Метод Лоури

Определение белка. Для определения белка используют метод Лоури (с. 81). При спектрофотометрическом измерении определяют оптическую плотность при 280 нм и рассчитывают концентрацию с помощью коэффициента Л им =9,0. [c.217]

Определение белка по методу Лоури [c.31]

Определение концентрации белка проводят методом Лоури (с. 81). При спектрофотометрическом определении для расчета используют коэффициент Л ° 1см=10,2 при 280 нм. [c.240]

С экстрактом проделывают цветные реакции (см. работы 5—8) и определяют в нем концентрацию белка методом Лоури (см. работу 12). [c.6]

Реактивы для определения белка по методу Лоури (с. 81), [c.82]

Концентрацию белка определяют по градуировочному графику (обычно с небольшими отклонениями от линейной зависимости), построенному с помощью подходящего стандартного белка. Разные белки дают заметно различающиеся величины поглощения в методе Лоури - Фолина, отчасти это зависит от содержания тирозина и триптофана. [c.466]

Колориметрия растворимых белков по методу Лоури проводится следующим образом. 1 мл раствора белка смешивают с 5 мл реактива В и оставляют стоять при комнатной температуре в течение 10 мин. Затем быстро прибавляют 0,5 мл раствора Г и интенсивно перемешивают (в течение 1—2 с). Спустя 30 мин измеряют величину экстинкции при 500 нм (если концентрация белка достаточно высока) или при 750 нм (в случае низкой концентрации белка). В качестве стандарта используют растворы сывороточного альбумина быка или человека в концентрации 0,02—0,5 мг/мл. Реактив В готовят, смешивая 50 мл раствора А (2%-ный раствор углекислого натрия в 0,1 н. гидроокиси натрия) и 1 мл раствора Б (0,5%-ный раствор Си504Х Х5НгО в 1%-ном цитрате натрия или 1%-ном тартрате калия). Реактив Г представляет собой разведенный до конечной концентрации кислоты реактив Фолина—Чокальто. [c.455]

Реактивы для определения концентрации белка методом Лоури (с. 81). [c.220]

Пептиды и белки обладают сильным избирательным поглощением в области 210—220 нм. Однако при этом нельзя работать в буферных растворах, включающих карбонил со держащие соединения. Еще более чувствительным является определение пептидов при 192—194 нм, однако при измерении в этой области можно использовать лишь водные растворы фторидов щелочных металлов. По этой причине спектрофотометрическое определение белков в области ниже 210 нм используется крайне редко (лишь в специальных случаях ГПХ). По чувствительности определение белков при 210 нм сопоставимо с колориметрическим методом Лоури, Например, сывороточные белки определяли в концентрации 2 мкг/мл [79]. Поглощение при 210 нм характерно для пептидной связи, и, следовательно, белки имеют одинаковые коэффициенты экстинкции (табл. 35.8). [c.457]

Метод Лоури приблизительно в 100 раз чувствительнее биуретового метода и в 10—20 раз спектрофотометрического метода измерения концентрации белка по поглощению света с длиной волны около 280 нм (ультрафиолетовая область). С помощью метода Лоури можно определить количество белка в растворе, если его содержание составляет 10—20 мкг в 1 мл, [c.20]

Несмотря на высокую избирательность метода Лоури, имеется ряд химических соединений, мешающих количественному определению белка данным фотометрическим методом. К ним относятся, например, мочевина, сульфат аммония, гексамины, некоторые углеводы и т. д. Однако эти вещества оказывают заметное влияние на фотометрическую реакцию лишь прп больших концентрациях, значительно превышаю- [c.37]

Концентрацию белка определяют методом Лоури, растворяя везикулы СР в 1%-ном растворе дезоксихолата Ыа. [c.359]

В связи с тем, что присутствие в растворе хлорида калия мешает количественному определению белка по методу Лоури, эту соль из препарата белка необходимо удалить. Для этого к 1 мл экстракта добавляют 2 мл 10%-ного раствора ТХУ, что приводит к осаждению белков. Полученную суспензию центрифугируют при 4000 об/мин 10 мин. Надосадочную жидкость очень тщательно удаляют. Края пробирок вытирают фильтровальной бумагой. К осадку прибавляют 10 мл 0,1 моль/л раствора гидроксида натрия. Раствор перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения осадка. Для определения концентрации белка по методу Лоури берут 0,1 мл щелочного раствора белка. [c.6]

