение, идентификация и количественное определение этих фрагментов дает некоторую информацию [c.392]

При обработке РНК вируса табачной мозаики РНК-азой Т1 освобождается в виде мононуклеотида около 26,9% общего содержания гуанина таким образом, такое количество гуаниловых нуклеотидов содержится (как полагают) в нуклеиновой кислоте в виде участков из двух или более гуаниловых остатков [173]. Образуются также ДИ-, три- и тетрануклеотиды с гуанозин-3 -фосфатом на конце. Однако независимое определение гуанозин-З -фосфата и гуанозин-2, З -циклофосфата, выделяющихся при действии очищенной РНК-азы Т1 на РНК вируса табачной мозаики, показало, что освобождается около 55,7% общего содержания гуанина (по сравнению с теоретическим значением 24,0% при расчете на беспорядочное распределение оснований) [174]. При подобной обработке дрожжевой РНК выделяется 48,7% общего содержания гуанина при беспорядочном распределении оснований надо ожидать только 27,5%. Однако приводится также значительно более низкая величина процента выделения [559]. Фракционирование на ЭКТЕОЛА-целлюлозе пуриновых олигонуклеотидов (содержащих на конце пиримидиновый нуклеотид) из гидролизатов РНК панкреатической рибонуклеазой показало, что продукты более высокого молекулярного веса особенно богаты остатками гуаниловой кислоты, т. е. действительно имеются цепочки из остатков гуаниловой кислоты [175]. [c.394]

К 1939 г. стало ясно, что молекулярный вес дезоксинуклеиновой кислоты сильно зависит от различий в методах выделения, поэтому тетрануклеотидная теория была соответствующим образом модифицирована. Однако ошибочная концепция минимальной повторяющейся тетрануклеотидной единицы, содержащей четыре основания в определенном порядке, продолжала существовать, и лищь с появлением достаточно точных и простых аналитических методов термин тетрануклеотид полностью потерял свое прежнее значение. [c.420]

Рассмотрение стереохимических данных говорит о том, что образование циклодинуклеотидов через промежуточный триэтерифицированный 2, 3 -циклический фосфат маловероятно, а вероятность образования циклических три- и тетрануклеотидов еще меньше. Кроме того, при полимеризации использовали очень концентрированные растворы, что еще больше уменьшало возможность образования циклических олигонуклеотидов. Такие соединения не были [c.492]

Цепи нуклеиновых кислот следует себе представлять продолженными в обе стороны. При этом они вовсе не состоят из каких-либо субединиц (например, тетрануклеотидов, как это полагали в прежние времена). Мы изобразили на схемах условно четыре звена каждой цепи, чтобы показать существующие типы мономерных звеньев ДНК и РНК. На самом деле канчдая цепь ДНК образована десятками тысяч мономерных звеньев нуклеотидов, которые относятся все к указанным типам, но чередуются вдоль цепи весьма разнообразно. [c.203]

Как видно из цифр таблицы, полученные данные не согласуются с предположением о том, что нуклеиновые кислоты являются полимерами тетра- или пентануклеотидов. Лишь некоторые из этих цифр близки к соответствующим величинам (0,250 — для тетрануклеотида и 0,200—-для пентануклеотида), большинство же цифр отклоняется от них весьма значительно. В связи с этим было выдвинуто предположение о том, что макро-молекулярные нуклеиновые кислоты представляют собой статистические тетрануклеотиды , в которых пуриновые и пиримидиновые основания расположены более или менее случайно [256]. При ферментативном гидролизе было найдено, что пиримидиновые основания отщепляются гораздо быстрее, чем пуриновые. Это дало повод заключить, что пуриновые основания находятся главным образом в центре молекулы нуклеиновых кислот [277—279]. Было также установлено, что аденин и цитозин, входящие в состав нуклеиновых кислот, способны подвергаться дезаминированию и, следовательно, содержат свободные аминогруппы [280]. Эти группы могут также реагировать с ипритом, образуя тиазановые кольца [281] [c.262]

Этот н в принцип лежит в основе разделения олигонуклеотидов с помощью хроматографии на ДЭЛЭ-бумаге. Однако при этом нельзя использовать солевой градиент, что создает дополнительные ограничения при разделении олигонуклеотидов по длине. Ионную силу буфера подбирают в зависимости от величины разделяемых фрагментов. При использовании буферных растворов с высокой hohhoii силой низкомолекулярные соедц-нения движутся вместе с фронтом растворителя. В буферных растворах с низкой ионной силой высокомолекулярные вещества остаются на старте. При использовании 0,2 М ацетата аммония с pH 7,5 в 7 Л/ мочевине происходит удовлетворительное разделение [9] всех типов фрагментов (от нуклеозидов до тетрануклеотидов). Несмотря на несколько ограниченные возможности, хроматография на бумаге имеет существенное преимущество перед колоночной хроматографией с бумаги удалить мочевину значительно проще, чем с колонок. [c.14]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология