Динитрофенильные ДНФ производные аминокислот

Идеальным носителем является носитель, инертный по отношению к разделяемым веществам. Однако получение таких носителей связано с рядом технических трудностей, поэтому область применения распределительной хроматографии на колонках невелика и ограничивается разделением органических кислот, дубильных веществ, динитрофенильных производных аминокислот и др. [2—6]. [c.74]

Набор 2,4-динитрофенильных производных аминокислот (малый) [c.582]

Набор 2,4-динитрофенильных производных аминокислот (большой) [c.582]

ДИНИТРОФЕНИЛЬНЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ АМИНОКИСЛОТ [c.113]

Обнаружение вещества непосредственно на столбике носителя представляет собой наиболее простой и удобный метод. Если сами вещества окрашены, как, например, динитрофенильные производные аминокислот или органические красители, то их наблюдение не представляет никаких затруднений, так как в настоящее время применяют только бесцветные носители. Так же как и при адсорбционной хроматографии, наблюдение можно вести в ультрафиолетовом свете. Однако необходимо иметь в виду что флуоресценция иногда может быть вызвана присутствующими загряз нениями, в то время как сами разделяемые вещества остаются невидимыми [c.460]

По другому способу на свободную аминогруппу в дипептиде действуют динитрофторбензолом [127] (см. также стр. 473), а полученное производное гидролизуют способом, описанным выше. Остаток гидролизата после упаривания на бумажной хроматограмме дает пятно аминокислоты, которая была связана в дипептиде своей аминогруппой, и пятно динитрофенильного производного аминокислоты, которая была связана в дипептиде карбоксильной группой. Существует еще несколько аналогичных способов,позволяющих найти последовательность аминокислот в молекулах пептидов с применением хроматографии на бумаге. [c.480]

Динитрофенильные производные аминокислот [c.482]

Радиоизотопный анализ производных жирных и желчной кислот, приготовленных с использованием и разделенных методом хроматографии на бумаге, осуществляли путем непосредственного измерения радиоактивности пятен хроматограммы [91, 94, 95] или путем приготовления из бумажной хроматограммы авторадиограммы и последующего измерения интенсивности хроматографических зон с помощью записывающего микрофотометра [92, 93]. Использовали и жидкостные сцинтилляционные счетчики в комбинации с жидкостной колоночной хроматографией [96]. При использовании жидкостного сцинтилляционного счетчика в комбинации с тонкослойной хроматографией чувствительность метода, в котором применяется для определения динитрофенильных производных аминокислот [97], возрастала в сто раз, достигая 1 пМ 98] при воспроизводимости результатов d=6%. Анализируя аналогичным методом смеси кислот известного состава, можно идентифицировать анализируемые кислоты и оценить их количества. Определенным преимуществом диазометана является отсутствие пространственных эффектов при проведении вышеуказанных реакций. [c.154]

Методика 25. Получение 2,4-динитрофенильных производных аминокислот [c.281]

Динитрофенильные производные аминокислот относительно устойчивы при кислотном гидролизе это свойство и другие особенности этих производных дают возможность использовать их для определения N-концевых групп белков и пептидов. [c.35]

Ниже приведены два примера такого химического модифицирования. Первый — это получение динитрофенильных производных аминокислот [2]. Для очистки продукта обычно применяется хроматография на силикагеле. Динитрофенильные производные аминокислот имеют максимумы поглощения вблизи D-линии, причем при D-линии наблюдается высокая оптическая активность [3]. [c.266]

Динитрофенильные производные аминокислот получаются по следующей методике. Образец, содержащий 100 мг аминокислоты, растворяют в 5 мл 5%-ного водного раствора соды. Добавляют 16 мл спиртового раствора, содержащего 210 мг2,4-ди-нитрофторбензола, и смесь перемещивают в темноте в течение 3 ч. Затем реакционную смесь концентрируют в вакууме и остаток экстрагируют водой. Водную вытяжку экстрагируют 3 раза эфиром. Затем водный слой подкисляют 6 н. НС1 и вновь трижды экстрагируют эфиром. Эфирные экстракты объединяют и промывают водой. Эфирный раствор высущивают над сульфатом натрия и после удаления эфира в вакууме получают сырое динитрофенильное производное аминокислоты. [c.266]

Очистка его производится следующим образом. Сырое динитрофенильное производное аминокислоты растворяют в небольшом количестве метанола. Затем применяют тонкослойную хроматографию в препаративном режиме на силикагеле Н с элюентом хлороформ — метанол — уксусная кислота (95 5 1). [c.266]

Фракцию, содержащую динитрофенильные производные аминокислоты, собирают и экстрагируют метанолом. После удаления метанола выпариванием в вакууме получают чистое динитропроизводное аминокислоты. Для измерения оптического вращения очищенное соединение растворяют в 1%-ном растворе соды и оптическое вращение измеряют при 550 нм. [c.267]