Определение концентрации белка в препарате СУР. 40 мкл препарата СУР растворяют, добавляя 80 мкл буфера VII, содержащего однопроцентный раствор тритон Х-100. Содержание белка измеряют по методу Лоури (с. 81) с модификацией, применяемой для определения белка в растворах тритона Х-100. В этом случае в раствор карбоната натрия, использующийся для определения, добавляют додецилсульфат натрия до конечной концентрации 0,3%. Далее определение ведется обычным способом Измеряют содержание белка в 20 мкл разведенного препарата СУР. [c.425]

В полученном растворе гемоглобина измеряют концентрацию белка методом Лоури (см. работу 12). Для этого 1 мл раствора гемоглобина разбавляют до 100 мл в мерной колбе физиологическим раствором. Для определения берут 1 мл разбавленного раствора. [c.8]

Оформление работы. Принцип метода Лоури, схему опыта, калибровочный график и расчеты записывают в рабочую тетрадь. [c.22]

С фильтратом проделывают цветные реакции и определяют концентрацию белка. Для определения концентрации белка по методу Лоури 1 мл исходного раствора белка переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл. Объем жидкости в колбе доводят дистиллированной водой до метки. I мл разведенного раствора белка используют для количественного определения содержания белка. [c.10]

Какой метод более чувствителен биуретовый или метод Лоури [c.23]

Метод Лоури в настоящее время получил наибольшее распространение вследствие высокой чувствительности метода и простоты выполнения. Метод основан на образовании окрашенных продуктов синего цвета, образующихся в результате двух самостоятельных реакций [c.20]

С другой стороны, метод Лоури менее специфичен, чем биуретовый, поскольку на интенсивность окраски влияют многие вещества, которые могут содержаться в тканях или в буферных системах, применяемых в биохимических исследованиях. [c.20]

На каких реакциях основано количественное определение белка биуретовым методом, методом Лоури [c.23]

Определение белка. Для определения концентрации белка методом Лоури необходимо предварительно осадить его трихлоруксусной кислотой (с. 81). Спектрофотометрическое измерение можно проводить при условии, когда из раствора фосфорилазы удален АМФ, при этом отнощение Л260М280 равно 0,52—0,55 для расчета используют коэффициент А ° 1см= 13,2 при 280 нм. [c.221]

Определение белка. Для определения концентрации фосфоглюкомутазы используют метод Лоури (см. с. 81). При спектрофотометрическом измерении регистрируют оптическую плотность при 278 нм, учитывая, что Л °А1см=7,0. [c.228]

Регистрацию выхода белков можно вести по УФ-поглощению при 280 нм, но не по поглощению пептидной связи (210—230 нм), так как в этой области сам полибуфер сильно поглощает свет. Полибуфер не мешает окраске белка красителями типа СВВ. Для определения концентрации белка во фракциях можно пспользовать количественные методы, основанные на окрашивании такими красителями. Определение белка по методу Лоури в присутствии пол1[буфера проводить нельзя, так как он связывает ионы меди. [c.336]

В Присутствии примесей, поглощающих в ультрафиолетовой области при 260—280 нм, например компонентов нуклеиновых кислот, определение белков по поглощению при 220 нм идентично колориметрическому методу Лоури. Показано, что при этом можно работать в растворах хлористого натрия, какоди-лата, бората, фосфата натрия и калия, сульфата аммония (при концентрации выше 0,1 М), тогда как концентрация гидроокиси натрия, ацетатов, глицина, трис-буфера не должна превышать [c.458]

Для солюбилизации мембранных белков часто используют неионные детергенты, такие как тритон Х-100, твин-80 и др. Эти детергенты влияют на развитие окраски при определении белка с биуретовым реактивом и методом Лоури. Практически полного удаления детергентов из пробы можно добиться экстракцией их изоамнловым спиртом. [c.82]

Б е л о в П. Применение 18-вольфрамо, молибдено-фосфорного аммония для определения белка по методу Лоури//Лабораториое дело. 1975. № 5. С. 303. [c.88]

Полученные препараты антител диализуют против фосфатного буфера, pH 7,2. Определяют белок по методу Лоури (с. 81) и, если нужно, концентрируют препарат антител (с. 266) до 2—5 мг/мл и хранят при 4°С с добавлением 0,01% NaNa. [c.315]