Применение. Обнаружение 2,4-динитрофенильных производных аминокислот или ароматических аминов. [c.263]

Для первой приведенной в таблице реакции степень асимметрического синтеза определена по продукту 38, выделенному методом хроматографии [30] для других реакций исследовалось динитрофенильное производное аминокислоты 3, выделенной после гидролиза 38 [331. [c.371]

Динитрофенильные производные аминокислот и аминоспиртов [c.87]

Динитрофенильные производные аминокислот разрушаются на свету, поэтому все операции с ними проводят в темноте. [c.72]

Рис. 415. Зависимость величины R динитрофенильных производных (ДНФ) аминокислот от pH колонки.

Величины динитрофенильных производных (ДНФ) аминокислот [c.473]

В некоторых случаях полезно бывает перевести аминокислоты в какие-либо производные, которые легче разделяются ил,и легче затем определяются, например в динитрофенильные производные, окрашенные в желтый цвет, или производные, содержащие радиоактивный атом, чаще всего иод или серу. [c.482]

К расщеплению по типу замещения относится также избирательное отщепление Ы-концевых аминокислот полипептидов п виде динитрофенильных производных (реакция СЭНГЕРА) [c.328]

Эта метка является хромофорной группой благодаря наличию в ней протяжённой системы сопряжённых связей,, поэтому аминокислота, несущая метку, становится окрашенной в отличие от остальных аминокислот. При последующем гидролизе меченого пептида аминная связь 2,4-динитрофенильной группы с пептидом не затрагивается, и в образовавшейся смеси аминокислот только К-концевая кислота оказывается меченой. Анализ гидролизата с помощью тонкослойной хроматографии позволяет однозначно идентифицировать N-концевую аминокислоту путём сравнения хроматографической подвижности окрашенного пятна из гидролизата с подвижностями заведомых 2,4-ДНФ-производных аминокислот. [c.56]

Вследствие тенденции метильных групп к подаче электронов заряд на азоте диметиламинокислот несколько повышен, амфотерные свойства их выражены столь же ярко, как и у самих аминокислот. Разделение их методами электрофореза и хроматографией менее четко, чем разделение динитрофенильных производных аминокислот. Диметильные производные аминокислот не имеют широкого применения при исследованиях строения пептидов. [c.511]

При этом анализу подвергают отщепляющуюся аминокислоту или непосредственно ее фенилтиогидантоин. Указанный принцип положен в основу работы секвенсоров, автоматически определяюш их аминокислотную последовательность в пептидных фрагментах, получаемых ферментативным расщеплением исследуемых белков. По Сэнджеру концевую аминогруппу П. маркируют 1-фтор-2,4-динитробензолом, подвергают П. гидролизу и определяют динитрофенильные производные аминокислот. С-Концевую аминокислоту можно отщепить с помощью карбоксипептидазы. Используют также полный гидразиполиз пептида. При этом все аминокислоты, кроме С-концевой, выделяются в виде гидразидов. Применяют также масс-спектрометрич. определение аминокислотной последовательности в П. Сведения об оптич. чистоте П. могут быть получены исследованием их атакуемости природными ферментами. [c.15]

Свойства. Бледно-желтые кристаллы, легко плавящиеся в желтоватую пр )-зрачнуга жидкость. Температура плавления 25—26 С. Растворим в этилойф спирте, диэтиловом эфире, бензоле, ацетоне, пропиленгликоле, плохо растворам в воде. Взаимодействует с концевыми а-аминогруппами аминокислот и с е ам) ногруппой лизина, образуя динитрофенильные производные аминокислот, окрашенные в ярко-желтый цвет. [c.139]

Абдергальден и Стикс [131] впервые получили динитрофенильные производные аминокислот при кипячении щелочных растворов аминокислот с 1-хлор-2, 4-динитробензолом. Соответствующее фторпроизводное, рекомендованное Сангером [132, 133], реагирует с аминокислотами в растворе бикарбоната при комнатной температуре и потому практически более удобно. Все N-динитрофенильные производные аминокислот скрашены в желтый цвет, что облегчает их идентификацию на хроматограммах. Некоторые аминокислоты реагируют более чем с одним молем реагента так, в реакцию с 1-фтор-2,4-динитробензолом вступают как а-, так и со-аминогрупны лизина и орнитина, имино-азот гистидина, фенольная группа тирозина и сульфгидрильная группа цистеина. Поэтому перечисленные аминокислоты образуют бис-динитрофенильные производные. [c.35]