Метод Лоури в модификации Сяткина используют для определения содержания белка в препаратах с повышенным содержанием липо- и гликопротеидов. [c.31]

Де Фриз[ ] определял плотность углекислого газа, адсорбированного углем при 30° и при различных давлениях, и сравнивал ее со средней плотностью, рассчитанной на основании потенциальной теории. Вычисления производились по методу Лоури и Олмсти-да[ ], рассмотренному в гл. V. При сопоставлении теоретических и опытных данных видно, что гелий не проникает внутрь адсорбированного слоя углекис-.лого газа, если его плотность больше, чем 0,09 г/е. . Для того чтобы теоретические и опытные данные хорошо совпадали между собой, необходимо ввести допущение, что гелий проникал на 10% во внешний слой адсорбированного вещества. [c.569]

Колонка 1,6 смХ4,9 см . Образец 201 мг суммарного белка. Исходный буферный раствор 10 мМ раствор фосфата калия (pH 7,4)+ 1 мМ ЭДТА. Градиент 400 мл 100 мМ раствора фосфата калия (pH 7,4) + 10 мкМ ЭДТА—.400 мл 10 мМ раствора фосфата калия. Градиентное элюирование проводили после удаления из колонки сопутствующих ферментов и белков. Концентрацию белка устанавливали методом Лоури [52], Ферментативную активность определяли при 25 °С по методике, приведенной в работах [53, 54]. [c.15]

Рис. 119. Спектрограмма, получаемая по методу Лоури и Олсопа (схема).

Метод Обреимова несколько проще, чем описанный выще метод Лоури и Олсопа, дает примерно такую же точность, но требует значительно большего количества образца. [c.249]

Для определения содержания белка в растворах широко используются фотометрические методы анализа [1, 2]. В ряде случаев возможно определение белка по собственному поглощению при длинах волн 220 и 280 нм [1]. Более селективным является фотометриро вание окрашенных комплексов белка, полученных по различным реакциям ксантопротеиновой, биуретовой и реакции Лоури [2, 3]. Среди них наиболее специфичной и чувствительной является реакция Лоури, в которой белок вступает во взаимодействие с реактивом Фолина [4] в сочетании с биуретовой реакцией. Именно сочетание этих двух фотометрических реа1кций (реакция на пептидные связи и на обязательные ароматические аминокислоты белка) делает метод высокочувствительным и избирательным, т. е. позволяет его использовать для определения белка в сложных смесях. По данным [5], метод Лоури чувствительнее метода, основанного на биуретовой реакции, в 100 раз, а в сравнении с методом определения по собственному поглощению — в 10—20 раз. [c.37]

При определении лейцинаминопептндазы и трипсина, ковалентно связанных с сефарозой, Кельш и др. [41] сопоставили пять методов определения связанных белков 1) основанный на балансе белка перед и после связывания 2) аминокислотный анализ после кислотного гидролиза 3) модифицированный метод Лоури 4) спектрофотометрический и 5) флуориметрический. Преимущество двух последних методов, которые они исследовали детально, состоит в том, что эти методы не приводят к разрушению геля. Как и метод Лоури, они характеризуются простотой, низким пределом обнаружения и высокой воспроизводимостью. [c.244]

Другим колориметрическим методом определения белков является метод Лоури и др. [49]. Хейвкес и др. [31] применили его [c.249]

Количественно Б. можно определить 1) по общему азоту методом Къельдаля — кипячением Б. в конц. серной к-те. Полученный сульфат аммония обрабатывают щелочью, а освобождающийся аммиак поглощают титрованной H2SO4 2) колориметрически — по методу Лоури (сочетание биуретовой реакции на пептидные группы с реакцией на остатки ароматич. аминокислот). В лабораторной практике при необходимости серийных определений количества Б. в р-рах широко пользуются спектрофотометрией при 280 нм. [c.125]

ПО данным Титова, показана па рис. 53. Среднее отклонение экспериментальных точек от вычисленной кривой составляет 4,53% вместо 7Д6% по кривой Берени. Однако Берени применил для вычисления характеристической кривой только одну изотерму, так что улучшение результатов может быть лишь частично приписано методу Лоури и Олмстида. [c.155]