С-концевых аминокислот в этих соединениях Продукты реакции восстановления в среде Л/ -этилморфолина гидролизуются кислотой и полученные аминокислоты, а также аминоспирты, образовавшиеся из С-концевых аминокислот, разделяются с помощью бумажной хроматографии [1093, 1094]. Определение аминоспиртов методом бумажной хроматографии с помощью нингидрина как проявителя в смеси со значительно большими количествами различных аминокислот представляет значительные трудности. Однако можно провести разделение обоих компонентов, если продукты гидролиза обработать динитрофторбензолом согласно методу Зангера. При этом образуются Л/ -динитрофенильные производные аминокислот и аминоспиртов. Л/ -динитрофенильные производные аминоспиртов извлекаются из водных растворов щелочей диэтиловым эфиром, тогда как соответствующие производные аминокислот остаются в водной среде [1206, 1611]. [c.454]

Патаки [98] получал динитрофенильные производные аминокислот непосредственно на пластинках перед вторым разделением при двумерной хроматографии. Для этого высушенную пластинку опрыскивали вначале буферным раствором, содержащим 8,4 г бикарбоната натрия и 2,5 мл 1 и. раствора гидроксида натрия на 100 мл раствора, а затем 10 %-ным (масса/объем) раствором фтординитробензола в метаноле. По краям пластинки помещали две полоски полиэтилена, покрывали ее сверху стеклом и полученный таким образом сэндвич нагревали в темноте при 40°С в течение часа. Затем охлаждали и помещали на 10 мин в эфирную баню, после чего высушивали. Патаки и сотрудники опубликовали еще две работы [99—100], в которых рассматривается применение этого метода. [c.208]

Гексагелицендикарбоновая кислота (97 Р = СООН) получена в оптически активной форме расщеплением рацемата алкалоидами. Полученную оптически активную кислоту после нанесения на силикагель, в свою очередь, использовали для хроматографического расщепления на оптические антиподы соединений акцепторного характера, например эфиров Л -динитрофенильных производных аминокислот [44]. [c.328]

I динитрофенильное производное аминокислоты, являвшейся N-кoнцeвoй, и смесь сво- [c.338]

С помощью методов, перечисленных выще, можно определять число остатков каждой аминокислоты в изучаемом белке (пептиде), но нельзя установить последовательность их чередования в полипептидной цепи, т. е. ее первичную структуру. Первый метод определения последовательности аминокислотных остатков в пептидах и белках был разработан Ф. Сенгером (1945 г.) и основан на определении Ы-концевых аминокислот. Ф. Сенгер использовал -фтор-2,А-динитробензол (ФДНБ), реагирующий с незаряженной а-аминогруппой с образованием динитро-фенильного производного пептида желтого цвета, которое кислотным гидролизом превращается в динитрофенильное производное аминокислоты [c.58]

Важно отметить, что реакции пептидов и белков с ФДНБ и все последующие операции следует проводить в темноте из-за высокой фоточувствительности фтординитропроизводных аминокислот. Кроме того, необходимо учитывать, что динитрофенильные производное аминокислот разрушаются при кислотном гидролизе. [c.59]

Попытки идентифицировать N-концевой аминокислотный остаток в -кислом гликопротеине из плазмы человека оказались безуспешными [130]. Нативные препараты гликоиротеина и препараты, денатурированные спиртом и эфиром, подвергали динитрофенилированию по методу Портера и Сэнджера [131] и последующему гидролизу кислотой или сульфированной ионообменной смолой, однако при этом динитрофенильные производные аминокислот выделить не удалось. Этот отрицательный результат был подтвержден также с помощью фенилизотиоцианатного метода Эдмана в модификации Френкель-Конрата и Зингера [132]. [c.91]

В основе метода динитрофенилирования лежит реакция свободных ЫНг-групп белка или пептида с 2,4-динитрофторбензолом (ДНФБ) в щелочной среде, при которой образуются соответствующие динитрофенильные производные (ДНФ-производные). В реакцию с ДНФБ, кроме свободных а-ЫНг-групп, вступают также е-ННг-группа лизина, 5Н-группа цистеина, ОН-группы оксиаминокислот и имидазольный гетероцикл гистидина. ДНФ-производное белка или пептида подвергают полному кислотному гидролизу. Ы-концевые ДНФ-амино-кислоты экстрагируют из гидролизатов эфиром, отделяя их от свободных аминокислот и ДНФ-производных по другим функциональным группам аминокислот, которые растворимы в воде. Идентификацию [c.145]

В частности оказалось, что поверхность диатомита хорошо силани-зируется. Мартин впервые на таком силанизированном носителе разделил жирные кислоты [77 позднее на силанизированном диатомите, приготовленном другим способом, удалось разделить динитрофенильные н азо-бензолсульфонильные производные аминокислот, динитрофенилгидра-зоны и т. д. [90]. [c.467]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология